人类免疫缺陷病毒中和抗体及其使用方法技术

本发明专利技术涉及人类免疫缺陷病毒中和抗体及其使用方法。具体而言，本发明专利技术提供针对人类免疫缺陷病毒或HIV的表位的广谱中和抗体。本发明专利技术进一步提供了包含用于预防的HIV抗体的组合物和用于诊断和治疗HIV感染的方法。物和用于诊断和治疗HIV感染的方法。

【技术实现步骤摘要】
人类免疫缺陷病毒中和抗体及其使用方法
[0001]本申请是申请号为201280035621.2(201610569462.4，2020111168707)，申请日为2012年5月17日，专利技术名称为“人类免疫缺陷病毒中和抗体及其使用方法”的中国专利申请的分案申请。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请根据35 U.S.C.
§
119(e)要求2011年5月17日提交的美国临时申请No.61/486,960的优先权。该临时申请的公开内容以其整体并入本文。
[0004]联邦基金资助研究的声明
[0005]导致本专利技术的研究部分地受到美国国立卫生研究院基金No.P01 AI08677
‑
01的支持。因此，美国政府对本专利技术有一定的权利。
[0006]序列表
[0007]本申请含有以ASCII格式电子提交的序列表，其全文通过引用并入本文。所述制作于2016年1月21日的ASCII拷贝命名为1603418US01
‑
序列表.txt，大小为935961字节。


[0008]本专利技术涉及针对人免疫缺陷病毒(“HIV”)的表位的抗体。本专利技术还涉及用于预防和治疗HIV感染的针对HIV的gp120包膜蛋白的广谱中和抗体的制备及应用。

技术介绍

[0009]HIV导致获得性免疫缺陷综合征(“AIDS”)。长期非进展者中对HIV感染的免疫反应表明，特异性病毒免疫可限制疾病的感染和症状。一些HIV感染个体在其血清中显示有广谱中和IgG抗体；虽然它们对于设计有效的疫苗有潜在的重要性，但对于这些抗体的特异性和活性知之甚少，并且还没有单个的特征与保护性免疫相对应。在动物模型中，中和抗体的被动转移可以有助于防止病毒攻击。中和抗体反应也可以在HIV感染的个体中发展，但血清反应的详细组成仍未完全揭示。
[0010]已经揭示了AIDS的许多免疫异常。这些包括但不限于，B细胞功能异常、异常抗体反应、单核细胞功能缺陷、细胞因子生产受损、自然杀伤细胞和细胞毒细胞功能抑制、淋巴细胞对可溶抗原的识别和反应能力缺陷，以及T4辅助/诱导淋巴细胞群的耗竭。
[0011]来自大量HIV病毒株的编码HIV env的氨基酸和RNA序列是已知的(Modrow,S.等人.,J.Virology 61(2):570(1987))。HIV病毒体覆盖着源自宿主细胞外膜的膜或包被。该膜包含在其羧基末端区域锚定于膜双层的一群包膜糖蛋白(gp 160)。每个糖蛋白包含两个片段：N
‑
末端片段和C
‑
末端片段。N
‑
末端片段，由于其相对分子量为约120kD，而称为gp 120，突出到包围病毒体的水环境中。C
‑
末端片段，命名为gp 41，横跨膜。N
‑
末端gp 120和C
‑
末端gp 41通过对溶蛋白性裂解特别敏感的肽键共价连接。参见McCune等人的欧洲专利申请公开号No.0 335 635以及其所引用的参考文献，每一个以全文引用的方式并入本文。
[0012]已经提出几种构建AIDS疫苗的方法，包括但不限于，灭活和减毒病毒疫苗、来自病毒感染细胞的亚单位疫苗、重组生产的病毒抗原、基于合成肽的疫苗、抗独特型疫苗和基于
病毒载体的疫苗。另外一种用于HIV治疗性和预防性治疗的方法包括制造强效的广谱中和单克隆抗体。多个研究已经报道了通过各种技术来克隆和制造靶向CD4结合位点和病毒体刺突的其他部分并中和HIV的单克隆抗体。一般来说，这些技术包括自我融合或噬菌体展示技术。通常，在使用噬菌体展示技术制备HIV中和抗体时，重链和轻链的随机组合被组合且选择随机的一对。研究已经报道了有限数目的单克隆抗体，例如，噬菌体展示抗体b12，其是广谱强效的，并广谱中和(即抗体可以中和血清中的多种HIV)HIV。单克隆抗体b12是已报道的预防猕猴中HIV感染的广谱中和抗体。另一个广谱中和抗体包括2G12，其非典型地具有在其它任何具有三个组合位点的抗体中发现的结构。
[0013]VRC01是最近发现的靶向HIV刺突上的CD4结合位点(CD4bs)的广谱中和抗体。通过纯化结合可溶的、生物素标记的、稳定化的以及重现表面化的(re
‑
surfaced)的HIV gp120的核心片段的单个B细胞而分离出VRC01(X.Wu等人.,Science 329,856(Aug 13,2010))。虽然是成功的，但分离效率低，从一个个体的2500万个外周血单核细胞仅产生3个密切相关的结合HIV的抗体。和其它通过单个细胞抗原捕获方法所获得的抗
‑
HIV抗体一样，VRC01
‑
3显示了非常高水平的体细胞突变，其对于效力和广度是基本的。这种高频率突变对于抗体克隆是潜在的障碍，因为突变序列可能不再与用于克隆的引物互补。
[0014]一些研究报道，某些患者产生广谱中和的HIV抗体。研究报道了，在非人灵长类的被动转移实验中，抗体可以防御初始的HIV感染，并且可以在感染过程中调节病毒装载。参见，例如，Mascola,2000；Shibata,1999；Veazey,2003；Parren,2001；Mascola,1999；Trkola,2005；Wei,2003；Frost,2005；Burton,2004；Mascola,2007；Karlsson Hedestam,2008；McMichael,2006；Zolla
‑
Pazner,2004。

技术实现思路

[0015]本专利技术在一个实施方式中提供了HIV广谱中和抗体。在一个实施方式中，本专利技术提供了分离的HIV抗体，其包含重链，该重链包含共有的氨基酸序列：
[0016]QXXLXQSGGXVKKPGXSVXVSCXASGYXXFXXYXIHWXRQAPGXGXXWVGXIXPRXGXXXXAXXFQGRLSLTRDXXXXXXTXXXFMDLXGLRXDDTAVYFCARXXXXXXXXXXXXXXXXXXDX(SEQ ID NO:1)，其中X表示任意氨基酸或无氨基酸。
[0017]在另一个实施方式中，本专利技术提供了分离的HIV抗体，其包含轻链，该轻链包含共有的氨基酸序列：
[0018]EIXLTQSPXSLSXSXGEXXTISCXXXQXXXXXXXLXWYQQRXGXAPRLLIXXXSXXXXGVPXRFSGXXXGXXYXLXISXLXXDDXAXYFCXXYEXXXXXXX(SEQ ID NO:2)，其中X表示任意氨基酸或无氨基酸。
[0019]在另一个实施方式中，本专利技术提供了分离的HIV抗体，其包含重链和轻链，其中重链包括高度保守的共有序列，轻链包括高度保守的共有序列。本专利技术进一步提供了生产分离的HIV抗体的方法，该抗体包含重链和轻链，其中重链包含高度保守的共有序列，轻链包含高度保守的共有序列。
[0020]在另一个实施方式中，本专利技术提本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的HIV抗体，其包括含有SEQ ID NO：1的共有氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO：2的共有氨基酸序列的轻链的一个或两个。2.如权利要求1所述的分离的HIV抗体，其中所述抗体在小于1.0μg/ml的IC
50
浓度中和HIV病毒ZM53M.PB12，或在小于1.0μg/ml的IC
50
浓度中和HIV病毒R1166.c1，或在小于30μg/ml的IC
50
浓度中和DU172.17。3.如权利要求1所述的分离的HIV抗体，其中所述抗体在小于30μg/ml的IC
50
浓度中和VRC01耐受的HIV病毒。4.一种分离的HIV抗体，其选自3BNC117、3BNC60、12A12、12A21、NIH45
‑
46、bANC131、8ANC134、IB2530、INC9和8ANC196。5.一种分离的HIV抗体，其包含选自SEQ ID NO：5
‑
583的氨基酸序列。6.一种分离的HIV抗体，其包含在重链FR3区域的插入序列SEQ ID No：3和在重链CDR3区域的插入序列SEQ ID No：4的至少一个。7.一种提高分离的HIV抗体的中和效力的方法，其包括制备包括在重链FR3区域的插入序列SEQ ID No：3和在重链CDR3区域的插入序列SEQ ID No：4的至少一个的分离的HIV抗体。8.一种包括权利要求1
‑
6任一项所述的分离的HIV抗体的组合物。9.一种编码权利要求1
‑
6任一项所述的分离的HIV抗体的核酸分子。10.一种包含权利要求9的核酸分子的载体。11.一种包含权利要求10的载体的细胞。12.一种药物组合物，其包括至少一种权利要求1
‑
6任一项所述的抗体或其片段和药学上可接受的载体。13.一种预防或治疗HIV感染或HIV相关疾病的方法，其包括以下步骤：a)鉴定需要这种预防或治疗的患者，并b...

【专利技术属性】
技术研发人员：约翰内斯，
申请(专利权)人：加州理工学院，
类型：发明
国别省市：