一种检测组织蛋白试剂在试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术属于医学技术领域，具体涉及一种检测组织蛋白试剂在试剂盒中的应用，本发明专利技术提供了一系列新的色素性绒毛结节性滑膜炎（PVNS）筛查标记物，包括三种组织蛋白，所述蛋白质包括如下三种蛋白中的至少一种组织蛋白酶Z（CTSZ）、组织蛋白酶D（CTSD）、花生四烯酸

【技术实现步骤摘要】
一种检测组织蛋白试剂在试剂盒中的应用


[0001]本专利技术涉及医学
，具体涉及一种检测组织蛋白试剂在试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]色素性绒毛结节性滑膜炎（PVNS）是肌腱滑膜巨细胞瘤的一种亚型，是一种罕见的滑膜良性增生性病变，发病率为百万分之1.8。虽然PVNS可以影响所有年龄段的患者，但它通常发生在30
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40岁的人群中。大多数患者表现为缓慢进展的单关节疾病。PVNS分为局限性变异和弥漫性变异，后者更为常见。弥漫性以关节疼痛、肿胀和僵硬为特征，局部性为锁定。活检仍然是诊断的金标准，因为它显示滑膜组织增生和棕色、绒毛状、结节性病变的形成。虽然手术切除是几乎所有局部变异和大多数弥漫性变异的主要治疗方法，但简单滑膜切除术后局部复发很常见，外束放射治疗作为辅助治疗的疗效和潜在副作用尚不确定。
[0003]PVNS包含由过表达C滑液1的滑膜细胞募集的活化巨噬细胞，这促使了特异性酪氨酸激酶抑制剂的使用。PVNS的发病机制尚不清楚，关于它是炎症性疾病还是肿瘤性疾病还存在争议。由于PVNS的临床症状不典型，诊断和治疗往往延迟，导致功能障碍。目前PVNS的诊断方法包括滑膜液（滑液）分析、放射学、关节镜检查和病理学。由于缺乏关于PVNS致病机制的深入生物学信息，对治疗方法的发展提出了挑战。
[0004]代谢组学和蛋白质组学是用于研究组织或生物液体中的代谢物和蛋白质的大规模分析技术。这些技术可以识别健康受试者和患者样本之间的差异蛋白，为疾病诊断和预后提供参考。
[0005]诊断是基于放射学诊断和临床表现，最关键的还是术中的病理活检，但受限于有创性及专业性未得到广泛的开展。这些技术的普及不仅提高了诊断的敏感性和特异性，还可以有效评估疾病的严重程度。多年来，除了临床表现以外，关节MRI检查一直是诊断PVNS的主要辅助手段，但是由于敏感性差，不利于早期诊断。
[0006]通过损伤小、快速的抽取关节液方法可以作为一种检测手段诊断色素绒毛结节性滑膜炎，对病人造成伤害小，干扰因素少。通过蛋白组学方法便可以检测这一类物质的含量，有望用于诊断色素绒毛结节性滑膜炎的发病进程。然而，关节液中所含有蛋白种类繁多，如何选择对色素绒毛结节性滑膜炎具有诊断作用的生物标志物仍然是困扰本
的难题。
[0007]组织蛋白是在各种动物组织的细胞内发现的一类蛋白酶，是半胱氨酸蛋白酶家族的主要成员，在人体中主要存在11 种， 研究表明目前它们与人类的多种重大疾病密切相关，是近年来备受关注的一类靶标蛋白酶。
[0008]然而，对于脂氧合酶和组织蛋白能否作为色素绒毛结节性滑膜炎的生物标志物，什么样的脂肪酰基物质和组织蛋白能够作为色素绒毛结节性滑膜炎的生物标志物，实现色素绒毛结节性滑膜炎的诊断，目前尚缺乏相关报道。

技术实现思路

[0009]针对上述问题，本专利技术提供三种蛋白质作为生物标志物，实现了色素绒毛结节性滑膜炎的风险筛查，可作为诊断指标用于色素绒毛结节性滑膜炎的早期诊断。
[0010]一种检测组织蛋白试剂在试剂盒中的应用，所述试剂是用于检测关节液中组织蛋白的试剂；所述组织蛋白包括如下三种蛋白中的至少一种：蛋白酶Z、组织蛋白酶D、花生四烯酸
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脂氧合酶，具体的，2种或3种任意比例混合。
[0011]进一步的，所述试剂盒是色素性绒毛结节性滑膜炎筛查试剂盒。
[0012]进一步的，所述试剂盒包括用于检测组织蛋白的试剂。
[0013]进一步的，所述蛋白酶Z的Uniprot编号为Q9UBR2，所述组织蛋白酶D的Uniprot编号为P07339，所述花生四烯酸
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脂氧合酶的Uniprot编号为P09917。
[0014]本专利技术的关键在于，确定了人体关节液中三种蛋白质的含量与患色素绒毛结节性滑膜炎的风险显著相关。这三种蛋白质为蛋白酶Z（CTSZ）、组织蛋白酶D（CTSD）、花生四烯酸
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脂氧合酶（ALOX5）。因此可以通过检测人体关节液中这些蛋白质的含量来判断患色素绒毛结节性滑膜炎的风险，至于具体检测人体关节液中这些蛋白质的手段，可以采用现有技术公开的各种手段，本专利技术实施例具体采用液相色谱质谱（LC
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MS）联用技术进行检测，但不仅仅限于该手段，任何能够检测这些蛋白质含量的方法均可用于色素绒毛结节性滑膜炎筛查。
[0015]本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一系列新的色素绒毛结节性滑膜炎筛查标记物，能够实现色素绒毛结节性滑膜炎的有效筛查。相较于活检获取软骨组织样本来检测相关蛋白和代谢物的表达，关节液样本更容易获取，更便于差异蛋白的表达水平的检测，且液相色谱质谱检测方法更为简便，更易于在临床性或基层医院推广应用。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅涉及本专利技术的一些实施例，而非对本专利技术的限制。
[0017]图1为本专利技术实施例1的实验流程示意图示意图；图2为本专利技术在PVNS的滑膜样本中进行蛋白质的非靶向蛋白质组学研究。基于滑膜样本中PVNS组和对照组的LC
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MS数据的(A) PCA评分图。滑膜样品的(B)火山图。(C)PVNS组和对照组之间差异蛋白的模块
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性状关系的p值和相关系数。ME：模块(D)基于滑膜样本中PVNS组和对照组的LC
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MS数据的OPLS
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DA评分图。(E)在PVNS组和对照组之间的滑膜样本中显著不同的蛋白中，KEGG通路的最高富集项。(F)滑膜样品中显著不同蛋白的富集分析。富集分析包括了分子功能、细胞成分和生物过程；图3为本专利技术关于PVNS的滑液样本中蛋白质的非靶向蛋白质组学研究。(A)基于滑液样本中PVNS组和对照组的LC
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MS数据的PCA评分图。(B)关于样本的火山地图。(C)在PVNS组和对照组之间，滑液样本中显著不同的蛋白中KEGG通路的富集项；滑液样品中显著不同蛋白的(D) GO分析：包括分子功能、细胞成分和生物过程。
[0018]图4为本专利技术PVNS组和对照组滑膜中与花生四烯酸途径相关的蛋白表达。与花生四烯酸途径相关的代谢物的(A)盒须图和DESI
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MSI图像。(B)花生四烯酸代谢途径。（C
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D）WB
检测PVNS组和对照组滑膜中ALOX5蛋白的表达。（E
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F）PVNS组和对照组滑膜的免疫组化染色；比例条表示200
µ
m。结果以平均值表示，条形图以标准差表示（WB：n=3，IHC：n=5，每个样本来自不同的患者）。*：p<0.05；**：p<0.01和***：p<0.001；图5为本专利技术PVNS组和对照组滑膜中与肿瘤表型相关的蛋白表达。(A)在滑膜和滑液中均存在显著不同的蛋白（滑膜中22个共差异蛋白的）。(B)qPCR结果本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测组织蛋白试剂在试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂是用于检测关节液中组织蛋白的试剂；所述组织蛋白包括如下三种蛋白中的至少一种：蛋白酶Z、组织蛋白酶D、花生四烯酸
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脂氧合酶。2.根据权利要求1所述一种检测组织蛋白试剂在试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂盒是色素性绒毛结节性滑膜炎筛查试剂盒。3.根据权利要求2所述一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：付维力，龚萌，李箭，葛鸣皓，徐宝鋆，李怡瑾，郑文，张露，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：