茅苍术与北苍术鉴定的SSR引物及鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种茅苍术与北苍术鉴定的SSR引物及鉴定方法，属于药材检测技术领域。鉴定方法包括以下步骤：提取待鉴定苍术DNA，利用二十一对引物对进行PCR反应，得到PCR扩增产物；PCR扩增产物进行毛细管荧光电泳检测，得到测序数据；判断测序数据是否能与聚类模型或聚类图谱中的茅苍术或北苍术聚为一类，如果能，则待鉴定苍术为茅苍术或北苍术；聚类模型或聚类图谱由不同品种的已知苍术采用前述过程得到已知品种苍术的测序数据后再通过聚类分析得到。茅苍术与北苍术能各自聚为一支，易于准确与快速地鉴定出苍术品种。确与快速地鉴定出苍术品种。

【技术实现步骤摘要】
茅苍术与北苍术鉴定的SSR引物及鉴定方法


[0001]本专利技术涉及药材检测
，具体涉及一种茅苍术与北苍术鉴定的SSR引物及鉴定方法。

技术介绍

[0002]中药苍术来源于菊科苍术属植物茅苍术(Atractylodes lancea(Thunb.) DC.)和北苍术(A. chinensis(DC.) Koidz.)。中国药典（2020版）规定了苍术基原植物茅苍术与北苍术，其余均为伪品。中国植物志已将两者合并，统称苍术。苍术在全国范围内广泛分布，其中山西、河北、陕西、内蒙古、辽宁、黑龙江等省主要为北苍术，而湖北、河南、江苏、安徽等省以茅苍术为主，质量上一般认为茅苍术的品质更优。
[0003]苍术当前公认的道地产区为江苏茅山，但由于人为过度采挖而导致野生资源濒危，目前已无商品药材出产。湖北苍术（英山仓术）已成为了市场上茅苍术的主要来源，已被列为“十大楚药”之一，为湖北省道地药材。北苍术作为一个商品种，具有长期栽培引种的历史，各个居群间遗传遗传分化较小，且有效物质成分如挥发油的含量明显低于茅苍术。
[0004]茅苍术与北苍术的鉴别可通过传统的性状鉴别，其中茅苍术呈不规则连珠状或结节状圆柱形，略弯曲，偶有分枝，长3
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10cm，直径1
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2cm。表面灰棕色，有皱纹、横曲纹及残留须根，顶端具茎痕或残留茎基。质坚实，断面黄白色或灰白色，散有多数橙黄色或棕红色油室，暴露稍久，可析出白色细针状结晶。气香特异，味微甘、辛、苦；北苍术呈疙瘩块状或结节状圆柱形，长4
‑<br/>9cm，直径1
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4cm。表面黑棕色，除去外皮者黄棕色。质较疏松，断面散有黄棕色油室。香气较淡，味辛、苦。近年来随着苍术产业的不断升级，茅苍术与北苍术的杂交引种现象也变的较为常见，故而开发一套利用分子手段切实有效鉴别茅苍术与北苍术以及可能存在的杂交种的方法是十分必要的。
[0005]简单重复序列（Simple Sequence Repeat，SSR）又被称为微卫星DNA，是由1
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6个核苷酸组成的基本单位重复多次构成的一段序列。研究表明，SSR重复单位的数目存在高度变异，通常呈整倍性变异，从而出现单位点在个体间的多态性，且其两端多为保守的单拷贝序列，故可对其设计特异性的引物，通过PCR技术特异性扩增出核心SSR片段，利用毛细管荧光电泳技术分析其长度的多态性。SSR分子标记由于丰富的多态性、共显性、高度可靠性以及可重复性好等优点，已经被广泛运用于分子标记辅助育种、遗传多样性分析以及核心种质库的筛选的研究中。
[0006]为了开展SSR分子标记辅助鉴定茅苍术与北苍术，促进苍术优良种质选育，保护苍术种质资源多样性，我们开发了一组SSR引物，为茅苍术与北苍术以及它们间的杂交种的准确鉴定提供了科学依据。

技术实现思路

[0007]本专利基于大量苍术SSR信息，得到具有多态性的通用型引物，使茅苍术与北苍术各自聚在一起，易于准确与快速地鉴定出茅苍术与北苍术。所述方案如下：
一方面，本专利技术实施例提供了一种茅苍术与北苍术鉴定的SSR引物，包括二十一对引物：引物对一为：上游引物SEQ ID NO:1，下游引物SEQ ID NO:2；引物对二为：上游引物SEQ ID NO:3，下游引物SEQ ID NO:4；引物对三为：上游引物SEQ ID NO:5，下游引物SEQ ID NO:6；引物对四为：上游引物SEQ ID NO:7，下游引物SEQ ID NO:8；引物对五为：上游引物SEQ ID NO:9，下游引物SEQ ID NO:10；引物对六为：上游引物SEQ ID NO:11，下游引物SEQ ID NO:12；引物对七为：上游引物SEQ ID NO:13，下游引物SEQ ID NO:14；引物对八为：上游引物SEQ ID NO:15，下游引物SEQ ID NO:16；引物对九为：上游引物SEQ ID NO:17，下游引物SEQ ID NO:18；引物对十为：上游引物SEQ ID NO:19，下游引物SEQ ID NO:20；引物对十一为：上游引物SEQ ID NO:21，下游引物SEQ ID NO:22；引物对十二为：上游引物SEQ ID NO:23，下游引物SEQ ID NO:24；引物对十三为：上游引物SEQ ID NO:25，下游引物SEQ ID NO:26；引物对十四为：上游引物SEQ ID NO:27，下游引物SEQ ID NO:28；引物对十五为：上游引物SEQ ID NO:29，下游引物SEQ ID NO:30；引物对十六为：上游引物SEQ ID NO:31，下游引物SEQ ID NO:32；引物对十七为：上游引物SEQ ID NO:33，下游引物SEQ ID NO:34；引物对十八为：上游引物SEQ ID NO:35，下游引物SEQ ID NO:36；引物对十九为：上游引物SEQ ID NO:37，下游引物SEQ ID NO:38；引物对二十为：上游引物SEQ ID NO:39，下游引物SEQ ID NO:40；引物对二十一为：上游引物SEQ ID NO:41，下游引物SEQ ID NO:42。
[0008]另一方面，本专利技术实施例还提供了一种茅苍术与北苍术的鉴定方法，包括以下步骤：(1)提取待鉴定苍术DNA，加入前述的引物对进行PCR反应，分离得到PCR扩增产物；(2)步骤(1)得到的PCR 扩增产物进行毛细管荧光电泳检测，得到测序数据；(3)判断测序数据是否能与聚类模型或聚类图谱中的茅苍术或北苍术聚为一类，如果能，则待鉴定苍术为茅苍术或北苍术；所述聚类模型或聚类图谱由不同品种的已知苍术采用步骤(1)
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(2)得到已知品种苍术的测序数据后再通过聚类分析算法得到，所述已知苍术包括茅苍术与北苍术。
[0009]其中，DNA的提取材料选自苍术干燥叶片、苍术根茎或苍术饮片等。
[0010]其中，本专利技术实施例中的已知苍术选自江苏茅山苍术、湖北英山苍术、湖北十堰郧西苍术、陕西太白山苍术、河北围场苍术、河北赤城苍术和山西偏关苍术等；其中，江苏茅山苍术和湖北英山苍术为茅苍术，湖北十堰郧西苍术、陕西太白山苍术、河北围场苍术、河北赤城苍术和山西偏关苍术为北苍术。
[0011]其中，步骤(1)具体包括：在前述的每对引物的上游引物5
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端加上M13接头序列，得到M13接头上游引物；以苍术DNA 为模板，以前述每对引物的下游引物以及对应的M13 接头上游引物进行 PCR 扩增，得到PCR 扩增产物。
[0012]其中，聚类分析算法包括采用STRUCTURE软件分析、采用R包ape构建NJ树和采用R包ggplot2进行PCA分析等中的一种或多种。
[0013]具体地，聚类分析算法为采用STRUCTURE软件分析。
[0014]其中，所述PCR体系如下：1μl 的DNA模板，1μl的浓度为 10pmol/μl的含M13 接头上游引物，1μl的浓度为 10pmol/μl的下游引物，9.5μl ddH2O本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.茅苍术与北苍术鉴定的SSR引物，其特征在于，包括二十一对对引物：引物对一为：上游引物SEQ ID NO:1，下游引物SEQ ID NO:2；引物对二为：上游引物SEQ ID NO:3，下游引物SEQ ID NO:4；引物对三为：上游引物SEQ ID NO:5，下游引物SEQ ID NO:6；引物对四为：上游引物SEQ ID NO:7，下游引物SEQ ID NO:8；引物对五为：上游引物SEQ ID NO:9，下游引物SEQ ID NO:10；引物对六为：上游引物SEQ ID NO:11，下游引物SEQ ID NO:12；引物对七为：上游引物SEQ ID NO:13，下游引物SEQ ID NO:14；引物对八为：上游引物SEQ ID NO:15，下游引物SEQ ID NO:16；引物对九为：上游引物SEQ ID NO:17，下游引物SEQ ID NO:18；引物对十为：上游引物SEQ ID NO:19，下游引物SEQ ID NO:20；引物对十一为：上游引物SEQ ID NO:21，下游引物SEQ ID NO:22；引物对十二为：上游引物SEQ ID NO:23，下游引物SEQ ID NO:24；引物对十三为：上游引物SEQ ID NO:25，下游引物SEQ ID NO:26；引物对十四为：上游引物SEQ ID NO:27，下游引物SEQ ID NO:28；引物对十五为：上游引物SEQ ID NO:29，下游引物SEQ ID NO:30；引物对十六为：上游引物SEQ ID NO:31，下游引物SEQ ID NO:32；引物对十七为：上游引物SEQ ID NO:33，下游引物SEQ ID NO:34；引物对十八为：上游引物SEQ ID NO:35，下游引物SEQ ID NO:36；引物对十九为：上游引物SEQ ID NO:37，下游引物SEQ ID NO:38；引物对二十为：上游引物SEQ ID NO:39，下游引物SEQ ID NO:40；引物对二十一为：上游引物SEQ ID NO:41，下游引物SEQ ID NO:42。2.一种茅苍术与北苍术的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取待鉴定苍术DNA，加入如权利要求1所述的引物对进行PCR反应，分离得到PCR扩增产物；(2)步骤(1)得到的PCR 扩增产物进行毛细管荧光电泳检测，得到测序数...

【专利技术属性】
技术研发人员：余坤，钟浩天，森林，王萌，卫威，万雨露，
申请(专利权)人：湖北宏图中药材科技有限公司，
类型：发明
国别省市：