一种硫肽类抗生素产生菌的发酵方法技术

本发明专利技术涉及一种放线菌ActinokineosporafastidiosaJCM3276产硫肽类抗生素四糖基化诺卡沙星(NOC

【技术实现步骤摘要】
一种硫肽类抗生素产生菌的发酵方法


[0001]本专利技术涉及抗生素发酵制备领域，更具体地说，涉及一种硫肽类抗生素产生菌的发酵方法，即一种硫肽类抗菌化合物NOC
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FG发酵培养基系统优化和验证。

技术介绍

[0002]诺卡沙星是一种核糖体合成和翻译后修饰的硫肽类抗生素，对革兰氏阳性菌及其耐药菌株具有极强的杀灭活性。但是由于水溶性极低和稳定性差的问题，至今仍未能成药。此外，多环结构的复杂性进一步限制了诺卡沙星的成药改造。
[0003]放线菌ActinokineosporafastidiosaJCM3276是我们前期采用“三探针”交叉法挖掘出的菌株，该菌能够发酵生成一种多糖基化的硫肽类化合物
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四糖基化诺卡沙星(NOC
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FG)。NOC
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FG的体外抗耐药菌活性与诺卡沙星相当，但水溶性和稳定性皆有显著改善，有望成为一种新型抗生素开发的先导化合物，已申请中国专利技术专利(CN114921512A)。
[0004]为制备更多高纯度NOC
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FG以开展成药研究，本专利技术通过比较9种常用于放线菌发酵的培养基对ActinokineosporafastidiosaJCM3276合成NOC
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FG的影响，筛选影响NOC
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FG合成的关键因子；采用中心组合实验设计(CCD)和响应面法对发酵培养基进行深度优化，确定NOC
‑
FG的最佳发酵培养基组成，为NOC
‑
>FG的成药性研究奠定基础。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是通过考察和优化，确定ActinokineosporafastidiosaJCM3276发酵制备多糖基化诺卡沙星(NOC
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FG)的最佳培养基组成和用量，为NOC
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FG的成药性研究提供足量的化合物。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0007]ActinokineosporafastidiosaJCM3276发酵制备多糖基化诺卡沙星(NOC
‑
FG)方法，包含如下步骤：
[0008]步骤一：制备ActinokineosporafastidiosaJCM3276的发酵种子液；步骤二：考察9种放线菌常用发酵培养基对NOC
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FG发酵效价的影响，以初步筛选出优势培养基；步骤三：采用中心组合实验设计(CCD)和响应面法，深度优化发酵培养基处方，并放大发酵体系验证，最终确定ActinokineosporafastidiosaJCM3276发酵生产NOC
‑
FG的最佳处方。
[0009]所述培养基为SM1、SM3、SM5、SM6、SM7、SM12、SM20、0011葡萄糖天门冬素琼脂培养基和高氏1号培养基。
[0010]所述的CCD和响应面法实验的二阶回归方程为：Y＝21.32+0.1431A
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1.05B
‑
1.72C
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1.85D+2.14E+9.05F+2.01AB+1.66AC+3.15AD
‑
2.90AE
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10.01AF+2.79BC+2.42BD
‑
1.83BE
‑
9.37BF
‑
13.25CD
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5.82CE+10.28CF+12.73DE
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2.14DF
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11.98EF
‑
6.06A2‑
6.14B2‑
4.09C2‑
5.03D2+0.4759E2+4.07F2‑
6.46ABC+17.36ABD
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19.12ABF+0.9537ACD,R2＝0.9992,公式中Y为NOC
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FG的发酵效价，A～F分别为麦芽糖、蛋白胨、牛肉浸膏、酵母提取物、氯化钠和七水合硫酸镁。
[0011]所述的ActinokineosporafastidiosaJCM3276发酵生产NOC
‑
FG的最佳处方为：麦芽糖20.71g/L，蛋白胨3.61g/L，牛肉浸膏1.76g/L，酵母提取物0.84g/L，氯化钠5.64g/L，MgSO4·
7H2O2.80g/L。该处方条件下，NOC
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FG的发酵效价达到了20.37mg/L。
[0012]相对于现有技术，本专利技术具有如下有益效果：
[0013]本专利技术通过比较NOC
‑
FG在不同培养基中的发酵效价，筛选出对Actinokineospora fastidiosaJCM3276菌株发酵制备NOC
‑
FG的关键因子，再通过响应面法中心组合实验设计，优化了ActinokineosporafastidiosaJCM3276发酵的最佳培养基成分。
[0014]与NOC
‑
FG产量最高的SM20相比，ActinokineosporafastidiosaJCM3276在优化培养基中的NOC
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FG合成效价提高了57.05％，为规模化制备NOC
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FG提供了物质基础。
附图说明
[0015]图1为不同培养基对ActinokineosporafastidiosaJCM3276发酵制备NOC
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FG的影响；
[0016]图2为A(麦芽糖)、B(蛋白胨)、C(牛肉浸膏)、D(酵母提取物)、E(氯化钠)、F(七水合硫酸镁)六因素对ActinokineosporafastidiosaJCM3276发酵制备NOC
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FG的响应曲面三维图。
具体实施方式
[0017]以下通过实施例说明本专利技术的具体步骤，但本专利技术的范围不受此实施例限制。
[0018]实施例1 NOC
‑
FG的HPLC分析方法
[0019]色谱柱：WatersC18柱，150mm
×
4.6mm,5μm
[0020]流动相：A：超纯水(含0.1％甲酸)B：乙腈(含0.1％甲酸)
[0021]梯度：10％B
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90％B梯度洗脱25min
[0022]柱温：30℃；流速：1ml/min；波长：330nm
[0023]进样量：2
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10μl
[0024]上述HPLC分析条件下NOC
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FG的保留时间为15.6min
[0025]实施例2基础培养基筛选
[0026]菌株ActinokineosporafastidiosaJCM3276购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)。9种放线菌常用发酵培养基详见表1。
[0027]发酵种子液的制备：在ISP2固体培养基(葡萄糖本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种硫肽类抗生素产生菌的发酵方法，其特征在于，包含如下步骤：步骤一：制备ActinokineosporafastidiosaJCM3276的发酵种子液；步骤二：考察9种放线菌常用发酵培养基对NOC
‑
FG发酵效价的影响，以初步筛选出优势培养基；步骤三：采用中心组合实验设计(CCD)和响应面法，深度优化发酵培养基处方，并放大发酵体系验证，最终确定ActinokineosporafastidiosaJCM3276发酵生产N...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴羚锐，陈璐，王敏，容佳乐，吴旭日，陈宁静，严欣怡，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：