一种抗降钙素原的纳米抗体、试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗降钙素原的纳米抗体、试剂盒及应用，涉及单域重链抗体技术领域。本发明专利技术提供的4株抗PCT纳米抗体对PCT抗原均具有特异的识别和结合能力，且具有独特的抗原决定簇识别位点，因此，显示出本发明专利技术提供的纳米抗体具有高度特异的结合活性。本发明专利技术提供的纳米抗体可以用于降钙素原的检测、富集和纯化，或者用于辅助诊断、诊断、疗效评估、复发监测感染性炎症。检测样本中PCT浓度的变化，有利于判断机体细菌感染情况，评判机体健康状况，对临床和基础性研究均具有重要意义。和基础性研究均具有重要意义。和基础性研究均具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种抗降钙素原的纳米抗体、试剂盒及应用


[0001]本专利技术涉及单域重链抗体
，具体而言，涉及一种抗降钙素原的纳米抗体、试剂盒及应用。

技术介绍

[0002]降钙素原(Procalcitonin，PCT)是一种由116个氨基酸组成、分子量为13kDa的糖蛋白，是血清降钙素(CT)的前体物，在人体内的半衰期约为20
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24小时，稳定性好。正常条件下，PCT在甲状腺C细胞中生成并裂解成降钙素。人血清PCT含量极低，约为2.5pg/mL。在一些非甲状腺损伤如细菌感染引起的全身炎症反应、败血症或脓毒症休克、慢性肾衰等患者血清PCT及其组分均显著升高。
[0003]PCT可作为一种能特异性区分细菌感染和其他原因导致的炎症反应的重要标志物，当严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭时，其在血浆中的水平升高。临床资料显示，PCT浓度大于0.1ng/ml时说明存在临床相关的细菌感染，需要采用抗生素进行治疗；当PCT浓度大于0.5ng/ml时，要考虑患者可能发展成重症败血症或败血症性休克的危险。PCT反映了全身炎症反应的活跃程度。而影响PCT水平的因素包括被感染器官的大小和类型、细菌的种类、炎症的程度和免疫反应的状况。检测病例中PCT浓度的变化，有利于判断机体细菌感染情况，评判机体健康状况，对临床和基础性研究均具有重要意义。
[0004]PCT作为一种新的、具有创新意义的严重细菌感染等疾病的检测指标，PCT提高了临床诊断的准确性，为重症监护、放化疗、服用免疫抑制剂或器官移植等患者合并发热时提供了极其重要的诊断、进一步的检查和治疗的临床依据。
[0005]目前PCT检测方法大多使用的是传统抗体(鼠源单克隆抗体、兔源多克隆抗体以及山羊抗体)，这些抗体存在分子量大，稳定性差等缺陷，使得PCT检测灵敏度受到了一定的限制。
[0006]基于PCT在临床诊断、治疗和预后方面所表现出的突出特性，研发出针对PCT的特异性结合抗体显得尤为重要。
[0007]PCT这一炎症标志物，目前国外主要是有罗氏的电化学发光试剂盒问世，但是电化学发光存在交叉污染潜在问题，且对环境因素和其它非特异性反应过于敏感，同时电化学发光仪器及试剂完全依赖进口，价格非常昂贵，为患者带来一定的经济负担。另外雅培、西门子等进口品牌都有PCT的化学发光检测试剂盒，其主要弊端是较为昂贵。国产试剂盒有深圳迈瑞、上海透景、安图生物、深圳新产业的化学发光试剂盒，也有万孚生物、基蛋生物等的免疫层析试剂盒，总体来说，都存在有检测灵敏度低的缺点。
[0008]现有专利中，CN110903390A、CN110885374A、CN113416250A中提供了PCT纳米抗体的相关专利申请，且展示了纳米抗体在抗原检测上的应用前景，但是在具体应用上，即使拥有高亲和力的纳米抗体，在抗原检测的实际操作中仍然存在很大的技术问题。例如，在免疫夹心检测法中的第一抗体和第二抗体之间的抗原结合位点的重叠度问题，以及纳米抗体热稳定性的一系列问题依然是获得高效检测试剂盒的技术难题所在。
[0009]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0010]本专利技术的目的在于提供一种抗降钙素原的纳米抗体、试剂盒及应用以改善抗体的亲和力，提升试剂盒的检测灵敏度。
[0011]本专利技术是这样实现的：
[0012]第一方面，本专利技术提供了一种抗降钙素原的纳米抗体，纳米抗体包括如下任一项所示的重链可变区，且每个重链可变区均包含CDR1、CDR2和CDR3：
[0013](1)如SEQ ID No.9～11所示；
[0014](2)如SEQ ID No.12～14所示；
[0015](3)如SEQ ID No.15～17所示；
[0016]和(4)如SEQ ID No.18～20所示。
[0017]专利技术人筛选获得了4种纳米抗体，这4种纳米抗体对于降钙素原均具有优异的特异性抗原结合能力，且均具有较高的亲和力和热稳定性。可以用于开发降钙素原的检测产品、富集产品、纯化产品、辅助诊断或诊断感染性炎症、疗效评估感染性炎症、复发监测感染性炎症试剂盒。将上述纳米抗体与免疫磁珠体系、化学发光体系相结合，也可以开发磁微粒化学发光检测试剂盒。磁微粒化学发光技术既具有放射免疫的高灵敏度，又具有酶联免疫操作的简便、快速特点，易于自动化操作。
[0018]上述纳米抗体中，具有如SEQ ID No.9～11所示的重链可变区的纳米抗体以及具有如SEQ ID No.15～17所示的重链可变区的纳米抗体具有更优地与PCT抗原的结合能力。
[0019]另外，需要说明的是，本专利技术中，“降钙素原”，“PCT”均为指代相同的含义。
[0020]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述纳米抗体还包括骨架区；其重链可变区的结构为：FR1
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CDR1
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FR2
‑
CDR2
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FR3
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CDR3
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FR4。
[0021]在一种可选的实施方式中，骨架区选自如下任意一种：
[0022](1)序列依次如SEQ ID NO.21
‑
24所示的重链骨架区FR1、FR2、FR3和FR4；
[0023](2)序列依次如SEQ ID NO.25
‑
28所示的重链骨架区FR1、FR2、FR3和FR4；
[0024](3)序列依次如SEQ ID NO.29
‑
32所示的重链骨架区FR1、FR2、FR3和FR4；
[0025]以及(4)序列依次如SEQ ID NO.33
‑
36所示的重链骨架区FR1、FR2、FR3和FR4。
[0026]在一种可选的实施方式中，纳米抗体为单价纳米抗体、多价纳米抗体、多特异性抗体和融合型纳米抗体中的至少一种。
[0027]名词解释：
[0028]单价纳米抗体：是用特异性的抗原从纳米抗体库中筛选得到的抗原特异性的纳米抗体，因其表面有大量的亲水残基，能保持严格的单体结构，且仅以这种单体形式就能高特异性、高亲和力地与其抗原相结合。
[0029]多价纳米抗体：多价抗体是识别同一种表位的单价抗体的聚合物，比对应的单价纳米抗体具有更高的抗原亲和力。多特异性抗体是识别不同表位的单价抗体的聚合物，能结合不同靶目标或同一靶目标的不同表位，比单价抗体具有更高的抗原识别能力。而纳米抗体结构简单，只有一个结构域，可通过短小的连接序列聚合在一起，从而转换成多价和多特异性的形式。
[0030]融合型纳米抗体：纳米抗体具有严格的单体特点且其相对分子质量很小，很容易通过基因工程技术与其他结构(如BSA、IgG
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Fc等)结合形成新的融合分子，如能延长其半衰期的酶、抗菌肽或显影物质等。在新的融合分子中，纳米抗体与其靶抗原定向结合，与纳米抗体融合的部分就能发挥相应的功能。在临床，医生希望药物能在体内停留足够长本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗降钙素原的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括如下任一项所示的重链可变区，且每个所述重链可变区均包含CDR1、CDR2和CDR3：(1)如SEQ ID No.9～11所示；(2)如SEQ ID No.12～14所示；(3)如SEQ ID No.15～17所示；和(4)如SEQ ID No.18～20所示。2.根据权利要求1所述的抗降钙素原的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体还包括骨架区；优选地，所述骨架区选自如下任意一种：(1)序列依次如SEQ ID NO.21
‑
24所示的重链骨架区FR1、FR2、FR3和FR4；(2)序列依次如SEQ ID NO.25
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28所示的重链骨架区FR1、FR2、FR3和FR4；(3)序列依次如SEQ ID NO.29
‑
32所示的重链骨架区FR1、FR2、FR3和FR4；以及(4)序列依次如SEQ ID NO.33
‑
36所示的重链骨架区FR1、FR2、FR3和FR4；优选地，所述纳米抗体为单价纳米抗体、多价纳米抗体、多特异性抗体和融合型纳米抗体中的至少一种；优选地，当所述纳米抗体为单价纳米抗体时，所述纳米抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8所示。3.一种抗体，其特征在于，其含有权利要求1或2所述的抗降钙素原的纳米抗体或包括权利要求1或2所述的抗降钙素原的纳米抗体的重链可变区。4.一种核酸分子或包含所述核酸分子的重组载体，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1或2所述的抗降钙素原的纳米抗体；或所述核酸分子编码权利要求3所述的抗体；优选地，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示。5.一种宿主细胞，其特征在于，其含有权利要求4所述的重组载体。6.一种制备如权利要求1或2所述的抗降钙素原的纳米抗体或制备如权利要求3所述的抗体的方法，其特征在于，其包括：培养权利要求5所述的宿主细胞。7.一种如权利要求1或2所述的抗降钙素原的纳米抗体或权利要求3所述的抗体在制备降钙素原检测产品、降钙素原富集产品、降钙素原纯化产品、辅助诊断感染性炎症、诊断感染性炎症、疗效评估感染性炎症或复发监测感染性炎症试剂盒中的应用；其特征在于，所述辅助诊断感染性炎症、诊断感染性炎症、疗效评估感染性炎症或复发监测感染性炎症试剂盒以PCT为辅助诊断、诊断、疗效评估或复发监测标志物；优选地，所述检测产品选自试剂盒或芯片；优选地，所述检测产品为试剂；优选地，所述试剂盒为化学发光免疫分析试剂盒、放射性免疫分析试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、荧光免疫分析试剂盒或时间分辨荧光免疫分析试剂盒；优选地，所述试剂盒为磁微粒化学发光检测试剂盒；优选地，所述降钙素原富集产品或纯化产品包括载体以及载体上的纳米抗体或抗体；优选地，所述载体选自纳米颗粒、磁珠、琼脂糖凝胶微球、硅胶微球、乳胶微球或多孔材料；
优选地，以SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8所示的纳米抗体为捕获抗体；优选地，以SEQ ID NO.6所示的纳米抗体为捕获抗体，以SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8所示的...

【专利技术属性】
技术研发人员：姬满祎，
申请(专利权)人：上海翎因生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：