一种林麝香腺细胞的培养基及林麝香腺细胞的培养方法技术

本申请涉及细胞培养技术领域，具体公开了一种林麝香腺细胞的培养基及林麝香腺细胞的培养方法。该林麝香腺细胞的培养基包括DMEM/F12培养基，还包括以下含量的组分：80

【技术实现步骤摘要】
一种林麝香腺细胞的培养基及林麝香腺细胞的培养方法


[0001]本申请涉及细胞培养
，具体涉及一种林麝香腺细胞的培养基及林麝香腺细胞的培养方法。

技术介绍

[0002]林麝是一种生活在亚洲的小型哺乳动物，属于麝科，通常栖息在森林或山地地区，以草、叶、果实和昆虫为食。研究发现，雄性林麝体内的香腺上皮细胞能够分泌香腺素(麝香)，麝香具有开窍醒神，活血通经，消肿止痛的功效，因此常被用于制作香料和药物等。然而，天然麝香的产量极低，每头雄性林麝每年只能产15克左右，因此麝香极其珍贵。
[0003]为了满足市场对麝香的需求，研究人员正在积极寻求通过细胞生物学体外培养获取麝香的方法。然而，利用现有技术配制的培养基分离培养林麝香腺上皮细胞时，存在细胞生长状态较差、传代培养过程中容易出现细胞不定向分化、无法很好地保持干性等问题，严重阻碍了对于林麝香腺细胞生物分子的相关研究以及麝香的应用。

技术实现思路

[0004]为了克服林麝香腺上皮细胞在培养过程中存在的生长状态较差、容易出现细胞分化以及无法保持干性等问题，本申请提供一种林麝香腺细胞的培养基及林麝香腺细胞的培养方法。
[0005]第一方面，本申请提供一种林麝香腺细胞的培养基，采用如下的技术方案：一种林麝香腺细胞的培养基，该培养基包括DMEM/F12培养基，还包括以下含量的组分：80
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120U/mL青霉素、0.08
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0.12mg/mL链霉素、8
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12％胎牛血清、40
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60ng/mL表皮生长因子、80
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120ng/mL成纤维细胞生长因子、0.06
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0.15μg/mL氢化可的松、0.4
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0.6uM/mL TGF
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β抑制剂、1.6
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2.4mM/mL谷氨酰胺和3.5
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6mM/mL乙酰基
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L
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半胱氨酸。
[0006]本申请提供了一种林麝香腺细胞的培养基，该培养基是在DMEM/F12培养基的基础上，通过添加表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、氢化可的松等成分，而获得的一种适用于培养林麝香腺细胞的培养基。利用上述培养基对林麝香腺细胞进行传代培养，林麝香腺细胞的传代效果好、增殖能力强、形态变化小，并且林麝香腺细胞能够很好地保持干性。
[0007]本申请中，成纤维细胞生长因子是一种对细胞生长、增殖以及分化具有调控作用的生长因子，能够参与维持细胞的干性，通过多种信号通路发挥作用从而调控细胞生长。表皮生长因子能够促进林麝香腺细胞的生长与增殖、定向分化。氢化可的松是一种糖皮质激素，是从肾上腺皮质中提取出的肾上腺皮质激素，氢化可的松能够促进林麝细胞脂质合成，维持细胞之间的连接紧密性。本申请通过实验探究发现，表皮生长因子、成纤维细胞生长因子均对林麝香腺细胞的生长及定向分化具有一定的促进作用，而氢化可的松不仅对林麝香腺细胞的增殖的促进作用较小，而且对林麝香腺细胞的分化有一定的抑制作用。然而，本申请通过试验探究发现，将氢化可的松与表皮生长因子、成纤维细胞生长因子共同使用时，林麝香腺细胞的生长与增殖更加显著，同时传代培养过程中的细胞分化较少，说明氢化可的
松与表皮生长因子、成纤维细胞生长因子之间具有协同作用。因此，本申请采用表皮生长因子、成纤维细胞生长因子和氢化可的松制得的培养基，能够使林麝香腺上皮细胞在培养过程中保持良好的生长状态与干性，减少林麝香腺细胞在传代过程中的细胞分化，最终促进林麝香腺细胞的生长与增殖。
[0008]优选地，所述培养基包括DMEM/F12培养基，还包括以下含量的组分：80
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120U/mL青霉素、0.08
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0.12mg/mL链霉素、8
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12％胎牛血清、40
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60ng/mL表皮生长因子、90
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110ng/mL成纤维细胞生长因子、0.08
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0.12μg/mL氢化可的松、0.4
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0.6uM/mL TGF
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β抑制剂、1.6
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2.4mM/mL谷氨酰胺和3.5
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6mM/mL乙酰基
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L
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半胱氨酸。
[0009]在一些具体的实施方案中，所述成纤维细胞生长因子的含量为80ng/mL、90ng/mL、100ng/mL、110ng/mL或120ng/mL。
[0010]在一些具体的实施方案中，所述氢化可的松的含量为0.06μg/mL、0.08μg/mL、0.1μg/mL、0.12μg/mL或0.15μg/mL。
[0011]优选地，所述培养基包括DMEM/F12培养基，还包括以下含量的组分：100U/mL青霉素、0.1mg/mL链霉素、10％胎牛血清、50ng/mL表皮生长因子、100ng/mL成纤维细胞生长因子、0.1μg/mL氢化可的松、0.5uM/mL TGF
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β抑制剂、2mM/mL谷氨酰胺和5mM/mL乙酰基
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L
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半胱氨酸。
[0012]本申请中，所述成纤维细胞生长因子选自FGF2、FGF8、FGF17和FGF18。
[0013]优选地，所述成纤维细胞生长因子为FGF2和FGF8的混合物；FGF2和FGF8的重量比为1：(0.3
‑
0.7)。
[0014]本申请中，FGF2能够维持神经干细胞干性，FGF8、FGF17、FGF18均能够促进细胞的生长增殖与传代。本申请通过试验探究发现，选用重量比为1：(0.3
‑
0.7)的FGF2与FGF8的混合物作为成纤维细胞生长因子，配制的培养基更适用于林麝香腺细胞的传代，使林麝香腺细胞的增殖能力更强。
[0015]第二方面，本申请提供的林麝香腺细胞的培养基在林麝香腺细胞培养中的应用。
[0016]第三方面，本申请提供一种林麝香腺细胞的培养方法，采用如下的技术方案：一种林麝香腺细胞的培养方法，包括以下步骤：消化、细胞制备、原代培养、传代培养；所述原代培养与传代培养采用林麝香腺细胞的培养基。
[0017]优选地，所述消化步骤为：将香囊腺组织样本切成碎片，然后用I型胶原酶在37℃下消化4
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5h。
[0018]本申请中，胶原酶是一种蛋白酶，能够降解天然胶原蛋白和网状纤维，还能够有效水解缔结组织和上皮组织的细胞外基质内的其他蛋白。本申请通过试验探究发现，采用I型胶原酶对林麝香腺组织进行消化，能够将林麝香腺组织中的胶原蛋白分解成小分子，分解得到的小分子可以被林麝香腺细胞充分吸收利用，从而促进林麝香腺细胞生长与代谢。
[0019]优选地，所述细胞制备步骤为：向消化步骤获得的材料中加入DMEM/F12培养基终止消化；所述DMEM/F12培养基中含有10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺和10本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种林麝香腺细胞的培养基，其特征在于，所述培养基包括DMEM/F12培养基，还包括以下含量的组分：80
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120U/mL青霉素、0.08
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0.12mg/mL链霉素、8
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12%胎牛血清、40
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60ng/mL表皮生长因子、80
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120ng/mL成纤维细胞生长因子、0.06
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0.15μg/mL氢化可的松、0.4
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0.6uM/mL TGF
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β抑制剂、1.6
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2.4mM/mL谷氨酰胺和3.5
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6mM/mL乙酰基
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L
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半胱氨酸。2.根据权利要求1所述的林麝香腺细胞的培养基，其特征在于，所述培养基包括DMEM/F12培养基，还包括以下含量的组分：80
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120U/mL青霉素、0.08
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0.12mg/mL链霉素、8
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12%胎牛血清、40
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60ng/mL表皮生长因子、90
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110ng/mL成纤维细胞生长因子、0.08
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0.12μg/mL氢化可的松、0.4
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0.6uM/mL TGF
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β抑制剂、1.6
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2.4mM/mL谷氨酰胺和3.5
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6mM/mL乙酰基
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半胱...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚丛学，廖丹丹，安娴，夏传英，
申请(专利权)人：北京燕麝生物科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：