抗sFLT-1蛋白的单克隆抗体组合物及应用制造技术

本发明专利技术公开了抗sFLT

【技术实现步骤摘要】
抗sFLT
‑
1蛋白的单克隆抗体组合物及应用


[0001]本专利技术属于抗体的制备及序列测定领域，具体涉及抗sFLT
‑
1蛋白的单克隆抗体组合物及应用。

技术介绍

[0002]可溶性FMS样酪氨酸激1(Soluble fms
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like tyrosine kinase 1,sFLT
‑
1)是一种抗血管生成蛋白，被认为能调节先兆子痫的体征和症状。sFLT
‑
1也称为可溶性血管内皮生长因子受体，是血管内皮生长因子受体（vascular endothelial growth factor receptor，VEGFR）1的分泌性剪接变体。sFLT
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1能与内皮细胞表面受体VEGFR
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1和VEGFR
‑
2结合形成异源二聚体，进而阻断VEGF和胎盘生长因子（placental growth factor，PlGF）的生物学活性，引起血管生成障碍和内皮损伤。近年来，随着研究的不断深入，sFLT
‑
1的不同剪接体形式逐渐被认识。可溶性fms样酪氨酸激酶受体1（Flt
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1）基因编码的是含有30个外显子的mRNA，其前体mRNA经剪切形成全长的膜型Flt
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1分子及4种可溶性剪接体。
[0003]临床研究表明，sFLT
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1浓度在子痫前期发病前约5周便出现升高，早发型、晚发型以及非早产型子痫前期高风险孕妇的sFLT
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1在出现症状前均发生动态变化，对子痫前期进行有效的早筛和全方位管理治疗，对保障母婴健康及生命安全具有重要意义。子痫前期常规的检测方法是通过血压、蛋白尿、血清肌酐和血小板浓度等生化指标的变化进行判定。这种传统诊断方式的标准较为宽泛，并且与一些临床症状重叠的疾病不易区分。因此，在临床上亟需开发一种针对子痫前期疾病的特异性诊断方法。sFLT
‑
1可以作为特异性的循环系统标志物对子痫前期的疾病发展进行预测，对子痫前期临床诊断起到辅助作用，进而为孕产妇及新生儿的生命健康安全提供特异性的临床诊断依据。
[0004]开发性能优异的sFLT
‑
1免疫诊断试剂的核心原料是抗sFLT
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1单克隆抗体，有些厂商的特异性和灵敏度不高，所以开发开发性能优异的sFLT
‑
1诊断试剂非常有必要，同时也期望能够进一步推动诊断试剂的国产化。

技术实现思路

[0005]为解决灵敏性、特异性的问题，本专利技术提供了抗sFLT
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1蛋白的单克隆抗体组合物。该抗体性能优异、准确性高。同时提供了基于上述sFLT
‑
1抗体的化学发光试剂盒，能对子痫前期临床诊断起到辅助作用。
[0006]本专利技术提供如下技术方案：抗sFLT
‑
1蛋白的单克隆抗体组合物，包括sFLT
‑1‑
Clone1和sFLT
‑1‑
Clone2，sFLT
‑1‑
Clone1的重链可变区氨基酸序列：EVQLQQSGAPPVKPGASVKLCCTASGFNIDDTYIHWVKQRPEQGLEWIGRIDPADGDTKYDPKFQGKATITADTSSNTAYLQLSRLTSEDTAVYYCARPSLYDGYYPFAYWGGGTLVTVSAsFLT
‑1‑
Clone1的轻链可变区氨基酸序列：DVVMTQTPLSLSVSLGDQADISCRSSQSLNYSNRHTYLHWYLQKPGQSPQLLIFLVSNRFSGVPDRFSG
SGSGTDFTLKINRVEAEDLGVYFCSQSTHLPTTFGSGTKLEIKsFLT
‑1‑
Clone2的重链可变区氨基酸序列：EVQLQQSGAELKPGASVKSCTASGFNIKDYYMMKQRTEQGLDWIGRIDPEDYETKYAPEFQGKATIDTSSNQAYLQLSTLTSEDCAVYYCARYYSSYVPFVYWGQGTTAsFLT
‑1‑
Clone2的轻链可变区氨基酸序列：EVQLQQSGAELVKPGASVMKLSCTASGFKDYYMHWMKQRTEQGLDWIGRIDPEDGEKAPEFQGKATITADTSSNLQYLQLSTLTSEDTAVLQCARYYSSYVPFVYWGQGTVYYASA抗sFLT
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1蛋白的单克隆抗体组合物的制备方法：sFLT
‑
1蛋白的表达生产：将pTT5
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sFLT
‑
1表达质粒与转染试剂PEI混匀后，转染HEK293细胞，同时在OPM
‑
293 CD03 Medium细胞培养基中加入增强剂和辅料进行培养，当细胞活率<70%后，收集细胞培养物，离心并收集细胞上清。
[0007]sFLT
‑
1蛋白的亲和纯化：细胞上清用盐和咪唑充分重悬过滤后，用预装重力柱进行亲和纯化，通过梯度咪唑浓度进行洗杂和洗脱，SDS
‑
PAGE跑胶检测蛋白纯度，将蛋白透析至磷酸盐缓冲液中，0.22μm滤器无菌过滤后，BCA测定蛋白浓度。
[0008]将亲和纯化后的sFLT
‑
1蛋白与弗氏佐剂进行等体积混合乳化，免疫计量为100ug/只小鼠，3周后进行加强免疫，免疫计量为50ug/只小鼠，后期间隔2周每次，采集小鼠血液分离血清，酶联免疫吸附测定抗体效价，筛选免疫较好的小鼠进行杂交瘤融合实验，经过HAT筛选培养基筛选培养后，以sFLT
‑
1作为酶标板包被抗原，取上清进行酶联免疫吸附测定，筛选出优质阳性细胞株，并进行两轮的细胞亚克隆，克隆出单克隆细胞株，用无血清培养和发酵细胞株，收集培养上清。
[0009]抗sFLT
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1蛋白的单克隆抗体组合物在制备子痫早期诊断试剂盒中的应用。
[0010]单克隆抗体组合物用于sFLT
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1化学发光试剂盒。试剂盒使用sFLT
‑1‑
Clone1和sFLT
‑1‑
Clone2分别作为包被抗体和检测抗体。
[0011]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了抗sFLT
‑
1蛋白，用于制备诊断用单克隆抗体，本专利技术的抗sFLT
‑
1蛋白的单克隆抗体组合物包括sFLT
‑1‑
Clone1和sFLT
‑1‑
Clone2，能够识别免疫原，此抗体组合具有特异性和高亲和力的特点，同时也提供了基于上述抗体的化学发光检测试剂盒，可以对子痫前期疾病的特异性诊断，从而提高诊断试剂的特异性和灵敏度，对于临床患者子痫的早期诊断、病情评估具有重要意义。
附图说明
[0012]图1为本专利技术检测试剂盒与同本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗sFLT
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1蛋白的单克隆抗体组合物，其特征在于：包括sFLT
‑1‑
Clone1和sFLT
‑1‑
Clone2，所述sFLT
‑1‑
Clone1的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，sFLT
‑1‑
Clone1的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述sFLT
‑1‑
Clone2的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，sFLT
‑1‑
Clone2的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。2.权利要求1所述的抗sFLT
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1蛋白的单克隆抗体组...

【专利技术属性】
技术研发人员：芮兵，
申请(专利权)人：南京佰抗生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：