一种细胞冻存液及冻存方法技术

本发明专利技术涉及一种细胞冻存液及冻存方法。本发明专利技术的冻存液中不含有动物源血清，可避免引入污染和过敏原的风险，与常规细胞冻存液相比具有更高的临床安全性；冻存液中不含毒性成分，有利于细胞的复苏；而整个配方简单，各组分相互配合，协同作用，可明显提高冻存效果，同时还可保证复苏后细胞增殖活力不受影响，保证细胞在接近冰点时胞内水分不会结晶。而快速冻存的方法冻存效果较好，复苏后的活率较高，细胞生长状态好，传代时间也较长。传代时间也较长。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞冻存液及冻存方法


[0001]本专利技术涉及生物医学
，具体为一种细胞冻存液及冻存方法。

技术介绍

[0002]随着免疫细胞生物学及免疫分子生物学的高速发展，体细胞免疫治疗已成为肿瘤患者放疗、化疗后辅助治疗的重要手段之一，其对于促进患者免疫系统的重建、消除残留病灶及骨髓净化都具有良好效果。而在体细胞免疫治疗应用过程中，对细胞的存储是一个重要技术。如果能够提前将免疫细胞培养好并冻存起来，待到需要时立刻复苏并回输，则可以有效控制治疗时间，保证治疗效果。
[0003]低温冷冻保存是细胞存储的主要方式，免疫细胞在室温下，由于细胞内部代谢产生大量代谢产物导致细胞内环境发生变化，造成细胞死亡。而在生物在低温条件下，生物样本内的酶活性受到抑制，化学反应减慢到近乎停滞，理论上可实现生物样本在低温下的长期保存。但由于冻存方案的不同，低温保存的效果也参差不齐，现阶段在细胞低温保存方向还有很大的探索空间，以改善细胞冻存质量，为细胞治疗提供保障。

技术实现思路

[0004]鉴于现有技术中所存在的问题，本专利技术公开了一种细胞冻存液及冻存方法，其中，冻存液包括基础培养基和添加成分，所述添加成分包括的组分及其终浓度为：海藻糖3
‑
8g/mL、i
‑
肌醇3
‑
6mg/mL、乙酰胺4
‑
7v/v％、右旋糖酐6
‑
9v/v％、羟乙基淀粉3
‑
5g/mL、葡萄糖0.5
‑
4g/mL、肝素钠100
‑
150U/mL、二甲基亚砜5
‑
15mg/mL、壳聚糖1
‑
3mg/mL。
[0005]作为本专利技术的一种优选方案，所述冻存液为在基础培养基中添加海藻糖5g/mL、i
‑
肌醇4.5mg/mL、乙酰胺5.5v/v％、右旋糖酐7.5v/v％、羟乙基淀粉4g/mL、葡萄糖2g/mL、肝素钠130U/mL、二甲基亚砜10mg/mL、壳聚糖2mg/mL得到。
[0006]细胞冻存方法采用了上述细胞冻存液进行冻存，包括步骤如下：步骤一、取指数生长期的细胞离心，获取离心后的细胞并放置于细胞冻存液中，并通过冷存管进行存储，在3
‑
4℃的温度下预冷10
‑
15分钟；步骤二、完成预冷后的冷存管置于
‑
15℃至
‑
20℃温度下40
‑
45分钟进行初步冻存；步骤三、将完成初步冻存的冷存管置于
‑
78℃至
‑
83℃温度下存储20
‑
24小时，然后将冻存管放入液氮中进行长期冻存。
[0007]作为本专利技术的一种优选方案，冻存时细胞的浓度为1
×
106‑2×
107个/mL。
[0008]本专利技术的有益效果：本专利技术的冻存液中不含有动物源血清，可避免引入污染和过敏原的风险，与常规细胞冻存液相比具有更高的临床安全性；冻存液中不含毒性成分，有利于细胞的复苏；而整个配方简单，各组分相互配合，协同作用，可明显提高冻存效果，同时还可保证复苏后细胞增殖活力不受影响，保证细胞在接近冰点时胞内水分不会结晶。而快速冻存的方法冻存效果较好，复苏后的活率较高，细胞生长状态好，传代时间也较长。
具体实施方式
[0009]实施例1
[0010]本专利技术的一种细胞冻存液及冻存方法，其中，冻存液包括基础培养基和添加成分，所述添加成分包括的组分及其终浓度为：海藻糖3g/mL、i
‑
肌醇3mg/mL、乙酰胺4v/v％、右旋糖酐6v/v％、羟乙基淀粉3g/mL、葡萄糖0.5g/mL、肝素钠100U/mL、二甲基亚砜5mg/mL、壳聚糖1mg/mL。
[0011]细胞冻存方法采用了上述细胞冻存液进行冻存，包括步骤如下：步骤一、取指数生长期的细胞离心，获取离心后的细胞并放置于细胞冻存液中，细胞的浓度控制在1
×
106个/mL，通过冷存管进行存储，在3℃的温度下预冷10分钟；步骤二、完成预冷后的冷存管置于
‑
15℃温度下40分钟进行初步冻存；步骤三、将完成初步冻存的冷存管置于
‑
78℃温度下存储20小时，然后将冻存管放入液氮中进行长期冻存。
[0012]实施例2
[0013]本专利技术的一种细胞冻存液及冻存方法，其中，冻存液包括基础培养基和添加成分，所述添加成分包括的组分及其终浓度为：海藻糖8g/mL、i
‑
肌醇6mg/mL、乙酰胺7v/v％、右旋糖酐9v/v％、羟乙基淀粉5g/mL、葡萄糖4g/mL、肝素钠150U/mL、二甲基亚砜15mg/mL、壳聚糖3mg/mL。
[0014]细胞冻存方法采用了上述细胞冻存液进行冻存，包括步骤如下：步骤一、取指数生长期的细胞离心，获取离心后的细胞并放置于细胞冻存液中，细胞的浓度控制在2
×
107个/mL，通过冷存管进行存储，在4℃的温度下预冷15分钟；步骤二、完成预冷后的冷存管置于
‑
20℃温度下45分钟进行初步冻存；步骤三、将完成初步冻存的冷存管置于
‑
83℃温度下存储24小时，然后将冻存管放入液氮中进行长期冻存。
[0015]实施例3
[0016]本专利技术的一种细胞冻存液及冻存方法，其中，冻存液包括基础培养基和添加成分，所述添加成分包括的组分及其终浓度为：海藻糖5g/mL、i
‑
肌醇4.5mg/mL、乙酰胺5.5v/v％、右旋糖酐7.5v/v％、羟乙基淀粉4g/mL、葡萄糖2g/mL、肝素钠130U/mL、二甲基亚砜10mg/mL、壳聚糖2mg/mL。
[0017]细胞冻存方法采用了上述细胞冻存液进行冻存，包括步骤如下：步骤一、取指数生长期的细胞离心，获取离心后的细胞并放置于细胞冻存液中，细胞的浓度控制在1.5
×
107个/mL，通过冷存管进行存储，在3℃的温度下预冷13分钟；步骤二、完成预冷后的冷存管置于
‑
18℃温度下43分钟进行初步冻存；步骤三、将完成初步冻存的冷存管置于
‑
80℃温度下存储22小时，然后将冻存管放入液氮中进行长期冻存。
[0018]本文中未详细说明的部件为现有技术。
[0019]上述虽然对本专利技术的具体实施例作了详细说明，但是本专利技术并不限于上述实施例，在本领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本专利技术宗旨的前提下做出各种变化，而不具备创造性劳动的修改或变形仍在本专利技术的保护范围以内。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞冻存液，其特征在于，包括基础培养基和添加成分，所述添加成分包括的组分及其终浓度为：海藻糖3
‑
8g/mL、i
‑
肌醇3
‑
6mg/mL、乙酰胺4
‑
7v/v％、右旋糖酐6
‑
9v/v％、羟乙基淀粉3
‑
5g/mL、葡萄糖0.5
‑
4g/mL、肝素钠100
‑
150U/mL、二甲基亚砜5
‑
15mg/mL、壳聚糖1
‑
3mg/mL。2.根据权利要求1所述的一种细胞冻存液，其特征在于：在基础培养基中添加海藻糖3g/mL、i
‑
肌醇3mg/mL、乙酰胺4v/v％、右旋糖酐6v/v％、羟乙基淀粉3g/mL、葡萄糖0.5g/mL、肝素钠100U/mL、二甲基亚砜5mg/mL、壳聚糖1mg/mL得到。3.根据权利要求1所述的一种细胞冻存液，其特征在于：在基础培养基中添加海藻糖8g/mL、i
‑
肌醇6mg/mL、乙酰胺7v/v％、右旋糖酐9v/v％、羟乙基淀粉5g/mL、葡萄糖4g/mL、肝素钠150U/mL、二甲基亚砜15mg/mL、壳...

【专利技术属性】
技术研发人员：王开聚，王端贺，杨程，杨怀军，薛珂，
申请(专利权)人：上海循源细胞生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：