一种T细胞受体及其应用制造技术

本发明专利技术属于免疫治疗技术领域，具体涉及一种T细胞受体及其应用。本发明专利技术要解决的技术问题是为TCR

【技术实现步骤摘要】
一种T细胞受体及其应用


[0001]本专利技术属于免疫治疗
，具体涉及一种T细胞受体及其应用。

技术介绍

[0002]黑色素瘤抗原基因(MAGE)
‑
A10是黑色素瘤抗原基因家族中的成员，其表达产物是一种肿瘤相关抗原，仅在肿瘤组织、睾丸及胎盘组织表达，与人白细胞抗原
‑Ⅰ
类分子结合后被细胞毒性T淋巴细胞识别，从而特异性杀伤肿瘤细胞。MAGE
‑
A亚家族具有严格的表达模式，其中MAGE
‑
A10作为MAGE
‑
A家族的新分子，因其在肿瘤细胞内特异性高表达，且具有较高肿瘤免疫原性的潜在作用而备受关注。
[0003]MAGE
‑
A10抗原在细胞内加工，产生与细胞表面人类白细胞抗原(HLA)共同呈递的多肽片段，形成具有一定亲和力的天然T细胞受体(TCRs)识别的表位。HLA
‑
A*02:01等位基因是中国人群中最常见的MHC等位基因亚型，我们前期利用体外抗原呈递系统鉴定出衍生自MAGE
‑
A10抗原的表位肽SLLKFLAKV，该抗原表位肽可以诱导CD8 T细胞的活化与杀伤。
[0004]TCR
‑
T细胞疗法则是将能识别肿瘤特异性抗原的TCRα和TCRβ链基因转染到T细胞中，使T细胞的TCR抗原结合区发生结构改变，从而能特异性识别相应的肿瘤抗原，然后经过体外扩增并回输到人体内，表达肿瘤抗原特异性TCR的T淋巴细胞(可识别肿瘤细胞表面的HLA/>‑
肽复合物)，进而引发T细胞的免疫效应，达到杀伤肿瘤细胞的目的。因此，鉴定针对MAGE
‑
A10的特异性TCR，对于MAGE
‑
A10阳性的实体肿瘤TCR
‑
T细胞治疗具有重大意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是为TCR
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T细胞疗法提供一种新选择。
[0006]本专利技术的技术方案是一种T细胞受体，该T细胞受体特异性识别MAGE
‑
A10抗原表位肽。
[0007]进一步的，MAGE
‑
A10抗原表位肽的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示。
[0008]具体的，所述T细胞受体包含α链和/或β链；所述α链包含氨基酸序列如SEQ ID No.1所示CDR3；所述β链包含氨基酸序列如SEQ ID No.2所示CDR3。
[0009]进一步的，所述α链的CDR3区域的上游为TCR的V区，CDR3区域的下游为TCR的J区。
[0010]特别的，所述α链的的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。
[0011]进一步的，所述β链的CDR3区域的上游为TCR的V区，CDR3区域的下游为TCR的J区和C区。
[0012]具体的，所述β链的的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。
[0013]本专利技术还提供了编码所述T细胞受体的核酸分子。
[0014]本专利技术还进一步提供了表达所述T细胞受体或包含编码所述T细胞受体的核酸分子的表达盒、载体、细胞或者宿主。
[0015]其中，所述载体为表达载体。
[0016]进一步的，所述表达载体为病毒载体。
[0017]更进一步的，所述病毒载体为慢病毒载体或腺病毒载体。
[0018]特别的，所述载体中，α链和β链的核酸序列通过2A自剪切肽连接。
[0019]其中，所述2A自剪切肽的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。
[0020]进一步的，表达所述T细胞受体或包含编码所述T细胞受体的核酸分子的细胞为异源或自源的。
[0021]其中，表达所述T细胞受体或包含编码所述T细胞受体的核酸分子的细胞为T细胞或Jurkat细胞。
[0022]优选的，T细胞为CD8+。
[0023]本专利技术还提供了上述T细胞受体，上述编码所述T细胞受体的核酸分子，或，表达所述T细胞受体或包含编码所述T细胞受体的核酸分子的表达盒、载体、细胞或者宿主在制备抗肿瘤疫苗或抗肿瘤药物中的应用。
[0024]进一步的，所述肿瘤为肺癌、黑色素瘤、膀胱癌、头颈癌或肝癌。
[0025]本专利技术还进一步提供了一种药物组合物，所述药物组合物含有药学上接受的载体；还包括上述T细胞受体，上述编码所述T细胞受体的核酸分子，或，表达所述T细胞受体或包含编码所述T细胞受体的核酸分子的表达盒、载体、细胞或者宿主。
[0026]本专利技术的有益效果：本专利技术提供了一种识别MAGE
‑
A10抗原表位肽的T细胞受体。该T细胞受体能够靶向MAGE
‑
A10抗原表位肽，利用本专利技术所述TCR构建TCR
‑
T细胞，对于表达黑色素瘤相关抗原A10的肿瘤具有显著的杀伤效果。本专利技术为黑色素瘤相关抗原A10相关的肿瘤的免疫治疗提供了新的途径。
附图说明
[0027]图1为候选TCR的UMAP可视化结果图；A：样本MAGE
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A10
‑
1的UMAP可视化结果图；B：样本MAGE
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A10
‑
2的UMAP可视化结果图。CCR7high CD8 T：CCR7基因高表达的CD8T细胞；Effector CD8 T：效应CD8 T细胞；Cycling CD8 T：处于细胞增殖期的CD8 T细胞；不同颜色的点表示筛选出的不同TCR的分布情况。
[0028]图2为各组细胞显微镜下GFP绿色荧光图。18121ctrl：18121空质粒对照组；TCR24：转入TCR24的重组质粒组。
[0029]图3为流式检测Jurkat76细胞中TCRα/β的表达结果图。WT：Jurkat76野生型细胞，自身不表达TCR；18121ctrl：转染18121空质粒的Jurkat76细胞对照组；flu ctrl：流感的双链TCR(flu
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TCR)转入Jurkat76细胞组，为阳性对照；TCR24：转染TCR24的Jurkat76细胞组。
[0030]图4为TCR
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T细胞和T2细胞共培养条件下，流式检测Jurkat76细胞的CD69表达结果图；A：细胞中CD69活化情况检测结果图；B：细胞中CD69活化情况检测结果柱状图。18121ctrl：转染18121空质粒的Jurkat76细胞对照组；flu ctrl：流感的双链TCR(flu
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TCR)转入Jurkat76细胞组，为阳性对照；TCR24：转染TCR24的Jurkat76细胞组，No pep：未加入表位肽；MAGE
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A10 pep：加入MAGE
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A10
310
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318
抗原表位肽。
[0031]图5为TCR
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T细胞和PC9细胞共培养条件下，流式检测Jurk本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种T细胞受体，其特征在于：该T细胞受体特异性识别MAGE
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A10抗原表位肽。2.根据权利要求1所述T细胞受体，其特征在于：所述MAGE
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A10抗原表位肽的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示。3.根据权利要求1所述T细胞受体，其特征在于：所述T细胞受体包含α链和/或β链；所述α链包含氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的CDR3、CDR3上游的TCR的V区以及CDR3下游的TCR的J区；所述β链包含氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的CDR3、CDR3上游的TCR的V区以及CDR3下游的TCR的J区和C区；进一步的，所述α链的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；所述β链的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。4.编码权利要求1～3任一项所述T细胞受体的核酸分子。5.表达权利要求1～3任一项所述T细胞受体或包含编码权利要求4所述T细胞受体的核酸分...

【专利技术属性】
技术研发人员：任之尧，朱国栋，张蓓，
申请(专利权)人：广州市老人院，
类型：发明
国别省市：