蛋白组合物及其应用、分泌上清和肝前体细胞的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种蛋白组合物及其应用、分泌上清的应用和肝前体细胞的应用，所述蛋白组合物用于制备治疗肝癌的药物，所述蛋白组合物包括LIF、AREG和TGFβ

【技术实现步骤摘要】
蛋白组合物及其应用、分泌上清和肝前体细胞的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种蛋白组合物及其应用、分泌上清和肝前体细胞的应用。

技术介绍

[0002]肝癌发病的病因包括乙肝病毒(HBV)和丙肝病毒(HCV)的慢性感染，以及酗酒和代谢综合征。一般认为，肝癌多起源于慢性炎症性肝病或肝炎，肝首先出现纤维化，随后发展成肝硬化，影响肝功能，最终导致死亡。但实际上，尽管约90％的肝癌病例有肝硬化的背景，每年只有不到5％的肝硬化患者会发展成肝癌，这一矛盾数据说明肝癌的发生与肝硬化没有因果关系。且从分子生物学机制来看肝癌主要起源于恶性肝肿瘤细胞，而肝硬化发展过程中，特征性的再生结节(RNs)是由肝祖细胞(HPC)增殖形成的。换句话说，肝癌和再生结节代表了两个独立的过程，由不同的分子机制控制，而不是有前后关系的病变过程。
[0003]目前，肝癌患者的治疗方式主要包括：手术治疗、放射治疗和药物治疗。药物治疗中被广泛使用的是索拉非尼，索拉非尼是一种多激酶抑制剂，被批准作为晚期肝癌患者的标准疗法，但它只能有限延长患者的生存期，手术治疗和放射治疗风险大且副作用极强，复发的可能性也很大，因此终末期乙肝相关肝病(肝癌)的治疗缺乏有效手段。
[0004]肝脏中的线粒体通过脂肪酸β氧化产生三磷酸腺苷(英文简称为ATP)，为肝细胞实现多种功能供能。而此过程中产生大量活性氧(英文名称为Reactive oxygen species，英文简称为ROS)，如果没有相应抗氧化机制，肝细胞便会因此受到损伤，因此氧化应激与肝癌的进展联系紧密。有文献报道肝癌细胞的增殖和转移与TGF
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β信号通路的激活有关，TGF
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β升高会诱导肝癌细胞的增殖和转移。还有学者表示AREG蛋白的升高会促进肝癌疾病的发展进程。
[0005]因此，有必要提供一种蛋白组合物及其应用、分泌上清和肝前体细胞的应用以解决现有技术中存在的上述问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种蛋白组合物及其应用、分泌上清和肝前体细胞的应用，以解决现有技术中的肝癌治疗存在风险大且副作用强的问题。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供了一种蛋白组合物，所述蛋白组合物用于制备治疗肝癌的药物，所述蛋白组合物包括LIF、AREG和TGFβ
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2。
[0008]本专利技术所述的蛋白组合物的有益效果在于：通过所述蛋白组合物包括LIF、AREG和TGFβ
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2，以使肝癌细胞的活力、群体依赖性和增殖能力均降低，同时降低了风险和副作用，本专利技术解决了现有技术中的肝癌治疗存在风险大且副作用强的问题。
[0009]优选的，所述LIF、所述AREG和所述TGFβ
‑
2来源于肝前体细胞的分泌上清。
[0010]优选的，肝前体细胞与肝癌细胞共培养后得到分泌上清，所述分泌上清包括所述LIF、所述AREG和所述TGFβ
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2。
[0011]优选的，所述肝前体细胞来源于肝细胞。
[0012]优选的，所述肝癌细胞选自Hep3B细胞和HepG2细胞。
[0013]本专利技术同时提供了一种蛋白组合物的应用，所述蛋白组合物用于制备治疗肝癌的药物。
[0014]本专利技术所述的蛋白组合物的应用的有益效果在于：所述蛋白组合物包括LIF、AREG和TGFβ
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2，以使肝癌细胞的活力、群体依赖性和增殖能力均降低，同时降低了风险和副作用，本专利技术解决了现有技术中的肝癌治疗存在风险大且副作用强的问题。
[0015]优选的，所述药物还包括药学上可接受的辅料。
[0016]本专利技术又提供了一种分泌上清的应用，所述分泌上清用于制备LIF、AREG和TGFβ
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2。
[0017]本专利技术所述的分泌上清的应用的有益效果在于：所述分泌上清用于制备LIF、AREG和TGFβ
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2，LIF、AREG和TGFβ
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2联用可以使肝癌细胞的活力、群体依赖性和增殖能力均降低。
[0018]优选的，所述LIF、所述AREG和所述TGFβ
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2用于制备治疗肝癌的药物。
[0019]本专利技术又提供了一种肝前体细胞的应用，所述肝前体细胞与肝癌细胞共培养后得到分泌上清。
[0020]本专利技术所述的肝前体细胞的应用的有益效果在于：所述肝前体细胞与肝癌细胞共培养后得到分泌上清，所述分泌上清可以使肝癌细胞的活力、群体依赖性和增殖能力均降低。
[0021]优选的，所述分泌上清包括LIF、AREG和TGFβ
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2。
[0022]优选的，所述LIF、所述AREG和所述TGFβ
‑
2用于制备治疗肝癌的药物。
附图说明
[0023]图1为本专利技术实施例的Hep3B细胞的活力呈降低趋势的示意图；
[0024]图2为本专利技术实施例的HepG2细胞的活力呈降低趋势的示意图；
[0025]图3为本专利技术实施例的实验组和对照组的Hep3B细胞数量的对比照片；
[0026]图4为本专利技术实施例的实验组和对照组的HepG2细胞数量的对比照片；
[0027]图5为本专利技术实施例的实验组和对照组的Hep3B细胞的克隆形成率示意图；
[0028]图6为本专利技术实施例的实验组和对照组的HepG2细胞的克隆形成率示意图；
[0029]图7为本专利技术实施例的实验组和对照组的Hep3B细胞和HepG2细胞的癌基因AFP的蛋白印迹法的结果对比照片；
[0030]图8为本专利技术实施例的实验组和对照组的Hep3B细胞和HepG2细胞的癌基因AFP免疫荧光染色检测结果的照片；
[0031]图9为本专利技术实施例的实验组和对照组的Hep3B细胞和HepG2细胞的癌基因SOX2免疫荧光染色检测结果的照片；
[0032]图10为本专利技术实施例的实验组和对照组的Hep3B细胞和HepG2细胞的癌基因KRT19免疫荧光染色检测结果的照片；
[0033]图11为本专利技术实施例的实验组和对照组的Hep3B细胞的Edu插入实验的结果对比照片和示意图；
[0034]图12为本专利技术实施例的实验组和对照组的HepG2细胞的Edu插入实验的结果对比
照片和示意图；
[0035]图13为本专利技术实施例的实验组和对照组的Hep3B细胞的Ki67的结果对比照片和示意图；
[0036]图14为本专利技术实施例的实验组和对照组的HepG2细胞的Ki67的结果对比照片和示意图；
[0037]图15为本专利技术实施例的实验组和对照组的Hep3B细胞、HepG2细胞和LO2细胞的增殖情况示意图；
[0038]图16为本专利技术实施例的293T细胞、LO2细胞、hBMSC及其上清液对肝癌细胞平板克隆形成没有明显影响的结果对比照片；
[0039]图17为本专利技术实施例的各组裸鼠从注射细胞后3天至183天的肿本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蛋白组合物，其特征在于，用于制备治疗肝癌的药物，所述蛋白组合物包括LIF、AREG和TGFβ
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2。2.根据权利要求1所述的蛋白组合物，其特征在于，所述LIF、所述AREG和所述TGFβ
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2来源于肝前体细胞的分泌上清。3.根据权利要求1所述的蛋白组合物，其特征在于，肝前体细胞与肝癌细胞共培养后得到分泌上清，所述分泌上清包括所述LIF、所述AREG和所述TGFβ
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2。4.根据权利要求2或3所述的蛋白组合物，其特征在于，所述肝前体细胞来源于肝细胞。5.根据权利要求3所述的蛋白组合物，其特征在于，所述肝癌细胞选自Hep3B细胞和HepG2细胞。6.一种权利要求1
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5任一项所述的蛋白组合物的应用，其特征在于，所述蛋白组合物用于制备治...

【专利技术属性】
技术研发人员：周丽，周伸奥，张琴，
申请(专利权)人：上海赛立维生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：