刺梨果多糖在制备预防或治疗心肌缺血药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了刺梨果多糖在制备预防或治疗心肌缺血药物中的新用途，通过异丙肾上腺素（ISO）诱导C57BL/6小鼠心肌缺血模型探讨刺梨果多糖对心肌缺血保护作用及相关机制，结果显示，刺梨果多糖能有效减少ISO诱导小鼠心肌梗死面积，降低心肌LDH活性，增加SOD活性并抑制细胞凋亡，从而发挥防治心肌缺血的作用，其作用机制与调节Nrf2

【技术实现步骤摘要】
刺梨果多糖在制备预防或治疗心肌缺血药物中的应用


[0001]本专利技术涉及中药
，具体涉及刺梨果多糖在制备预防或治疗心肌缺血药物中的应用。

技术介绍

[0002]近年来心血管疾病逐渐成为人们健康的头号“杀手”，全球约有50%的人因心血管疾病死亡。而缺血性心脏病（IHD）是心血管疾病致死率居高不下的原因之一，长期心肌供氧量降低引起的能量代谢失衡，造成严重的心肌受损，使心肌收缩力减弱甚至丧失，诱发心绞痛与心律失常等症状，如未能及时治疗会导致心力衰竭、心肌梗死甚至造成患者死亡。
[0003]氧化应激已被证实是诱发心肌缺血重要因素之一，其主要原因是ROS的产生与抗氧化系统的清除率无法保持平衡导致。心肌缺血导致氧运输量不足，造成心肌细胞缺氧，线粒体受损，使抗氧化清除系统无法清除过量产生的ROS，氧化还原反应失衡，导致氧化应激反应，心肌缺血同时还会使线粒体膜通透性转换孔打开，使得一些促凋亡内容物释放到细胞质中，与ROS联合促进细胞凋亡。目前临床常采用β受体阻滞剂、钙通道阻滞剂等药物治疗IHD，但报道显示部分患者会出现低血压、心律失常等严重副作用，限制了心肌缺血药物的长期应用，因此筛选安全有效的抑制氧化应激损伤成分，有望成为治疗心肌缺血的新策略。
[0004]刺梨 (Rosa roxburghii Tratt) 蔷薇科蔷薇属植物，主产于我国云贵等西南高原区，果实香甜，富含维生素、氨基酸、微量元素、SOD、多糖及黄酮等多种活性成分，具有很高的营养保健功能及开发与应用价值。现代药理学研究显示刺梨提取物具有抗氧化、降血糖以及提高机体免疫等作用。CN202210468807.2公开了刺梨多糖具有降脂和降胆固醇功效。CN201811209724 .1公开了刺梨多糖可以促进乙酸、丙酸和丁酸等短链脂肪酸的生成，促进乳酸菌和双歧杆菌有益菌的生长，可以作为益生元，同时刺梨多糖可以抑制α
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葡萄糖甘酶活性，可以用于肠道疾病和糖尿病的辅助治疗健康食品或药物中。然而目前尚未见刺梨果多糖在制备预防或治疗心肌缺血药物中的文献报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供刺梨果多糖在制备预防或治疗心肌缺血药物中的新用途，以期为心肌缺血临床治疗药物的研发提供参考。
[0006]本专利技术所述刺梨果多糖主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成，摩尔比为4~5：2~3：2~3：30~31：41~42：13~14：5~6。本专利技术所述刺梨果多糖中中性糖含量为20
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21% ，糖醛酸含量为16
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18%。
[0007]本专利技术还提供了上述刺梨果多糖的制备方法，包括如下步骤：将干燥刺梨果实，以水为溶剂加热提取，过滤，将滤液浓缩后离心，取上清液，将上清液透析后加入乙醇，醇沉过夜，离心，弃上清，沉淀烘干，加水复溶，冷冻干燥，即得刺梨果多糖。优选地，所述乙醇的体积浓度为90
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95%。
[0008]本专利技术选用异丙肾上腺素诱导C57BL/6小鼠心肌缺血模型探讨刺梨果多糖对心肌
缺血保护作用及相关机制，研究发现模型组小鼠心脏与正常小鼠心脏相比明显变大，心电图ST段明显抬高，TTC染色液结果显示心肌组织梗死面积显著增加，通过病理切片也观察到明显的炎症浸润并伴有少量的心肌空泡，心肌组织出现明显的细胞间隙；经刺梨果多糖治疗后，小鼠心脏大小恢复至正常，ST段明显降低，梗死面积也显著减少，并且从病理切片也观察到炎性细胞明显减少，细胞间隙缩减，以上结果表明刺梨果多糖有效抑制ISO诱导的小鼠心肌损伤。
[0009]心肌缺血过程中，未被及时清除的ROS会激活脂质过氧化产生大量MDA，增加细胞膜通透性，使LDH进出血液，使血清中LDH活性升高，机体第一道氧化应激防线SOD能够有效清除ROS，但由于氧化应激造成的线粒体受损，使得SOD活性下降，无法正常清除自由基发挥抗氧化的作用。本研究结果显示模型组小鼠血清SOD活性显著降低，MDA含量显著增加，LDH活性显著升高；经刺梨果多糖治疗后，小鼠血清SOD活性显著升高，MDA含量也显著减少且LDH活性显著下降，表明刺梨果多糖通过抑制氧化应激损伤减少小鼠因ISO诱导造成的心肌细胞死亡。
[0010]早期研究发现NADPH氧化酶2(NOX2)是产生ROS主要蛋白酶之一。ROS通过激活半胱天冬酶
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3（Caspase
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3），同时参与Bcl2、Bax的调控来诱导细胞凋亡，Nrf2直接参与氧化应激，Keap1为氧化应激传感蛋白，参与Nrf2的反馈调节，两者可在核外相互结合达到平衡，在氧化应激情况下Nrf2在胞内积累，易位到细胞核内，调节HO
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1水平来抑制氧化应激从而达到保护细胞的目的。本研究结果显示模型组小鼠心脏NOX2、Keap1、Bax和Cleaved
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Caspase 3蛋白表达显著上调，Nrf2、HO
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1和Bcl2蛋白表达显著下调，经刺梨果多糖治疗后，NOX2、Keap1、Bax和Cleaved
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Caspase 3蛋白表达显著下调，Nrf2、HO
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1和Bcl2蛋白表达显著上调，表明刺梨果多糖可激活Keap1/Nrf2信号通路，抑制氧化应激，并通过上调Bcl2并下调Bax与Caspase
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3蛋白表达减少细胞凋亡，从而减少ISO诱导的小鼠心肌损伤。
[0011]本专利技术所述药物包含有效含量的刺梨果多糖和药学上可接受的载体。药物可经本领域常规方法制备成适宜的剂型。优选的，所述药物的剂型为片剂、胶囊剂、粉剂或颗粒剂。
[0012]本专利技术与现有技术相比，具有如下优异效果：本专利技术提供了刺梨果多糖在制备预防或治疗心肌缺血药物中的新用途，通过ISO诱导C57BL/6小鼠心肌缺血模型探讨刺梨果多糖对心肌缺血保护作用及相关机制，结果显示，刺梨果多糖能有效减少ISO诱导小鼠心肌梗死面积，降低心肌LDH活性，增加SOD活性并抑制细胞凋亡，从而发挥防治心肌缺血的作用，其作用机制与调节Nrf2
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Keap1信号通路和Bcl2、Bax及Cleaved
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Caspase 3蛋白来改善氧化应激，抑制心肌细胞死亡有关，为临床治疗心肌缺血提供了一种新药物。
附图说明
[0013]图1为刺梨果多糖中单糖的组成图谱（A：CL
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W单糖组成图谱；B：标准品，Man：甘露糖、Rha：鼠李糖、GlcA：葡萄糖醛酸、GalA：半乳糖醛酸、Glc：葡萄糖、Gal：半乳糖、xyl：木糖、Ara：阿拉伯糖、FUC:岩藻糖）；图2为刺梨果多糖对H9C2细胞的影响；图3为刺梨果多糖对缺氧H9C2细胞存活率的影响；图4为刺梨果多糖对缺氧H9C2细胞ROS的影响；
H1850R）；样品冷冻研磨仪（广州露卡测序仪器有限公司，型号LUKYM
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1）；倒置荧光显微镜（ECLIPSE，型号Ti2
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.刺梨果多糖在制备预防或治疗心肌缺血药物中的应用，所述刺梨果多糖主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成，摩尔比为4~5：2~3：2~3：30~31：41~42：13~14：5~6。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述刺梨果多糖中中性糖含量占比为20
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21% ，糖醛酸含量占比为16
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18%。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述刺梨果多糖的制备方法，包括如下步骤：将干燥刺梨果实，以水为溶剂加热提取，过滤，将滤液浓缩后离心，取上清液，将上清液透析后加入乙醇，醇沉过夜，离心，弃上...

【专利技术属性】
技术研发人员：董更婷，徐洋洋，戴卫波，丁侃，彭伟文，王琪文，罗青，
申请(专利权)人：中山市中医院，
类型：发明
国别省市：