熊胆酸的生物酶连续催化制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种熊胆酸的生物酶连续催化制备方法及其应用，涉及药物合成技术领域；本发明专利技术以以胆酸为原料，利用生物酶的催化作用，经过7位选择性氧化，7位立体选择性还原过程，即可得到熊胆酸。本发明专利技术通过上述合成路线制备得到熊胆酸，原料来源广泛，操作步骤容易控制，产率和纯度高，适合大量制备，可进行后续的产业化开发。的产业化开发。的产业化开发。

【技术实现步骤摘要】
熊胆酸的生物酶连续催化制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及药物合成
，具体涉及一种熊胆酸的生物酶连续催化制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]胆汁酸是胆汁的重要成分，在脂肪代谢中起着重要作用。特别是熊胆汁，具有多种生物学功能，广泛应用于现代中药产品中。从胆汁中提取的各种单体胆汁酸，如熊去氧胆酸等，已经成为广泛使用的药物(如优思弗)，用于治疗胆结石、胆汁淤积性肝病、脂肪肝、各型肝炎、胆囊炎、胆道炎和胆汁性消化不良、胆汁返流性胃炎、眼部疾病等。
[0003]熊胆酸(Ursocholic acid)是熊胆汁中存在的一种组分，是胆酸的7β
‑
羟基异构体，目前的熊胆酸主要通过化学合成的方法获得，但制备过程较为复杂、产率较低，且没有较好的方法获得高纯度的熊胆酸，无法进行大量生产。
[0004]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]为克服现有的技术缺陷，本专利技术的目的在于提供一种熊胆酸的生物酶连续催化制备方法及其应用，本专利技术以胆酸(3α,6α,12α
‑
三羟基
‑
5β
‑
胆烷酸)作为原料，来源广泛，价格低廉，并且合成路线步骤少，条件温和，收率高，适合大量制备，可进行后续的产业化开发。
[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了以下技术方案：
[0007]第一方面，提供了一种熊胆酸的生物酶连续催化制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
[0008]步骤(1)：以胆酸为原料，利用7α
‑
羟基固醇脱氢酶的催化作用，经选择性氧化7位得到7K
‑
胆酸；
[0009]步骤(2)：7K
‑
胆酸利用7β
‑
羟基固醇脱氢酶的催化作用，立体选择性还原7位羰基得到熊胆酸；
[0010]上述制备方法的反应路线如下所示：
[0011][0012]本专利技术通过上述合成路线制备得到熊胆酸，即3α,7β,12α
‑
三羟基
‑
5α
‑
胆烷酸，产率高，可达98.0％，纯度高，含量可达98.3％，适合大量制备。
[0013]进一步地，步骤(1)包括：将胆酸与第一有机溶剂、水、碱混合搅拌溶解后，加入缓冲液调节pH值为7.0
‑
7.5，再加入7α
‑
羟基固醇脱氢酶、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、乳酸脱氢酶和丙酮酸钠，反应得到7K
‑
胆酸。
[0014]优选地，所述缓冲液为磷酸缓冲液。
[0015]优选地，所述碱为碱试剂或碱溶液；更优选地，所述碱为氢氧化钠试剂或氢氧化钠溶液。
[0016]进一步地，步骤(1)中，反应温度为20
‑
35℃。
[0017]步骤(1)可根据反应进度调节反应时间，优选反应时间为1
‑
12h，使反应完全，如可以为2h、3h、6h、9h、12h等。
[0018]步骤(1)的反应温度在上述范围内均可，优选25
‑
30℃，可根据实际需求进行调整，如反应温度可以为25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃等。
[0019]步骤(1)的反应pH范围在上述范围内均可，可根据实际需求进行调整，如反应pH值可以为7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5等。
[0020]进一步地，步骤(1)中，所述第一有机溶剂包括C1
‑
C7的一元直链醇或多元醇中的一种或多种。
[0021]进一步地，步骤(1)中，还包括：反应后的反应液在80℃加热搅拌2
‑
4h，以灭活反应体系中存在的酶。
[0022]通过上述步骤灭活反应体系中存在的酶，无需纯化即可直接进行下一步反应，实现熊胆酸的连续制备。
[0023]进一步地，步骤(2)包括：向步骤(1)得到的反应体系中，加入缓冲液调节pH值为7.0
‑
7.5，再加入在7β
‑
羟基固醇脱氢酶、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、葡萄糖脱氢酶和葡萄糖，进行反应得到熊胆酸；
[0024]优选地，所述缓冲液为磷酸缓冲液。
[0025]进一步地，步骤(2)中，反应温度为20
‑
35℃。
[0026]步骤(2)可根据反应进度调节反应时间，优选反应时间为1
‑
12h，使反应完全，如可以为2h、3h、6h、9h、12h等。
[0027]步骤(2)的反应温度在上述范围内均可，优选20
‑
35℃，可根据实际需求进行调整，如反应温度可以为20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃等。
[0028]步骤(2)的反应pH范围在上述范围内均可，可根据实际需求进行调整，如反应pH值可以为7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5等。
[0029]进一步地，步骤(2)还包括：反应结束后，80℃加热灭活反应体系中存在的酶，自然冷却至室温，加入十倍量的水，使用浓盐酸调节pH值在1
‑
2内，充分搅拌，过滤，滤饼使用水洗涤3
‑
5次；将滤饼使用甲醇溶解，过滤，除去不溶物，除去滤液中的溶剂，使用10％的氢氧化钠溶液溶解，调节pH值在1
‑
2内，充分搅拌，有固体析出，过滤，即得熊胆酸。
[0030]本专利技术各步骤的反应条件温和，且工艺简单，经过2步反应得到产物，易于控制，无需复杂的设备即可得到目标产物。
[0031]第二方面，提供了熊胆酸，所述熊胆酸由第一方面所述的生物酶连续催化制备方法制得。
[0032]第三方面，提供了一种如第二方面所述的熊胆酸在制备用于治疗肝脏疾病的药物中的应用。
[0033]上述肝脏疾病包括但不限于病毒性肝炎、肝硬化、脂肪肝、自身免疫性肝病、原发
性肝癌、肝腺瘤、局灶性结节样增生、肝囊肿、肝脓肿、肝血管瘤、转移性肝癌等。
[0034]上述药物以熊胆酸为活性组分不排除配制体系和给药方式的变动、对熊胆酸进行简单化学修饰调整后的衍生物、药用盐、多化合物以及多药物合用等情况。
[0035]具体地，在本专利技术中，可将本专利技术的熊胆酸作为活性成分配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的载体介质；配制好的药物可以通过常规途径进行给药，包括但并不限口服、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、皮内、或局部给药。
[0036]当本专利技术的药物的剂型为用于口服施用的药物时，其含有安全有效量的本专利技术的熊胆酸以及药学上可接受的载体和/或辅剂，口服施用的药物可制成片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、乳剂、糖浆剂、软膏剂、栓剂等常用剂型；本专利技术中，不对载体和/或辅剂做具体限定。
[0037]本专利技术的药物还可以被制成注射剂，可以在无菌操作环境下与注射用水、生理盐水、葡萄糖水制成注射剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.熊胆酸的生物酶连续催化制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：步骤(1)：以胆酸为原料，利用7α
‑
羟基固醇脱氢酶的催化作用，经选择性氧化7位得到7K
‑
胆酸；步骤(2)：7K
‑
胆酸利用7β
‑
羟基固醇脱氢酶的催化作用，立体选择性还原7位羰基得到熊胆酸；上述制备方法的反应路线如下所示：2.根据权利要求1所述的生物酶连续催化制备方法，其特征在于，步骤(1)包括：将胆酸与第一有机溶剂、水、碱混合搅拌溶解后，加入缓冲液调节pH值为7.0
‑
7.5，再加入7α
‑
羟基固醇脱氢酶、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、乳酸脱氢酶和丙酮酸钠，反应得到7K
‑
胆酸；优选地，所述缓冲液为磷酸缓冲液。3.根据权利要求2所述的生物酶连续催化制备方法，其特征在于，步骤(1)中，反应温度为20
‑
35℃。4.根据权利要求2所述的生物酶连续催化制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述第一有机溶剂包括C1
‑
C7的一元直链醇或多元醇中的一种或多种。5.根据权利要求2所述的生物酶连续催化制备方法，其特征在于，步骤(1)中，还包括：反应后的反应液在80℃加热搅拌2...

【专利技术属性】
技术研发人员：李杉，秦帅帅，张雷，
申请(专利权)人：中山市华南理工大学现代产业技术研究院，
类型：发明
国别省市：