一种厄贝沙坦及其中间体中溴代烷烃类遗传毒性杂质的检测方法技术

本申请涉及一种厄贝沙坦及其中间体中溴代烷烃类遗传毒性杂质的检测方法，涉及有机杂质检测技术领域，包括选取2

【技术实现步骤摘要】
一种厄贝沙坦及其中间体中溴代烷烃类遗传毒性杂质的检测方法


[0001]本申请涉及有机杂质检测
，尤其是涉及一种厄贝沙坦及其中间体中溴代烷烃类遗传毒性杂质的检测方法。

技术介绍

[0002]厄贝沙坦是一种血管紧张素工受体拮抗剂类抗高血压药，用于治疗原发性高血压以及合并高血压的2型糖尿病肾病。本品可抑制血管紧张素工与AT1受体结合，抑制血管收缩，使血管阻力降低、醛固酮分泌减少、血浆血管紧张素亚水平升高，从而发挥隆压作用。
[0003]卤代烷烃是药物合成反应中使用非常广泛的烷基化试剂，2006年EMEA颁布的《遗传毒性杂质限度指导原则》和FDA发布的《原料药和制剂中的基因毒性和遗传毒性杂质：推荐方法》中均提到，由于卤代烷烃的反应活性很活泼，通过亲核取代反应，能够与生物活性大分子(如DNAs、RNAs和蛋白质)直接发生烷基化反应，或卤代烷烃可以在光照或其他激发能量作用下产生自由基。这两种方式都对DNA进行直接或间接作用，可能会导致DNA突变，与这类试剂接触可能存在一些致癌风险，严重危害人类健康，因此对该类物质含量的把控尤为重要。
[0004]而在厄贝沙坦的药物合成过程中，存在溴代烷烃类遗传毒性杂质，其主要是2
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氰基
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4'
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溴甲基联苯(后文简称：一溴)和2
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氰基
‑
4'
‑
二溴甲基联苯(后文简称：二溴)。一溴是厄贝沙坦的关键起始原料，而二溴是一溴中的主要杂质，两者结构中均含相同的警示结构——卤代烃。现有检测方法中缺少能够有效检测厄贝沙坦及其中间体中两种溴代烷烃类残留量的方法，更缺少对这两种溴代烷烃类遗传毒性杂质的质控标准，这无疑增大了厄贝沙坦相关药物的生物安全性，基于此，特提出本申请。

技术实现思路

[0005]为解决现有技术中的问题，本申请提供一种厄贝沙坦及其中间体中溴代烷烃类遗传毒性杂质的检测方法，采用液质联用检测厄贝沙坦及厄贝沙坦中间体中两种溴代烷烃类残留量，精确把控厄贝沙坦及厄贝沙坦中间体中两种溴代烷烃类的质控标准，为厄贝沙坦相关药物的生物安全性提供指导。
[0006]首先，本申请提供一种厄贝沙坦及其中间体中溴代烷烃类遗传毒性杂质的检测方法，方法包括选取2
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氰基
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4'
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溴甲基联苯和2
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氰基
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4'
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二溴甲基联苯的对照品，制备对照品溶液；分别选取厄贝沙坦样品和厄贝沙坦中间体样品，制备样品待测液；将对照品溶液和待测液分别进行液质联用检测并记录色谱图，以2
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氰基
‑
4'
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溴甲基联苯和2
‑
氰基
‑
4'
‑
二溴甲基联苯的液相色谱峰面积为纵坐标、浓度为横坐标，建立标准曲线，再根据标准曲线计算2
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氰基
‑
4'
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溴甲基联苯和2
‑
氰基
‑
4'
‑
二溴甲基联苯的含量，并判断2
‑
氰基
‑
4'
‑
溴甲基联苯和2
‑
氰基
‑
4'
‑
二溴甲基联苯的含量是否在标准限度范围内。
[0007]进一步地，上述标准限度范围为：
厄贝沙坦中的2
‑
氰基
‑
4'
‑
溴甲基联苯含量ω1≤5ppm，厄贝沙坦中的2
‑
氰基
‑
4'
‑
二溴甲基联苯含量ω2≤5ppm，且ω1+ω2≤5ppm；厄贝沙坦中间体中的2
‑
氰基
‑
4'
‑
溴甲基联苯含量ω
11
≤20ppm，厄贝沙坦中间体中的2
‑
氰基
‑
4'
‑
二溴甲基联苯含量ω
22
≤20ppm，且ω
11
+ω
22
≤20ppm。
[0008]进一步地，上述2
‑
氰基
‑
4'
‑
溴甲基联苯LOQ1为2.53ng/ml、检测限LOD1为1.01ng/ml；2
‑
氰基
‑
4'
‑
二溴甲基联苯的定量限LOQ2为2.47ng/ml、检测限LOD2为0.99ng/ml。
[0009]进一步地，上述液质联用检测过程中液相色谱条件包括：色谱柱：C18色谱柱；流动相：A相为浓度为0.01mol/L乙酸铵溶液、B相为甲醇溶液；流速：0.3
‑
0.5ml/min；进样量：4
‑
6μl，进样温度：2
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8℃；柱温：28
‑
32℃。
[0010]进一步地，上述液相的洗脱程序为：0min，A相的体积为40％、B相的体积为60％；0
‑
10min，A相的体积由40％变为30％、B相的体积由60％变为70％；10
‑
12min，A相的体积由30％变为0％、B相的体积由70％变为100％；12
‑
22min，A相的体积为0％、B相的体积为100％；22
‑
22.01min，A相的体积由0％变为40％、B相的体积由100％变为60％；22.01
‑
30min，A相的体积为40％、B相的体积为60％。
[0011]进一步地，上述液质联用检测过程中质谱条件包括：离子源：电喷雾电离源；扫描模式：正离子扫描模式；监测模式：多反应监测；电喷雾电离源的参数包括：喷雾器：55
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65psi；毛细管电压：5500
‑
6500V；喷嘴电压：450
‑
550V。
[0012]进一步地，上述电喷雾电离源的参数还包括：干燥气温度：350℃；气体流速：13L/min；鞘气温度：100℃；鞘气流速：12L/min。
[0013]进一步地，上述对照品溶液的制备步骤包括：分别取20
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30mg的2
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氰基
‑
4'
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溴甲基联苯和2
‑
氰基
‑
4'
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二溴甲基联苯，加入乙腈溶解后，用甲醇稀释成系列浓度，得到用于制作标准曲线的对照品溶液。
[0014]进一步地，上述对照品溶液的对照品浓度为2.5％～125％。
[0015]进一步地，上述制备样品待测液的步骤包括：分别取80
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120mg的厄贝沙坦和厄贝沙坦中间体，加入甲醇溶解，制得样品待测液；用甲醇将样品待测液的浓度稀释至3
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种厄贝沙坦及其中间体中溴代烷烃类遗传毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述方法包括：选取2
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氰基
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4'
‑
溴甲基联苯和2
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氰基
‑
4'
‑
二溴甲基联苯的对照品，制备对照品溶液；分别选取厄贝沙坦样品和厄贝沙坦中间体样品，制备样品待测液；将所述对照品溶液和所述待测液分别进行液质联用检测并记录色谱图，以2
‑
氰基
‑
4'
‑
溴甲基联苯和2
‑
氰基
‑
4'
‑
二溴甲基联苯的液相色谱峰面积为纵坐标、浓度为横坐标，建立标准曲线，再根据所述标准曲线计算所述2
‑
氰基
‑
4'
‑
溴甲基联苯和所述2
‑
氰基
‑
4'
‑
二溴甲基联苯的含量，并判断所述2
‑
氰基
‑
4'
‑
溴甲基联苯和所述2
‑
氰基
‑
4'
‑
二溴甲基联苯的含量是否在标准限度范围内。2.根据权利要求1所述的厄贝沙坦及其中间体中溴代烷烃类遗传毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述标准限度范围为：所述厄贝沙坦中的所述2
‑
氰基
‑
4'
‑
溴甲基联苯含量ω1≤5ppm，所述厄贝沙坦中的所述2
‑
氰基
‑
4'
‑
二溴甲基联苯含量ω2≤5ppm，且ω1+ω2≤5ppm；所述厄贝沙坦中间体中的所述2
‑
氰基
‑
4'
‑
溴甲基联苯含量ω
11
≤20ppm，所述厄贝沙坦中间体中的所述2
‑
氰基
‑
4'
‑
二溴甲基联苯含量ω
22
≤20ppm，且ω
11
+ω
22
≤20ppm。3.根据权利要求1所述的厄贝沙坦及其中间体中溴代烷烃类遗传毒性杂质的检测方法，其特征在于：所述2
‑
氰基
‑
4'
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溴甲基联苯的定量限LOQ1为2.5ng/ml、检测限LOD1为1.0ng/ml；所述2
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氰基
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4'
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二溴甲基联苯的定量限LOQ2为2.5ng/ml、检测限LOD2为1.0ng/ml。4.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：王春，胡海梦，尉生机，赵斌锋，盛凯蔓，
申请(专利权)人：浙江金立源药业有限公司，
类型：发明
国别省市：