一种流感减毒活疫苗及其应用制造技术

本发明专利技术适用于病毒学技术领域，提供了一种流感减毒活疫苗及其应用，其中，所述流感减毒活疫苗的非感染性病毒颗粒含量为42.2%

【技术实现步骤摘要】
一种流感减毒活疫苗及其应用


[0001]本专利技术属于病毒学
，尤其涉及一种流感减毒活疫苗及其应用。

技术介绍

[0002]流感病毒（influenzavirus）是一种分节段的负链RNA病毒。在人类中流行的流感病毒主要有甲型（A型）H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒、乙型（B型）流感病毒；其中，乙型流感病毒可分为乙型Yamagata谱系流感病毒和乙型Victoria谱系流感病毒。
[0003]疫苗接种一直都是流感预防第一选择。全球目前市售的流感疫苗以灭活疫苗为主，但是流感灭活疫苗一般仅诱导体液免疫反应，保护性有一定限度。流感减毒活疫苗（Live Attenuated Influenza Vaccine，LAIV）由于具有诱导粘膜免疫、细胞免疫和体液免疫的高效、持久的免疫原性特点，以及鼻喷、无创的优势已经成为流感预防的重要组成部分。
[0004]完整的流感病毒颗粒具有完整的病毒结构，具有感染性、能够复制、能够包装完整的子代病毒颗粒、且能够导致宿主细胞死亡。然而，经过感染宿主细胞收获的病毒群体中存在较多的非感染性病毒颗粒，如结构不完整的颗粒、缺少1个或多个基因节段的颗粒，以及缺损干扰颗粒（defective interfering particle，DIP）等颗粒形式。这些非感染性病毒颗粒在单独感染细胞时，或者由于缺少必要结构而不能感染、或者缺少基因节段导致缺少必要蛋白的表达从而不能包装成完整的子代病毒。
[0005]DIP是非感染性病毒颗粒中的一种主要形式，占非感染性病毒颗粒中的大多数。DIP在病毒界尤其是RNA病毒中很常见。流感病毒DIP通常在至少一个vRNA片段的开放阅读框中间包含一个较大区段的缺失。此外，最近还发现了携带大量点突变的DIP。但DIP的外表是与完整病毒颗粒一样的，包括具备包膜和包膜糖蛋白，所以自身可以经过感染进入细胞，但是由于DIP缺少至少一种有效的基因表达产物，其感染后难以产生子代病毒。
[0006]DIP由于不能自行合成至少一种完整蛋白质，需要与感染性病毒或完整病毒共同感染才能复制和形成子代病毒颗粒。共感染时，DIP会干扰完整病毒基因组的复制，这是由于较短的RNA链的复制速度比全长的链快，而且竞争性的抢夺细胞和病毒蛋白资源，导致包装形成的病毒后代以DIP为主，完整病毒后代很少。
[0007]流感减毒活疫苗的保护原理是在经过鼻喷后，在上呼吸道进行一段时间内的持续性复制，产生较强的免疫反应。但是DIP及其他非感染性病毒颗粒的存在会降低完整感染性病毒的复制水平，理论上降低疫苗的免疫原性。
[0008]有研究发现在美国、欧洲上市的四价无针流感疫苗中含有非常高比例的DIP。Gould等（参考文献Gould PS, Easton AJ, Dimmock NJ. Live Attenuated Influenza Vaccine contains Substantial and Unexpected Amounts of Defective Viral Genomic RNA. Viruses 2017; 9(10).）检测了在美国、欧洲上市的四价无针流感疫苗，发现其中含有大量的DIP，约占总病毒颗粒数的99.75%；然而，目前领域内并没有针对DIP的质量标准，相关的研究和应用也比较少。
[0009]综上所述，目前亟待研发一种预防效果较好的流感减毒活疫苗，以更好地预防流感病毒。

技术实现思路

[0010]本专利技术实施例的目的在于提供一种流感减毒活疫苗，旨在解决
技术介绍
中提出的问题。
[0011]本专利技术实施例是这样实现的，一种流感减毒活疫苗，其非感染性病毒颗粒含量为42.2%
‑
92.3%；所述流感减毒活疫苗的非感染性病毒颗粒含量为非感染性病毒颗粒在总病毒颗粒中的占比。
[0012]作为本专利技术实施例的一个优选方案，所述流感减毒活疫苗的制备方法包括以下步骤：将流感病毒的原始毒株进行稀释后，再接种于鸡胚；接种后收获尿囊液；对尿囊液进行浓缩纯化，得到所述流感减毒活疫苗；其中，通过控制原始毒株稀释后的滴度，和/或控制收获尿囊液的时间，来达到控制流感减毒活疫苗中非感染性病毒颗粒含量的目的；所述流感病毒的原始毒株包括甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒和乙型流感病毒。
[0013]作为本专利技术实施例的一个优选方案，对于甲型H3N2流感病毒，以剂量103~10
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50
/鸡胚接种，32h收获尿囊液；或以剂量10
‑1~10
3 EID
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/鸡胚接种，48h收获尿囊液；对于甲型H1N1流感病毒，以剂量10
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/鸡胚接种，32h收获尿囊液；或以剂量10
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/鸡胚接种，48h收获尿囊液；或以剂量10
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/鸡胚接种，72h收获尿囊液；对于乙型流感病毒，以剂量10
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/鸡胚接种，48h收获尿囊液。
[0014]作为本专利技术实施例的一个优选方案，生产用鸡胚为9
‑
11日龄。
[0015]作为本专利技术实施例的一个优选方案，浓缩纯化的方法包括以下步骤：将收获的尿囊液使用囊式过滤器进行粗滤；将粗滤后的滤液用滤膜进行超滤浓缩，并用无菌PBS缓冲液进行洗脱，得到病毒液；超滤浓缩后体积为原滤液的1/4
‑
1/3；继续使用蔗糖密度梯度离心纯化病毒液。
[0016]作为本专利技术实施例的一个优选方案，使用蔗糖密度梯度离心纯化病毒液的步骤，具体包括：往密度梯度离心筒中由下到上加入配制好的质量浓度为55%和30%的蔗糖溶液，然后在最上层缓慢加入病毒液，并置于2
‑
6℃条件下进行超速离心处理，收获位于55%和30%蔗糖溶液之间的病毒条带；55%和30%的蔗糖溶液的体积比为1:(1.5
‑
2.5)。
[0017]本专利技术实施例的另一个目的在于提供一种上述的流感减毒活疫苗在制备预防流感病毒的药物中的应用。
[0018]作为本专利技术实施例的一个优选方案，所述流感病毒至少包括括甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒和乙型流感病毒中的任一种。
[0019]本专利技术实施例提供的一种较低非感染性病毒颗粒含量的流感减毒活疫苗，相比于现有技术，具有以下有益技术效果：
Dimmock NJ. Live Attenuated Influenza Vaccine contains Substantial and Unexpected Amounts of Defective Viral Genomic RNA. Viruses 2017; 9(10).）。
[0026]在本专利技术的一个实施例中，提供了一种较低非感染性病毒颗粒含量的流感减毒活疫苗在制备预防流感病毒的药物中的应用；需要说明的是，这里的“较低非本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种流感减毒活疫苗，其特征在于，所述流感减毒活疫苗的非感染性病毒颗粒含量为42.2%
‑
92.3%。2.根据权利要求1所述的流感减毒活疫苗，其特征在于，所述流感减毒活疫苗的制备方法包括以下步骤：将流感病毒的原始毒株进行稀释后，再接种于鸡胚；接种后收获尿囊液；对尿囊液进行浓缩纯化，得到所述流感减毒活疫苗；其中，通过控制原始毒株稀释后的滴度，和/或控制收获尿囊液的时间，来达到控制流感减毒活疫苗中非感染性病毒颗粒含量的目的；所述流感病毒的原始毒株包括甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒和乙型流感病毒。3.根据权利要求2所述的流感减毒活疫苗，其特征在于，对于甲型H3N2流感病毒，以剂量103~10
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/鸡胚接种，32h收获尿囊液；或以剂量10
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/鸡胚接种，32h收获尿囊液；或以剂量10
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/鸡胚接种，48h收获尿囊液；或以剂量10
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/鸡胚接种，72h收获尿囊液；对于乙型流感...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏维恒，周恩同，吴敏，付晓姝，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：