【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】反转录病毒载体
[0001]本专利技术涉及反转录病毒基因转移载体,尤其慢病毒载体,其经来自呼吸道副黏液病毒之血球凝集素
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神经胺糖酸酶(HN)及融合(F)蛋白假型化,包含启动子及转殖基因;及其制备方法。
技术介绍
[0002]反转录病毒为编码酶反转录酶之RNA病毒科(反转录病毒科(Retroviridae))。慢病毒为反转录病毒科之一属,且特征在于长潜伏期。反转录病毒,及尤其慢病毒,可将大量病毒RNA递送至宿主细胞之DNA中,且在反转录病毒中具有能够感染非分裂细胞之独特能力,因此其为基因递送载体之最有效方法之一。
[0003]假型化为产生病毒或病毒载体与外来病毒外膜蛋白之组合的方法。因此,外来病毒外膜蛋白可用于改变病毒颗粒之宿主趋向性或提高/降低稳定性。举例而言,假型化允许我们指定外膜蛋白的特征。常用于假型化反转录病毒及慢病毒载体之蛋白质为水泡性口炎病毒(VSV)之醣蛋白G,简称VSV
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G。
[0004]慢病毒载体,尤其衍生自HIV
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1之载体,为广泛研究且常用之载体。慢病毒载体骨架之演进及病毒将重组DNA分子(转殖基因)递送至目标细胞中之能力使得其用于许多应用。病毒载体之两种可能应用包括在基因疗法中恢复功能基因及活体外重组蛋白生产。
[0005]在设计适用作基因递送载体之反转录病毒/慢病毒载体时,一个关键驱动因素为使载体对于患者尽可能安全。第二个关键驱动因素为需要产生足够量之载体,不仅治疗个别患者,而且使可受益于疗法之所有患者可更广泛临 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种产生反转录病毒载体的方法,其特征在于,该反转录病毒载体经来自呼吸道副黏液病毒的血球凝集素
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神经胺糖酸酶(HN)及融合(F)蛋白假型化,且其包含启动子及转殖基因,其中该方法包含使用经密码子优化的gag
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pol基因。2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,该反转录病毒载体为慢病毒载体。3.如权利要求2所述的方法,其特征在于,该慢病毒载体选自由以下组成的群:猿猴免疫缺乏病毒(SIV)载体、人类免疫缺乏病毒(HIV)载体、猫免疫缺乏病毒(FIV)载体、马传染性贫血病毒(EIAV)载体及比斯奈/梅迪(Visna/maedi)病毒载体。4.如权利要求2或3所述的方法,其特征在于,该慢病毒载体为SIV载体。5.如前述权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所述经密码子优化的gag
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pol基因为SIV gag
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pol基因。6.如前述权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所述经密码子优化的gag
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pol基因包含与SEQ ID NO: 1具有至少80%序列一致性的核酸序列或由其组成。7.如权利要求6所述的方法,其特征在于,所述经密码子优化的gag
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pol基因包含SEQ ID NO: 1的核酸序列或由其组成。8.如前述权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所述经密码子优化的gag
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pol基因包含于质体中,该质体包含与SEQ ID NO: 5具有至少80%序列一致性的核酸序列或由其组成。9.如权利要求8所述的方法,其特征在于,所述经密码子优化的gag
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pol基因包含于质体中,该质体包含SEQ ID NO: 5的核酸序列或由其组成。10.如前述权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,该呼吸道副黏液病毒为仙台病毒(Sendai virus)。11.如前述权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所产生的反转录病毒载体的效价为:a)等效于通过不使用经密码子优化的gag
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pol基因的对应方法产生的反转录病毒载体的效价;或b)与通过不使用经密码子优化的gag
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pol基因的对应方法产生的反转录病毒载体的效价相比提高。12.如权利要求11所述的方法,其特征在于,该反转录病毒载体的效价比通过不使用经密码子优化的gag
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pol基因的对应方法产生的反转录病毒载体的效价高至少2倍或至少2.5倍。13.如前述权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,该启动子选自由以下组成的群:巨细胞病毒(CMV)启动子、延长因子1a (EF1a)启动子及杂合人类CMV强化子/EF1a (hCEF)启动子。14.如前述权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,该载体包含杂合人类CMV强化子/EF1a (hCEF)启动子。15.如前述权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,该转殖基因选自:a)分泌性治疗蛋白,视情况为α
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1抗胰蛋白酶(A1AT)、因子VIII、界面活性蛋白B (SFTPB)、因子VII、因子IX、因子X、因子XI、温韦伯氏因子(von Willebrand Factor)、颗粒球
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巨噬细胞群落刺激因子(GM
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【专利技术属性】
技术研发人员:黛博拉,
申请(专利权)人:IP二IPO创新有限公司,
类型:发明
国别省市:
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