一种珍珠多肽提取物、多肽及在制备酪氨酸酶抑制剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种珍珠多肽提取物、多肽及在制备酪氨酸酶抑制剂中的应用，所述提取物是将纳米珍珠粉用超纯水超声提取、透析，截留液干燥，获得粗品并上样SP

【技术实现步骤摘要】
一种珍珠多肽提取物、多肽及在制备酪氨酸酶抑制剂中的应用
(一)

[0001]本专利技术涉及一种珍珠多肽提取物、多肽及在制备酪氨酸酶抑制剂中的应用。
(二)
技术介绍

[0002]珍珠粉具有促进胶原蛋白合成、加速皮肤伤口愈合和美白的作用，被广泛应用于医用材料、护肤品等领域(Jian
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Ping Dai,Effects of pearl powder extract and its fractions on fibroblast function relevant to wound repair,pharmaceuticalbiology,2010；Jing
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xian,Zhang,Anticonvulsant and sedative
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hypnotic activity screening of pearl and nacre(mother of pearl),Journal of Ethnopharmacol,2016)。皮肤由表皮、真皮层和皮下组织组成，可以保护组织结构，调节温度，保护身体不受外界刺激。光老化是一种由紫外线照射引起的皮肤老化，其特征是表皮增生、跨表皮失水和细胞外基质降解，导致皮肤粗糙、干燥、皱纹和弹性降低(L.B.Pouzo,Antioxidant status,lipid and color stability of aged beef from grazing steers supplemented with corn grain and increasing levels of flaxseed,Meat Science,2016)。长期暴露在紫外辐射下会产生大量自由基和黑色素积累。过多的黑色素积累会导致许多严重的皮肤疾病，如黄褐斑雀斑、炎症后斑和晒斑样。酪氨酸酶是一种铜蛋白，是黑色素生成的关键酶，其活性中心的双核铜离子在酶催化中起着重要作用。天然产品中的多肽因其抑制酪氨酸酶活性、抗氧化活性强、易被皮肤吸收、副作用小而受到越来越多的关注。研究表明，小于5000Da的生物肽具有明显的自由基清除能力和酪氨酸酶抑制活性(Min Chen,The effect of molecular weights on the survivability of casein
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derived antioxidant peptides after the simulated gastrointestinal digestion,Innovative Food Science&Emerging Technologies,2012)。
[0003]现有的珍珠粉水溶性技术通常采用乳酸水解法、酸
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酶水解法、盐酸水解法、超声水解法、微波水解法、酶水解法、酸水解法等。(Jing
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ying Pei,Extraction,purification,bioactivities and application of matrix proteins from pearl powder and nacre powder:Areview,Frontiers in Bioengineering and Biotechnology,2020)。现有的色谱法多肽分离纯化技术包括凝胶排阻色谱(SP
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Sephadex G
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10/25/50/100)，离子交换色谱，亲和色谱(付文鹏，动物源活性蛋白多肽的分离纯化方法研究进展，天然产物研究与开发，2019)。珍珠粉纳米颗粒受制备技术和提取技术的限制，活性珍珠蛋白和珍珠多肽的得率非常低。开发高得率和高活性的珍珠多肽是促进珍珠行业精深加工持续发展的重要环节(Cen Zhang,A novel matrix protein p10 from the nacre of pearl oyster(Pinctada fucata)and its effects on both CaCO
3 crystal formation and mineralogenic cells.Marine Biotechnology,2006)。
[0004]珍珠提取物可以抑制酪氨酸酶活性和黑色素细胞中黑色素的合成，同时下调了相关基因DHICA氧化酶(TRP
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1)的表达(杨安全，珍珠提取物的美白功效研究，药物生物技术，
2016；邓云云，珍珠水解液的美白作用机理研究，中国现代中药，2017)。想要进一步探究是哪种多肽具有抑制黑色素生成的作用，需要对粗多肽进行纯化处理和结构解析，筛选出来可能具有活性的多肽，对其人工合成并验证。
[0005]王俊杰公开了“一种用于治疗宫颈癌的药物及其制备方法，公布号CN115414491A”，通过设计多肽序列NGKSAVLF，与特定的磷脂进行组合制备得到了具有宫颈癌靶向性的药物，有利于降低药物的临床使用剂量并提高治疗效果，在有利于避免药物副作用的同时也有利于进一步降低使用成本。
[0006]冯艳公开了“降压肽或中国蛤蜊降压肽提取物及其应用，公布号CN115160408A”，采用超纯水和蛋白酶K结合的方法提取粗多肽，获得降压肽KDEYKHLNFGEV，在体外和非自发性高血压大鼠(SHRs)体内都显示出良好的降压效果，此肽可用于高血压治疗相关的保健品和药品。
[0007]汪兰公开了“一种高效降血压水产品活性肽的制备方法，公布号CN115368441A”，利用胃蛋白酶酶解超高压处理后的鳙鱼肉得到粗多肽并分离纯化。结构鉴定并人工合成多肽序列YLRLHF。与1
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乙基
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(3
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二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N
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羟基硫代琥珀酰亚胺混合均匀后搅拌，得到高效降血压水产品，具有显著的血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性。
(三)
技术实现思路

[0008]本专利技术目的是提供一种珍珠多肽提取物、多肽及在制备酪氨酸酶抑制剂中的应用。本专利技术利用超纯水
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超声法从纳米珍珠粉中提取并用SP
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SephadexG
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50填料柱纯化出高纯度的具有抑制酪氨酸酶活性的多肽。经GPC分子量排布显示Mw<5000Da的多肽为96.45％。通过LC
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MS/MS获得多肽种类，对其进行分子对接实验获得结合效果最佳的多肽序列，人工合成此多肽，通过酪氨酸酶活性抑制实验证明其有效性。本专利技术解决了珍珠粉功效成分不清楚的问题，明确了有效组分。活性肽副作用小，易吸收，避免了化学美白类药物的副作用，适合后续中试和工业化生产。
[0009]本专利技术采用的技术方案是：
[0010]本专利技术提供一种珍珠多肽提取物，所述提取物按如下方法制备：将纳米珍珠粉加入超纯水中，磁力搅拌，超声提取，过滤，滤液过0.22μm滤膜后，采用超纯水透析48h(500Da透析袋)，截留液干燥，获得粗品；将粗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种珍珠多肽提取物，其特征在于，所述提取物按如下方法制备：将纳米珍珠粉加入超纯水中，磁力搅拌，超声提取，过滤，滤液过0.22μm滤膜后，采用超纯水透析48h，截留液干燥，获得粗品；将粗品上样SP
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SephadexG
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50填料柱，按照3
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5倍柱体积的纯水进行洗脱，每10mL流出液收集一管，观察每管颜色，合并蛋白含量大于0.05mg/mL且有颜色的流出液，干燥，获得珍珠多肽提取物。2.如权利要求1所述珍珠多肽提取物，其特征在于，所述纳米珍珠粉粒径1
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100nm。3.如权利要求1所述珍珠多肽提取物，其特征在于，所述超纯水体积用量以纳米珍珠粉质量计为15
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20mL/g。4.如权利要求1所述珍珠多肽...

【专利技术属性】
技术研发人员：王龑，孙培龙，裴晶莹，王宇菲，邹雨，杨开，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：