猪源S100A12蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种保藏编号为CCTCC NO.C2022340的杂交瘤细胞株。本发明专利技术还公开了由杂交瘤细胞株CCTCC NO.C2022340分泌产生的抗猪源S100A12蛋白(钙粒蛋白C)单克隆抗体S100A12

【技术实现步骤摘要】
猪源S100A12蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
具体涉及猪源S100A12蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]S100A12蛋白，又称为钙粒蛋白C或髓系相关蛋白6(marrow related proteins，MRP6)，是EF
‑
手型钙结合蛋白S100家族的一员，分子量约为10.8KDa；该蛋白主要存在于骨髓、淋巴、脾脏等免疫组织或器官中，常表达于中性粒细胞、巨噬细胞，同时在淋巴细胞、单核细胞中低表达。与大多数S100家族蛋白一样，S100A12蛋白具有两个EF手型结构，每个EF手型结构域由两段螺旋和中间连接环组成；生理浓度的钙离子(Ca
2+
)环境中，Ca
2+
优先结合于C端EF手型结构域，导致C端螺旋的疏水残基暴露，诱使蛋白构象发生变化；而N端EF手型结构域只有在高浓度Ca
2+
环境中才可与Ca
2+
结合。离子亲和力分析实验结果表明，S100A12蛋白对锌离子(Zn
2+
)的亲和力强于对Ca
2+
的亲和力，并且在结合后，能够显著增加蛋白自身对Ca
2+
的亲和力。由于S100A12可通过特异性脂质(包括溶液中的脂质和来自粒细胞的脂筏等)和离子依赖的方式与细胞膜发生相互作用，当Ca
2+
和Zn
2+
存在时，能够促进S100A12与细胞膜上受体的互作，并进一步影响S100A12穿越细胞膜的过程。
[0003]S100A12蛋白除具有S100蛋白家族的共性特征外，还具有其独有的结构和功能特点。细胞内的S100A12蛋白主要以同型二聚体的形式存在，而在胞外则大多以同型二聚体或六聚体的形式参与调节炎症过程和免疫反应，包括：1)抑制基质金属蛋白酶MMP2、MMP3和MMP9的活性；2)和CacyBP/SIP(钙周期素结合蛋白)直接相互作用，影响泛素化和β
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连环蛋白(beta
‑
catenin)降解等细胞过程；3)结合外源抗原，促进超氧化物的生成和巨噬细胞清除抗原，或通过“营养免疫”的模式，结合和/或螯合细菌生长所需营养金属，如Zn
2+
、Cu
2+
，发挥抗菌活性；4)充当损伤相关模式分子(DAMP)，与晚期糖基化终末产物受体(RAGE)结合后，通过NF
‑
κB和MAPK通路进行信号传导，增强细胞间黏附分子
‑
1(ICAM
‑
1)，血管细胞黏附分子
‑
1(VCAM
‑
1)，核因子κB和肿瘤坏死因子(TNF
‑
α)的表达，直接引起单核吞噬细胞、淋巴细胞和内皮细胞的活化，合成与分泌促炎性细胞因子，诱导白细胞进一步募集到炎症部位，并最终导致炎症发生；5)通过TLR4途径激活单核细胞，增强单核细胞的迁移，并上调促炎因子，如IL
‑
1β，IL
‑
6,和IL
‑
8等。
[0004]有研究表明，血清中S100A12蛋白浓度升高与许多炎症性疾病表现出良好的相关性，并被认为是此类疾病状态的特异性标记物，如牙周炎、类风湿性关节炎、糖尿病、银屑病、萎缩性肺炎等。S100A12蛋白的表达量变化也被证实与多种消化系统疾病的发生、发展密切相关，包括胃肠炎、肠易激综合征(IBS)、炎症性肠病(IBD，可分为溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD))，以及胃癌、消化道癌、结肠癌等。尤其是在区分IBD和IBS时，S100A12蛋白比粪钙卫蛋白(临床常用的胃肠疾病的生物标志物)更具特异性；且与血清S100A12的检测结果相比，粪便S100A12的检测结果更为敏感和稳定。因此，粪便S100A12可作为IBD黏膜愈合的判定指标和疾病复发的预测因子，用于疾病监测。有报道称，S100A12在肿瘤细胞中的表
达和胃癌严重性标记呈负相关，因此，可以利用S100A12作为一种新型预后诊断标记物来检测侵略性胃癌。此外，S100A12还可以作为开发治疗药物和进行化疗干预的靶点。有研究表明，除了与RAGE和TLR4结合外，S100A12与CD36也具有较高的亲和力；且CD36受体的表达还会受到RAGE和TLR4通路的严格调控。CD36可以通过线粒体激活因子PARP
‑
β和PARP
‑
γ依赖的方式增强对线粒体活性的调节，进而改变细胞代谢。比如，在肿瘤细胞中，CD36可以影响调节性T细胞的代谢，使它们能更好地适应肿瘤微环境，减少杀伤性T细胞对肿瘤细胞的杀灭。同时，作为一种脂肪酸受体，CD36负责脂肪酸的识别和细胞跨膜转运，可以帮助肿瘤细胞从周围环境中摄取脂肪分子，为肿瘤细胞的迁移提供能量。因此，通过S100A12
‑
CD36轴靶向抑制CD36，在治疗癌症方面具有一定的潜力。
[0005]S100A12蛋白于1994年首先发现于猪的粒细胞，但猪S100A12蛋白的功能和作用尚未全面解析。猪源S100A12基因定位于4号染色体，与SW512紧密连锁。前期研究表明，S100A12基因的表达与猪圆环病毒2型(PCV
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2)的感染过程密切相关，且S100A12能够显著促进PCV2在细胞内的复制。与健康猪相比，感染副猪嗜血杆菌的病猪脾脏中S100A12基因上调16.6倍。在胸膜肺炎放线杆菌(APP)感染后，S100A12能够快速激活病猪的肺部炎症反应，诱导促炎细胞因子的分泌；随后，抑制APP诱导的猪肺泡巨噬细胞(PAM)的凋亡，减弱APP对PAM的黏附侵袭，促进PAM的杀菌作用，避免过度炎症。这说明，S100A12在猪的感染(包括细菌、病毒和寄生虫等)和疾病进程中也扮演了重要的角色，其功能和作用有待进一步解析。同时，S100A12的定量检测是诊断猪感染性疾病和监测抗炎治疗反应的一个重要指标，而以S100A12单抗为靶标开发基因工程抗体类药物或新型疫苗，在预防和治疗猪炎症性疾病上也具有很好的应用前景。

技术实现思路

[0006]本专利技术首先要解决的技术问题是获得杂交瘤细胞株S100A12
‑
F5C6。在此基础上获得了高效的抗猪源S100A12蛋白的单克隆抗体，所述单抗由杂交瘤细胞株S100A12
‑
F5C6分泌产生。
[0007]本专利技术采用的技术方案如下：
[0008]猪源S100A12蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株，所述的杂交瘤细胞株已于2022年11月8日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，分类命名为：猪源S100A12蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株S100A12
‑
F5C6，保藏地址为中国武汉，保藏编号为CCTCC NO:C2022340。
[0009]本
技术实现思路
还包括杂交瘤细胞株CCTCC NO.C2022340分泌产生的单克隆抗体。
[0010]本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.猪源S100A12蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO.C2022340，保藏时间为2022年11月8日。2.一种单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述的单克隆抗体杂交瘤细胞株产生。3.根据权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。4.根据权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的编码基因序列如SEQ ID No.2所示。5.根据权利要求3所述的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，将猪源S100A12蛋白由pet28a(+)
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S100A12原核表达质粒诱导表达，并得到抗猪源S100A12蛋白单克隆抗体。6.根据权利要求3所述的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，S100A12的扩增引物序列如下：S100A12
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F 5

【专利技术属性】
技术研发人员：夏芃芃，闫丽，张秋霞，连思琪，罗轶，王逸之，吴云平，朱国强，顾宣强，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：