一种天花病毒检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物检测技术领域，具体涉及一种天花病毒检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒。采用本发明专利技术提供的引物探针组合物检测天花病毒，具有较好的灵敏度和准确度，扩增效率高，且操作简便，快速省时。本发明专利技术利用微流控芯片技术，通过集核酸提取、纯化、扩增和检测为一体的方式，解决病原体快速检测的问题，实现“样本进

【技术实现步骤摘要】
一种天花病毒检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种天花病毒检测引物探针组合物及一体化微 流控芯片试剂盒。

技术介绍

[0002]天花(Smallpox)是由天花病毒引起的一种烈性传染病。天花病毒共有两类： 主天花病毒及次天花病毒。感染后的初期症状包括：高烧、疲累、头疼、心跳加 速及背痛。在发疹的初期，有淡红色的块状面积和红疹出现。之后病灶开始化脓， 直到结痂。最后发展成疥癣，慢慢剥落。多种正痘病毒疾病的病症均与天花的如 出一辙。天花主要通过空气传播。患者的呼吸道与皮肤疱疹分泌物均载有病毒， 故避免与其近距离接触可减低患病的风险。接种天花疫苗为预防此病的最佳方 法。目前并没有认可的抗天花药物。世界卫生组织于1980年正式宣布消灭天花， 使之成为迄今唯一被消灭的人类传染病。但天花病毒库存仍然存在，因此人们正 在加紧努力补充疫苗供应，开发新的药物和诊断方法用于早期正痘病毒的检测。 基于DNA技术已被开发用于早期正痘病毒的检测和鉴定，这些方法包括荧光定 量PCR、核酸测序和限制片段长度多态性分析。其中测序与限制性片段长度多 态性分析为物种或菌株鉴定提供了最高水平的特异性，但不宜作为快速诊断工 具。实时荧光定量PCR技术是目前应用最广泛的用于病原菌筛查的分子检测 法，该技术具有灵敏度高、特异性强、检测速度快、自动化程度高等特点。
[0003][0004]天花病毒是线性双链DNA病毒。长度大约为185kb的天花病毒基因组含有大约200个 开放阅读框(ORFs)。这些开放阅读框所编码的蛋白与其它正痘病毒表达的蛋白具有不同程 度的相似。在这里，我们报告了基于血球凝集素HA(J7R)基因的实时TaqMan检测的开发， 可检测天花病毒并区分正痘病毒属的病毒。
[0005]对于病原体的核酸检测，市场现有检测系统或方法通常需要在检测前进行样品处理，本 申请人基于该问题，与在先前申请CN202110057507.0中公开了一种新型现场化快速核酸检测 设备CarryOn P1000Q，该设备为“手持全自动封闭式核酸qPCR分析系统”，可在60分钟 内完成新冠病毒的现场自动化核酸检测，能够实现“样品进，结果出”的快速检测。本申请 即在该技术的基础上，进一步研发出的，能够更好的配合该设备的试剂类专利技术，即天花病毒 的微流控芯片试剂盒。
[0006]现有的检测试剂盒及方法较操作时间长，且操作步骤繁琐，因此，亟需提供一种灵敏度 高、特异性强、覆盖面广、操作简便、省时且节约成本的天花病毒检测试剂盒及其使用方法。

技术实现思路

[0007]为了解决现有技术中的上述问题，本申请提供了一种天花病毒检测的引物探针组
合物及 一体化微流控芯片试剂盒。采用本专利技术所述的引物探针组合物同时检测天花病毒，具有较好 的灵敏度和准确度，扩增效率高，且操作简便，快速省时。
[0008]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0009]一方面，本专利技术提供了一种检测天花病毒的引物探针组合物，所述的引物探针组合物包 括检测天花病毒的引物探针组合物和检测内参的引物探针组合物。
[0010]具体地，所述的检测天花病毒的引物探针组合物为SPXV引物探针组合物。
[0011]具体地，所述的检测内参的引物探针组合物为IPC引物探针组合物。
[0012]进一步具体地，
[0013](1)所述的SPXV引物探针组合物为：
[0014]F(SEQ ID NO:1)：5'
‑
TGGAGAATCCACAACAGAC
‑
3'；
[0015]R(SEQ ID NO:2)：5'
‑
CATTGGCGGTTGATTTAGT
‑
3'；
[0016]P(SEQ ID NO:3)：5'
‑
ATCATACAGTCACAGACACTGTCTCATACAC
‑
3'；
[0017](2)所述的IPC引物探针组合物为：
[0018]F(SEQ ID NO:4)：5'
‑
AGTTGCAGTGTAACCGTCATGTA
‑
3'；
[0019]R(SEQ ID NO:5)：5'
‑
TCGACGAGACTCTGCTGTTAA
‑
3'；
[0020]P(SEQ ID NO:6)：5'
‑
CAGTAATCTGCGTCGCACGTGTGCA
‑
3'；
[0021]具体地，所述的天花病毒的引物探针组合物用于检测天花病毒的血球凝集素HA(J7R) 基因。
[0022]具体地，所述探针的5'端标记有荧光报告基团，所述探针的3'端标记有淬灭基团；所述 荧光报告基团为CY3、CY5、CY5.5、FAM、HEX、VIC、JOE或ROX中的一种或多种，所 述淬灭基团为荧光淬灭基团。
[0023]进一步具体地，所述的检测天花病毒的探针用FAM标记，所述的检测内参IPC的探针用 CY5标记。
[0024]另一方面，本专利技术提供了上述引物探针组合物在制备检测天花病毒产品中的应用。
[0025]具体地，所述的产品包括但不限于独立试剂、芯片或试剂盒。
[0026]又一方面，本专利技术提供了一种检测天花病毒的产品，所述的产品包括上述引物探针组合 物。
[0027]具体地，所述的产品包括但不限于独立试剂、芯片或试剂盒。
[0028]具体地，所述的产品还包括纯化试剂、冻干试剂和IPC质控品。
[0029]进一步具体地，所述的纯化试剂包括裂解液、洗脱液和磁珠，所述的裂解液包括盐酸胍、 盐酸胍和Triton X
‑
100，所述的洗脱液包括Tris
‑
HCl，所述的裂解液和洗脱液的体积比为 1:2
‑
2.5，所述的磁珠为干化磁珠。
[0030]进一步具体地，所述的裂解液包括6M盐酸胍、0.4M pH4.7盐酸胍和2％Triton X
‑
100， 所述的洗脱液包括10mM pH8.5 Tris
‑
HCl。
[0031]进一步具体地，所述的冻干试剂包括脂多糖、羧丙基甲基纤维素、甘露醇、海藻糖、普 鲁兰多糖、2
‑
羟丙基
‑
β
‑
环糊精、脱氧核糖核酸聚合酶、牛血清白蛋白、消泡剂、脱氧核苷三 磷酸、KCI、Tris
‑
HCI(pH 9.0)、MgCl2、Tween 20。
[0032]进一步具体地，所述的IPC质控品以冻干球的形式存在于微流控芯片中；
[0033]所述的IPC质控品的人工合成序列为SEQIDNO:7；
[0034]所述的IPC质控品是DNA质粒；
[0035]所述的IPC质控品的冻干体系包括甘露醇、海藻糖本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测天花病毒的引物探针组合物，其特征在于：所述的引物探针组合物包括检测天花病毒的引物探针组合物和检测内参的引物探针组合物；所述的检测天花病毒的引物探针组合物为SPXV引物探针组合物；所述的检测内参的引物探针组合物为IPC引物探针组合物；所述的SPXV引物探针组合物为：F：SEQ ID NO:1：5'
‑
TGGAGAATCCACAACAGAC
‑
3'；R：SEQ ID NO:2：5'
‑
CATTGGCGGTTGATTTAGT
‑
3'；P：SEQ ID NO:3：5'
‑
ATCATACAGTCACAGACACTGTCTCATACAC
‑
3'；所述的IPC引物探针组合物为：F：SEQ ID NO:4：5'
‑
AGTTGCAGTGTAACCGTCATGTA
‑
3'；R：SEQ ID NO:5：5'
‑
TCGACGAGACTCTGCTGTTAA
‑
3'；P：SEQ ID NO:6：5'
‑
CAGTAATCTGCGTCGCACGTGTGCA
‑
3'。2.权利要求1所述的引物探针组合物在制备检测天花病毒产品中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的产品包括独立试剂、芯片或试剂盒。4.一种检测天花病毒的产品，其特征在于：所述的产品包括权利要求1所述的引物探针组合物。5.根据权利要求4所述的产品，其特征在于：所述的产品还包括纯化试剂、冻干试剂和IPC质控品。6.根据权利要求5所述的产品，其特征在于：所述的纯化试剂包括裂解液、洗脱液和磁珠，所述的裂解液包括盐酸胍、盐酸胍和Triton X
‑
100，所述的洗脱液包括Tris
‑
HCl，所述的裂解液和洗脱液的体积比为1:2
‑
2.5，所述的磁珠为干化磁珠。7.根据权利要求5所述的产品，其特征在于：所述的冻干试剂包括脂多糖、羧丙基甲基纤维素、甘露醇、海藻糖、普鲁兰多糖、2
‑
羟丙基
‑
β
‑
环糊精、脱氧核糖核酸聚合酶、牛血清白蛋白、消泡...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖利力，康洁，刘翌，金鑫浩，贾欣月，张瑜，高静，蔡亦梅，范东雨，任鲁风，
申请(专利权)人：北京璘客生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：