制备软组织填充物的方法和制备脂肪组织移植物的方法技术

本发明专利技术提供了一种制备软组织填充物的方法，其包括将加工的脂肪抽吸物和完整的、未解聚的脂肪组织片段混合以得到所述软组织填充物。本发明专利技术还提供了一种制备脂肪组织移植物的方法，其包括将浓缩的含有脂肪衍生干细胞的细胞群体和完整的脂肪组织的第二部分混合以得到所述脂肪组织移植物。由本发明专利技术的方法制得的软组织填充物可以用来矫正外形缺陷；由本发明专利技术的方法制得的脂肪组织移植物中脂肪组织衍生细胞可提供支持移植物延长的存活和功能的环境。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
制备软组织填充物的方法和制备脂肪组织移植物的方法本申请是申请日为2002年12月9日，国际申请号PCT/US2002/39465，国家申请号为02827968.9，专利技术名称为“用加工的脂肪抽吸细胞来治疗患者的系统和方法”的申请的分案申请。相关领域的交叉参考本申请要求于2001年12月7日提交的专利技术名称为“加工的脂肪抽吸细胞以及脂肪衍生干细胞的临床装置、系统和应用”的第60/338,856号U.S.临时申请的优先权，该申请的整个内容引入本文以供参考。专利技术背景1.专利
本专利技术一般涉及衍生自脂肪组织的细胞，更具体来说，涉及脂肪衍生干细胞，使用脂肪衍生干细胞的方法，含有脂肪衍生干细胞的组合物，以及制备和使用脂肪衍生干细胞的系统。2.相关技术的描述再生医疗可定义为以临床目标方式利用身体的再生机制，以不是正常痊愈机制的一部分的方式使用它们，或者人工放大正常机制。该过程的一个经典实例是在骨髓移植中发现的过程，其中从供体收获造血干细胞和祖细胞，置于其中正常造血机制已经被切除或基本上排除或损害的接受者内，由此代替或再生接受者的造血能力(Thomas1994)。在最近的临床和临床前研究中，该方法已经延伸到了骨髓的非造血干细胞组分，试验了再生(或试图再生)组织，包括骨(Connolly1998；Horwitz，Prockop等人，1999；Horwitz，Prockop等人，2001)、心脏(Fukuda2001；Orlic，Kajstura等人，2001；Orlic，Kajstura等人，2001；Strauer，Brehm等人，2002)和肝脏(Avital，Inderbitzin等人，2001)。这些研究是基于检测骨髓中非造血干细胞与内皮前体细胞的存在(Prockop，Azizi等人，2000)(Pittenger，Mackay等人，1999)(Shi，Rafii等人1998；Carmeliet和Luttun2001)。这些研究使用的是骨髓移植物接受动物，其中供体和宿主细胞可通过遗传标记区别开，以表明接受者中的某些新血管发育是衍生自供体骨髓细胞(Carmeliet和Luttun2001)(Takahashi，Kalka等人，1999；Murayama，Tepper等人，2002)。虽然该研究确定性地证实了骨髓含有这样的细胞，但是通常将其意思延伸为骨髓是含有相应数目的这样的细胞的唯一组织，以至于当研究人员检测循环中的内皮前体细胞(EPC)或骨髓干细胞(MSC)时，自动假定这些细胞必然是骨髓衍生的。因此，没有人提出这样的观点，即其它组织的细胞群体可能代表另一或者也许是更好的治疗相关细胞群体来源。已经有人证实了脂肪组织含有多能干细胞群体(Huang，Beanes等人，2002；Mizuno，Zuk等人，2002)(Zuk，Zhu等人，2001).Zuk等人，(Zuk等人，(InPress)HumanAdiposeTissueIsASourceOfMultipotentStemCells，MolecularBiologyoftheCell)，并且其它人已表明该组织是内皮细胞来源(Kern，Knedler等人，1983；Hutley，Herington等人，2001)[U.S.专利5,372,945Alchas等人，1994]，但是后面这些文献没有检验以及没有以任何方式提及内皮前体细胞。干细胞是身体的主要细胞。已知得自胚胎的干细胞或胚胎干细胞(ESC)变成身体的很多—如果不是全部的话—细胞和组织类型。这些早期胎儿细胞不仅含有个体的所有遗传信息，而且具有变成200+细胞和身体组织的新生能力。正在进行的研究表明，这些细胞具有非常大的科学和临床价值。然而，ESC的应用具有理论上的有限性。如果在临床上使用，它们必须衍生自另一个体、胚胎。当衍生自他们的干细胞或组织被移植到另一个人体内时，细胞接受者可能需要毒性免疫抑制药物来防止排斥反应。此外，另一个体的细胞可能携带可被传染给接受者的病毒或其它少见但显著的疾病。而且，已知ESC样细胞(例如畸胎瘤)会形成肿瘤。最近，已经鉴定了非胚胎或成人干细胞，并且它们是代替ESC临床应用的重要可能供选择对象。这些细胞静息地位于很多—如果不是全部的话—组织中，假定它们在等待对创伤或其它破坏性疾病过程作出反应，这样它们可愈合损伤的组织。出现的科学证据表明，每一个体携带一些这样的干细胞，它们可以与ESC共享变成很多—如果不是全部的话—类型细胞和组织的能力。据表明，成人干细胞群体存在于皮肤、肌肉、骨髓、肝脏、脑和脂肪组织当中的一个或多个中。迄今为止所提出的这样的细胞在组织工程中的应用包括通过细胞纯化和细胞培养方法来提高细胞数目、纯度和成熟度。这些步骤是补偿大部分组织中干细胞稀少所必需的。例如，据估计骨髓中间充质干细胞的比例为1/100,000有核细胞-1/100,000,0有核细胞。类似地，从皮肤中提取干细胞包括需要数周的一系列复杂细胞培养步骤。在心脏病临床试验中使用骨骼肌衍生干细胞采用2-3周的培养期，其中细胞数目增加至临床相关数目，并且细胞分化成肌肉的过程也得到了促进。这些扩展和分化步骤可提供提高的细胞数目、纯度和成熟度，但是达到这样需要付出代价。代价可包括一个或多个以下代价：由于细胞老化而损失细胞功能，损失可能有用的非干细胞的细胞群体，延迟可能的细胞在患者中的应用，经济成本增加，和在培养期间细胞被环境微生物污染的危险性增大。虽然现在通过未被加工过而是作为基本上全骨髓使用的骨髓衍生细胞可获得关于人的数据(Horwitz，Prockop等人，1999；Horwitz，Prockop等人，2001)(Strauer，Brehm等人，2002)，但是所带来的临床益处是次最佳的，这是几乎肯定与从骨髓获得的有限的细胞剂量和纯度有关的结果。已经开发了多种用于从脂肪组织收获细胞的装置，但是这些装置具有一个或多个以下缺点，不能最佳地提供抽吸装置来取出脂肪组织：从脂肪组织收获阶段到所有组织加工阶段期间缺乏部分或完全的自动化，缺乏大于100ml脂肪组织的体积容量，从脂肪组织收获阶段到所有组织加工阶段期间缺乏部分或完全封闭的系统，不能一次性处理部件来减轻样本彼此之间交叉污染的伴发危险性。需要这样的替代方法，其中可以迅速且可靠地以高收率、一致性和/或纯度获得活性细胞群体，和因此可降低或排除细胞的提取后操作。理想情况是，细胞群体以适于将它们直接置于接受者体内的方式获得。专利技术概述本专利技术涉及用以使用衍生自脂肪组织的细胞的组合物、方法和系统，所述细胞与提高、产生或支持治疗、结构或美容有益效果所需的添加剂一起被直接置于接受者体内。在一个实施方案中，脂肪组织加工在保持封闭、无菌流体/组织路径的系统中进行。这是通过使用预先装配、连接的封闭无菌容器和管线装置组合，让组织和流体成分在封闭的路径内传递来实现的。可将该加工装置组合与插入到可控制试剂加入、温度和加工时间的装置内的一系列加工试剂(例如盐水、酶等)连接，由此省去对人工控制加工的操作人员的需求。在优选的实施方案中，从组织提取到加工再到放置到接受者的整个过程都在相同装置内，实际上甚至在经历该过程的患者的相同房间内进行。根据本专利技术的一个方面，将原始脂肪组织加工以基本上除去成熟的脂肪本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备软组织填充物的方法，该方法包括：提供加工的脂肪抽吸物，该加工的脂肪抽吸物含有脂肪衍生干细胞；提供完整的、未解聚的脂肪组织片段；以及将所述加工的脂肪抽吸物和所述完整的、未解聚的脂肪组织片段混合以得到所述软组织填充物。

【技术特征摘要】
US 2001-12-7 60/338,8561.一种制备软组织填充物的方法，该方法包括：提供相当数量的加工的脂肪抽吸物，该加工的脂肪抽吸物含有脂肪衍生干细胞；提供完整的、未解聚的脂肪组织片段；以及将所述加工的脂肪抽吸物和所述完整的、未解聚的脂肪组织片段混合以得到所述软组织填充物，其中包括脂肪衍生干细胞的加工的脂肪抽吸物的相当数量足以改善软组织填充物的血管供应，并且其中在加工的脂肪抽吸物中脂肪衍生干细胞占细胞组分的至少0.1％。2.根据权利要求1所述的方法，其中，通过酶解聚悬浮液中的脂肪组织、减少成熟脂肪细胞的存在以及通过离心分离悬浮液中的细胞，获得所述加工的脂肪抽吸物。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述方法还包括提供添加剂。4.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述软组织填充物适于矫正外形缺陷。5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述外形缺陷为皱纹、草皮、痘痕或较大缺陷。6.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述软组织填充物适于给损伤的结构提供支持。7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述损伤的结构是尿道。8.根据权利要求1或2所述的方法，其中，冷冻保存所述加工的脂肪抽吸物，该加工的脂肪抽吸物含有脂肪衍生...

【专利技术属性】
技术研发人员：J弗拉塞尔，MH亨德里克，
申请(专利权)人：马克罗珀尔生物外科公司，
类型：发明
国别省市：US