一种具有生物活性的医用敷料胶原蛋白海绵制备方法技术

本发明专利技术公开了一种具有生物活性的医用敷料胶原蛋白海绵制备方法，选择与人类胶原蛋白结构相似的牛跟腱为原料，将牛跟腱处理并脱脂除杂后，采用酸

【技术实现步骤摘要】
一种具有生物活性的医用敷料胶原蛋白海绵制备方法


[0001]本专利技术涉及新型生物医用材料术领域，具体涉及一种具有生物活性的医用敷料胶原蛋白海绵制备方法。

技术介绍

[0002]目前，在外科手术中需要大量的胶原敷料。胶原敷料主要有明胶海绵或交联后的胶原蛋白海绵，其中，大多使用的是明胶海绵止血，但是，这种材料亲水性差，止血效果不佳。明胶海绵由于胶原蛋白三维螺旋结构被破坏，不再具有生物活性，分子量降低，导致力学性能差，且极易于降解；胶原蛋白海绵，在临床上具有良好的止血作用，能使创口渗血区血液很快凝结，被人体组织逐渐吸收，一般用于内脏手术时的毛细血管渗出性出血。当前，胶原蛋白海绵临床应用已包括普通外科、心血管外科、整形外科、泌尿外科、骨科、皮肤科、烧伤科、妇产科以及口腔科、耳鼻喉科、眼科等几乎所有的手术，应用十分广泛。
[0003]但是，在胶原蛋白海绵制备过程中，同组织中分离纯化得到的胶原蛋白在纯度、理化性质和胶原蛋白构型方面有显著的差异，其吸水速率慢，吸水倍率低，力学强度低，生物活性差。目前，胶原蛋白海绵制备常用的方法是经酶消化后提纯，冷冻干燥制得，也有少数学者(范春娣等)采用基因工程发酵法获得类人胶原蛋白，但其成纤维性不及天然胶原，所以其广泛应用有待验证。
[0004]因此，如何克服明胶海绵由于胶原蛋白三维螺旋结构被破坏，不再具有生物活性，分子量降低，导致力学性能差，且极易于降解，不利于后期创面的止血及愈合修复的问题，以及改善胶原蛋白海绵制备过程海绵孔隙率和吸水率低、I型胶原蛋白纯度低的问题，制备出更好的，适用于外科手术的胶原敷料，是当前急需解决的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是克服现有的胶原蛋白海绵制备过程中存在的问题。本专利技术的具有生物活性的医用敷料胶原蛋白海绵制备方法，选择与人类胶原蛋白结构相似的牛跟腱为原料，将牛跟腱处理并脱脂除杂后，采用酸
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酶(酸溶、酶解)结合法从沉淀中提取Ⅰ型胶原(交联反应胶原)，解决普通胶原蛋白海绵孔隙率和吸水率低、I型胶原蛋白纯度低等问题，具有良好的应用前景。
[0006]为了达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0007]一种具有生物活性的医用敷料胶原蛋白海绵制备方法，包括以下步骤，
[0008]步骤(A)，选择与人类胶原蛋白结构相似的牛跟腱为原料；
[0009]步骤(B)，对牛跟腱原料进行预处理；
[0010]步骤(C)，对预处理后的牛跟腱进行碱处理；
[0011]步骤(D)，对碱处理后的牛跟腱进行酸溶，得到牛跟腱酸溶溶液；
[0012]步骤(E)，对牛跟腱酸溶溶液进行酶解，得到上清液的胶原液；
[0013]步骤(F)，对上清液的胶原液进行盐析，得到盐析胶原；
[0014]步骤(G)，对盐析胶原进行溶胀透析，得到溶胀透析胶原；
[0015]步骤(H)，对溶胀透析胶原进行交联，得到交联反应胶原；
[0016]步骤(I)，对交联反应胶原进行模具冷冻成型，制成医用敷料胶原蛋白海绵；
[0017]步骤(J)，对医用敷料胶原蛋白海绵进行灭菌、包装，完成医用敷料胶原蛋白海绵的制备。
[0018]前述的具有生物活性的医用敷料胶原蛋白海绵制备方法，步骤(B)，对牛跟腱原料进行预处理，具体过程如下：
[0019](B1)，浸泡并清洗牛跟腱原料，剪掉牛跟腱外侧多余脂肪；
[0020](B2)，将(B1)处理后的牛跟腱冷冻2～4h后，切片切条，并通过组织绞肉机进行捣碎处理，完成牛跟腱原料的预处理。
[0021]前述的具有生物活性的医用敷料胶原蛋白海绵制备方法，步骤(C)，对预处理后的牛跟腱进行碱处理，具体过程如下：
[0022](C1)，配制5％～8％浓度的碳酸钠溶液或碳酸氢钠溶液；
[0023](C2)，将配制好的碳酸钠溶液或碳酸氢钠溶液倒入预处理后的牛跟腱中，用玻璃棒搅拌后浸泡18～24h，其中，牛跟腱与碳酸钠溶液或碳酸氢钠溶的料液比为1g:30ml～1g:50ml；
[0024](C3)，将(C2)处理后的牛跟腱倒入滤网中并清洗干净，完成牛跟腱的碱处理。
[0025]前述的具有生物活性的医用敷料胶原蛋白海绵制备方法，步骤(D)，对碱处理后的牛跟腱进行酸溶，得到牛跟腱酸溶溶液，具体过程如下：
[0026](D1)，配制浓度为2％～5％的乙酸溶液；
[0027](D2)，将配制好的乙酸溶液倒入碱处理后的牛跟腱中，用玻璃棒搅拌后浸泡36～48h，牛跟腱酸溶溶液，其中牛跟腱与乙酸溶液的料液比为1g:40ml～1g:50ml。
[0028]前述的具有生物活性的医用敷料胶原蛋白海绵制备方法，步骤(E)，对牛跟腱酸溶溶液进行酶解，得到上清液的胶原液，具体过程如下：
[0029](E1)，按照100g牛跟腱需要1g～5g胃蛋白酶的比例计算所需的胃蛋白酶酶；
[0030](E2)，将计算所需的胃蛋白酶酶加入牛跟腱酸溶溶液中，用搅拌机每2h搅拌时间30～50min，进行酶解6h～8h，酶解反应后，得到酶解溶液；
[0031](E3)，酶解反应的终止需要浓度为30％的过氧化氢溶液，按照酶解溶液体积的1％～2％比例加入，使用搅拌机搅拌2～3h，得到胶原粗液；
[0032](E4)，对胶原粗液进行进行抽滤，滤出得到胶原粗提液；
[0033](E5)，对胶原粗提液进行离心处理，按照离心速度10000rpm，离心时间30～40min，得到上清液的胶原液。
[0034]前述的具有生物活性的医用敷料胶原蛋白海绵制备方法，步骤(F)，对上清液的胶原液进行盐析，得到盐析胶原，具体过程如下：
[0035](F1)，通过碱液调节上清液的胶原液的pH值至4.5～6.5，所述碱液可选氨水或氢氧化钠溶液；
[0036](F2)，按照质量体积比m/V为100(g/L)～150(g/L)的比例，将氯化钠加入碱液调节后的上清液的胶原液，使用搅拌机搅拌10～15min，搅拌转速控制在6000～8000rpm之间；再减速继续搅拌2h～4h，搅拌转速控制在4000～5000rpm之间，进行盐析；
[0037](F3)，将盐析后的上清液的胶原液，放入滤网清洗，得到盐析胶原。
[0038]前述的具有生物活性的医用敷料胶原蛋白海绵制备方法，步骤(G)，对盐析胶原进行溶胀透析，得到溶胀透析胶原，具体过程如下：
[0039](G1)，配制浓度为0.5％～2％的溶胀溶液，所述溶胀溶液的溶胀试剂选择柠檬酸、草酸、乙酸或冰醋酸中的一种或多种；
[0040](G2)，将盐析胶原分成若干份，缓慢加入溶胀溶液，并采用搅拌机低速搅拌30～50min，搅拌转速控制在800
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1200rpm之间，至胶原完全溶解，形成均透明胶原液；
[0041](G3)，将透明胶原液置于2～8℃冰箱中，静置浸泡24～48h；
[0042](G4)，将(G3)处本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有生物活性的医用敷料胶原蛋白海绵制备方法，其特征在于：包括以下步骤，步骤（A），选择与人类胶原蛋白结构相似的牛跟腱为原料；步骤（B），对牛跟腱原料进行预处理；步骤（C），对预处理后的牛跟腱进行碱处理；步骤（D），对碱处理后的牛跟腱进行酸溶，得到牛跟腱酸溶溶液；步骤（E），对牛跟腱酸溶溶液进行酶解，得到上清液的胶原液；步骤（F），对上清液的胶原液进行盐析，得到盐析胶原；步骤（G），对盐析胶原进行溶胀透析，得到溶胀透析胶原；步骤（H），对溶胀透析胶原进行交联，得到交联反应胶原；步骤（I），对交联反应胶原进行模具冷冻成型，制成医用敷料胶原蛋白海绵；步骤（J），对医用敷料胶原蛋白海绵进行灭菌、包装，完成医用敷料胶原蛋白海绵的制备。2.根据权利要求1所述的具有生物活性的医用敷料胶原蛋白海绵制备方法，其特征在于：步骤（B），对牛跟腱原料进行预处理，具体过程如下：（B1），浸泡并清洗牛跟腱原料，剪掉牛跟腱外侧多余脂肪；（B2），将（B1）处理后的牛跟腱冷冻2~4h后，切片切条，并通过组织绞肉机进行捣碎处理，完成牛跟腱原料的预处理。3.根据权利要求2所述的具有生物活性的医用敷料胶原蛋白海绵制备方法，其特征在于：步骤（C），对预处理后的牛跟腱进行碱处理，具体过程如下：（C1），配制5%~8%浓度的碳酸钠溶液或碳酸氢钠溶液；（C2），将配制好的碳酸钠溶液或碳酸氢钠溶液倒入预处理后的牛跟腱中，用玻璃棒搅拌后浸泡18~24h，其中，牛跟腱与碳酸钠溶液或碳酸氢钠溶的料液比为1g:30ml~1g:50ml；（C3），将（C2）处理后的牛跟腱倒入滤网中并清洗干净，完成牛跟腱的碱处理。4.根据权利要求3所述的具有生物活性的医用敷料胶原蛋白海绵制备方法，其特征在于：步骤（D），对碱处理后的牛跟腱进行酸溶，得到牛跟腱酸溶溶液，具体过程如下：（D1），配制浓度为2%~5%的乙酸溶液；（D2），将配制好的乙酸溶液倒入碱处理后的牛跟腱中，用玻璃棒搅拌后浸泡36~48h，牛跟腱酸溶溶液，其中牛跟腱与乙酸溶液的料液比为1g:40ml~1g:50ml。5.根据权利要求4所述的具有生物活性的医用敷料胶原蛋白海绵制备方法，其特征在于：步骤（E），对牛跟腱酸溶溶液进行酶解，得到上清液的胶原液，具体过程如下：（E1），按照100g牛跟腱需要1g~5g胃蛋白酶的比例计算所需的胃蛋白酶酶；（E2），将计算所需的胃蛋白酶酶加入牛跟腱酸溶溶液中，用搅拌机每2h搅拌时间30~50min，进行酶解6h~8h，酶解反应后，得到酶解溶液；（E3），酶解反应的终止需要浓度为30%的过氧化氢溶液，按照酶解溶液体积的1%~2%比例加入，使用搅拌机搅拌2~3h，得到胶原粗液；（E4），对胶原粗液进行进行抽滤，滤出得到胶原粗提液；（E5），对胶原粗提液进行离心处理，按照离心速度10000 rpm，离心时间30~40min，得到上清液的胶原液。6.根据权利要求5所述的具有生物活性的医用敷料胶原蛋白海绵制备方法，其特征在
于：步骤（F），对上清液的胶原液进行盐析，...

【专利技术属性】
技术研发人员：许力心，孙慧，尹曼琦，蔡飞翔，张文浩，顾盈，
申请(专利权)人：西岭镇江医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：