一种用超高压制备活的不可培养细菌的方法技术

本发明专利技术公开了一种制备活的不可培养细菌的方法。所述方法包括：将目的细菌经超高压处理，以便获得所述活的不可培养状态的细菌；其中，所述超高压处理是在200

【技术实现步骤摘要】
一种用超高压制备活的不可培养细菌的方法


[0001]本专利技术涉及食品和生物医药
，尤其涉及一种制备活的不可培养状态的细菌的方法。

技术介绍

[0002]细菌活的非可培养（viable but nonculturable,VBNC）状态、又称活的不可培养状态，是细菌在不良环境下的一种特殊形式，是指当细菌处于不良环境条件下，细胞会缩成球形，用常规方法培养并不能生长繁殖，但在适当的条件下仍然能复苏并具有生物活性、毒性或致病性的一种特殊生理状态。虽然活的非可培养状态细菌仍然具有代谢活性，但在非选择性培养基上无法生长并形成菌落，因此常规细菌检测方法无法检测到活的非可培养状态细菌的存在，这样会低估检测样品中细菌的数量，使其成为逃避检测的“隐形传染源”，给人们带来安全隐患。因此，研究有关活的非可培养状态细菌的特征及形成机制等方面对有效杀灭活的非可培养状态细菌至关重要。但目前需要很长时间才能获得活的非可培养状态细菌，从而限制了对其研究的进度。
[0003]因此，亟需开发一种快速制备活的非可培养状态细菌的方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本专利技术提供了一种制备活的不可培养细菌的方法，该方法采用超高压可快速制备得到活的不可培养细菌，为后续有关活的不可培养状态细菌的研究提供基础。
[0005]本专利技术是基于专利技术人的下列发现而完成的：超高压主要作用为破坏细菌细胞膜，而活的不可培养状态的细菌（简称活的不可培养细菌）的形成条件是拥有完整的细胞膜，因此，实现用超高压诱导活的不可培养细菌形成具有巨大困难。
[0006]然而，本专利技术的专利技术人意外发现，在较温和的超高压处理条件下，可实现将正常状态下的细菌诱导为活的不可培养细菌。由此，本专利技术的方法可制备得到活的不可培养状态细菌，且该方法具有制备时间短等优点，可为后续有关活的不可培养状态细菌的研究提供基础。
[0007]在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种制备活的不可培养状态的细菌的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：将目的细菌进行超高压处理，以便得到所述活的不可培养状态的细菌。本专利技术的方法可制备得到活的不可培养状态细菌，且该方法具有制备时间短等优点，可为后续有关活的不可培养状态细菌的研究提供基础。
[0008]根据本专利技术的实施例，所述超高压处理是在200
‑
600MPa条件下进行的。
[0009]根据本专利技术的实施例，所述超高压处理的温度为4℃
‑
37℃，所述超高压处理的时间为1
‑
40min。
[0010]根据本专利技术的实施例，所述超高压处理是在200
‑
500MPa条件下进行的。
[0011]根据本专利技术的实施例，所述超高压处理是在200
‑
400MPa、20~30℃条件下进行5~20min。
[0012]根据本专利技术的实施例，所述超高压处理之前，将所述目的细菌进行预培养处理，得到处于对数期或稳定期的细菌，所述超高压处理之前、所述预培养处理之后，将预培养处理产物进行离心处理，所述离心处理是在5000
×
g~8000
×
g条件下进行的。
[0013]根据本专利技术的实施例，所述超高压处理之前、所述离心处理之后，将离心处理沉淀物进行清洗处理，所述清洗处理是采用生理盐水或者PBS溶液进行的，所述生理盐水中的NaCl在所述生理盐水中的质量百分含量为0.85%。
[0014]根据本专利技术的实施例，所述目的细菌为处于对数期或稳定期的细菌。
[0015]根据本专利技术的实施例，所述目的细菌选自大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和解淀粉芽孢杆菌中的至少之一。
[0016]在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种活的不可培养状态的细菌。根据本专利技术的实施例，所述活的不可培养状态的细菌是依据本专利技术的第一方面所述的方法制备的。本专利技术的活的非可培养状态细菌，可为后续有关活的不可培养状态细菌的研究提供基础。
[0017]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
附图说明
[0018]本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：图1为本专利技术实施例1中超高压和高压二氧化碳处理诱导细菌进入活的非可培养状态所需时间。
[0019]图2为本专利技术实施例1中不同压力处理5分钟大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、解淀粉芽孢杆菌的活的非可培养细菌的数量。
具体实施方式
[0020]下面详细描述本专利技术的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。
[0021]需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本专利技术的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。
[0022]在本文中，术语“含有”、“包含”或“包括”为开放式表达，即包括本专利技术所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。
[0023]在本文中，术语“任选地”、“任选的”或“任选”通常是指随后所述的事件或状况可以但未必发生，并且该描述包括其中发生该事件或状况的情况，以及其中未发生该事件或状况的情况。
[0024]本专利技术提出了一种制备活的不可培养状态的细菌的方法以及活的不可培养状态的细菌，下面将分别对其进行详细描述。
[0025]制备活的不可培养状态的细菌的方法在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种制备活的不可培养状态的细菌的方法，其包括：将目的细菌经超高压处理，以便获得所述活的不可培养状态的细菌。该方法采用超高压可快速制备得到活的不可培养细菌，为后续有关活的不可培养状态细菌的研究提供基础。
[0026]在本专利技术的一些可选实施例中，所述超高压处理是在200
‑
600MPa条件下进行的，例如200MPa、300MPa、400MPa、500MPa、600 MPa以及它们任意两个点值之间的范围值，如200MPa
‑
500MPa、300MPa
‑
500MPa、300MPa
‑
400MPa、400MPa
‑
500MPa。
[0027]在本专利技术的一些可选实施例中，所述超高压处理的温度为4℃
‑
37℃，例如4℃、5℃、6℃、7℃、8℃、9℃、10℃、11℃、12℃、13℃、14℃、15℃、16℃、17℃、18℃、19℃、20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃以及它们任意两个点值之间的范围值，如5℃
‑
37℃、8℃
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备活的不可培养状态的细菌的方法，其特征在于，包括：将目的细菌进行超高压处理，以便得到所述活的不可培养状态的细菌。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高压处理是在200
‑
600MPa条件下进行的。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高压处理的温度为4℃
‑
37℃，所述超高压处理的时间为1
‑
40min。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高压处理是在200
‑
500MPa条件下进行的。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高压处理是在200
‑
400MPa、20~30℃条件下进行5~20min。6.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的方法，其特征在于，所述超高压处理之前，将所述目的细菌进行预培养处理，得到处于对数期或稳定期的...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖小军，杨东，饶雷，王永涛，赵靓，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：