诱导指甲兰属植物产生多倍体的方法技术

本发明专利技术提供了一种诱导指甲兰属植物产生多倍体的方法，包括：(a)使指甲兰的种子在第一培养基上萌发形成原球茎；以及(b)将指甲兰原球茎接种到第二培养基上，培养1

【技术实现步骤摘要】
诱导指甲兰属植物产生多倍体的方法


[0001]本专利技术属于多倍体育种
，尤其涉及利用秋水仙素诱导指甲兰属植物(例如多花指甲兰)原球茎产生多倍体的方法。

技术介绍

[0002]多花指甲兰(Aerides rose Lodd.ex Lindl.et paxt.)隶属兰科(Orchidaceae)，指甲兰属，为单轴分枝类兰花。花色粉嫩、花量大、花型奇特、花香馥郁，是观赏价值极高的兰花。花白色带紫色斑点，花型像是一只鸽子；花期7月，果期8月至次年5月。产于广西，贵州，云南。除了独特的花型和艳丽的花色，独特的芳香性也是多花指甲兰重要的价值之一。可与近缘属进行杂交，是培育有香味、花量大的蝴蝶兰优良品种。
[0003]多倍体诱导技术是目前兰花育种的重要手段。植株粗壮，花朵较大，抗逆性较强等是多倍体植株所具有的优良性状，越来越受到育种专家的重视。国内外专家对兰花多倍体的诱导和鉴定进行了大量的研究，目前石斛兰、蝴蝶兰、大花惠兰等热带兰及春兰、蕙兰等地生兰组织培养技术已经成熟，通常采用组织培养技术结合染色体加倍的方式进行多倍体的诱导，也可称为离体加倍诱导。离体加倍的诱导材料同时选用种子、原球茎、类原球茎、茎尖、顶芽、根尖、丛生芽、叶片等在组织培养的条件下进行染色体加倍的诱导。化学诱导是多倍体育种最常用的方法，促使植物细胞产生变异，通常使用生长素、麻醉剂和各类植物碱等对其诱导，秋水仙素是最常用的诱变剂。秋水仙素的浓度对植物的造成的破坏与变异程度呈正比关系，浓度较低则对植株伤害及变异程度较小。研究发现，与其他外植体相比较，原球茎具有较高的繁殖系数，能够快速增殖获得大量植株，从而多选用原球茎作为离体加倍的诱导材料。相较于浸泡法，共培法具有污染率低，对原球茎伤害较小等优点(范武波，2007)。
[0004]迄今，虽然在兰科植物的多倍体育种中，有使用秋水仙素通过共培法诱导多倍体的成功的例子，但在指甲兰属植物中尚未见对多倍体诱导研究的报道。而且，兰科植物种类极其丰富，分布极广，物种多样性高，不同种属、品种间的研究结果往往差别巨大，导致已有研究成果难以被借鉴。例如，李涵(2005)使用秋水仙素对沉香虎头兰(C.iridioides)进行诱导后发现，秋水仙素经过72h的处理且浓度为0.05％时的诱导效果较好。杨丽娟(2009)使用共培法，将浓度为3％的秋水仙素加入培养基中对大花惠兰
‘
红宝石
’
进行诱导，实验表明，处理15d的效果最佳，诱导率高达30％。由此可见，在利用秋水仙素进行共培时，兰科不同物种对秋水仙素浓度、诱导时间等条件的要求大相径庭，没有规律可以遵循。
[0005]本专利技术以指甲兰属植物(例如多花指甲兰)为诱导材料，采用共培法，通过用不同浓度的秋水仙素处理不同时间来探讨秋水仙素诱导原球茎加倍的适宜条件及适合指甲兰培育的培养基，同时探讨了指甲兰的多倍体的鉴定方法，包括流式细胞术、染色体压片、形态学观察、气孔鉴定等，以为兰花多倍体诱导技术的改进、培育观赏价值高的新种质提供参考。

技术实现思路

[0006]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种诱导指甲兰产生多倍体的方法，包括以下步骤：
[0007](a)使指甲兰的种子在第一培养基上萌发形成原球茎；以及
[0008](b)将指甲兰原球茎接种到第二培养基上，培养1
‑
15d(例如1
‑
10d、2
‑
10d、3
‑
10d、4
‑
10d、5
‑
10d、5d、6d、10d、5
‑
8d、6
‑
9d、或其间的任何数值或范围)，所述第二培养基含有浓度为0.01％
‑
0.2％(例如0.01％
‑
0.1％、0.02％
‑
0.09％、0.03％
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0.08％、0.04％
‑
0.07％、0.05％
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0.06％、0.04％、0.05％、0.06％、或其间的任何数值或范围)的秋水仙素。
[0009]在一些实施方案中，步骤(b)包括使指甲兰原球茎在第二培养基上培养5
‑
15d，例如5
‑
10d。在一些实施方案中，所述第二培养基含有浓度为0.05％
‑
0.2％，例如0.05％
‑
0.1％、0.05％
‑
0.09％、0.05％
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0.08％、0.05％
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0.07％、0.05％
‑
0.06％的秋水仙素。在一些实施方案中，步骤(b)包括使指甲兰原球茎在第二培养基上培养5
‑
10d，以及所述第二培养基含有浓度为大于等于0.05％、小于0.1％的秋水仙素，例如0.05％
‑
0.07％、0.05％
‑
0.06％。
[0010]在一些实施方案中，所述第一培养基为液体培养基。在一些实施方案中，所述第一培养基包含1/2MS+0.5g
·
L
‑
1琼脂+20g
·
L
‑
1蔗糖+100g
·
L
‑
1椰汁，或由其组成。在一些实施方案中，所述第一培养基包含1/2MS+5g
·
L
‑
1卡拉胶+100g
·
L
‑
1香蕉泥+20g
·
L
‑
1蔗糖或由其组成。在一些实施方案中，所述第一培养基包含1/2MS+0.5g
·
L
‑
1琼脂+100g
·
L
‑
1香蕉泥+20g
·
L
‑
1蔗糖或由其组成。
[0011]在一些实施方案中，所述第二培养基为固体培养基。在一些实施方案中，所述第二培养基包含1/2MS+1.0mg
·
L
‑
1 6
‑
苄基腺嘌呤+0.2mg
·
L
‑
1琼脂+20g
·
L
‑
1蔗糖，或者由1/2MS+1.0mg
·
L
‑
1 6
‑
苄基腺嘌呤+0.2mg
·
L
‑
1琼脂+20g
·
L
‑
1蔗糖组成。
[0012]在一些实施方案中，所述方法还包括：(c)将步骤(b)获得的原球茎转接至第三培养基中，进行继代培养。在一些实施方案中，所述第三培养基为继代培养基，例如本领域熟知的那些(例如1/2MS+1.0mg/L 6
‑
BA+0.2mg
·
L
‑
1NAA+5.0g
·
L
‑
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诱导指甲兰产生多倍体的方法，包括以下步骤：(a)使指甲兰的种子在第一培养基上萌发形成原球茎；以及(b)将指甲兰原球茎接种到第二培养基上，培养1
‑
15d，所述第二培养基含有浓度为0.01％
‑
0.2％的秋水仙素。2.根据权利要求1所述的方法，还包括：(c)将步骤(b)获得的原球茎转接至第三培养基中，进行继代培养。3.根据权利要求1
‑
2中任一项所述的方法，其中所述第一培养基为液体培养基；和/或，所述第一培养基包含1/2MS+0.5g
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L
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1琼脂+20g
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L
‑
1蔗糖+100g
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L
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1椰汁，或者所述第一培养基包含1/2MS+5g
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L
‑
1卡拉胶+100g
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L
‑
1香蕉泥+20g
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L
‑
1蔗糖。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的方法，其中所述第二培养基为固体培养基，和/或，所述第二培养基包含1/2MS+1.0mg
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L
‑
1 6
‑
苄基腺嘌呤+0.2mg
·
L...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾瑞冬，郑棚汭，董春燕，葛红，杨树华，赵鑫，寇亚平，王立，李秋香，雒琴，朱晋宇，
申请(专利权)人：青州市亚泰农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：