SRPK3基因在制备治疗心肌肥厚的药物中的用途制造技术

本发明专利技术公开了SRPK3基因在制备治疗心肌肥厚的药物中的用途，SRPK3基因的序列如SEQ ID NO.1所示，SRPK3基因表达抑制剂为以SRPK3基因为作用靶标制备或筛选得到的对SRPK3基因具有抑制效果的物质。本发明专利技术发现，与正常组相比，心肌肥厚模型小鼠的SRPK3表达显著上调，SRPK3基因敲除小鼠的心重/体重、肺重/体重、心肌细胞横截面积和纤维化均显著减轻，心脏收缩功能明显改善。基于以上发现，SRPK3可作为心肌肥厚和心力衰竭治疗药物的作用靶标，其抑制剂可用于制备预防、缓解和/或治疗病理性心肌肥厚的药物。物。物。

【技术实现步骤摘要】
SRPK3基因在制备治疗心肌肥厚的药物中的用途


[0001]本专利技术属于生物医药领域，特别涉及SRPK3基因在制备治疗心肌肥厚的药物中的用途。

技术介绍

[0002]心肌肥厚为心脏长期压力或容量超负荷所致的病理变化，常见于高血压和心脏瓣膜病变等心血管疾病的患者，主要表现为心肌细胞肥大和肌节增多引发的心脏体积增大和重量增加。早期的心肌肥厚以心肌细胞肥大、心肌收缩力增强为特征，作为维持心输出量和外周循环灌注的一种代偿机制，但长期的心脏增大会增加心肌耗氧并降低心室壁顺应性，导致心脏结构和功能失代偿。在早期的心肌肥厚之前，心肌细胞的线粒体超微结构和代谢层面已经发生变化，同时心肌细胞表型发生胚胎型转化，并伴随心肌间质细胞增生和心脏细胞外基质沉积，导致心肌重构和心功能不全。长期心肌肥厚易诱发恶行心律失常、冠心病、心脏瓣膜狭窄或关闭不全等心血管疾病，同时与心脏代谢性疾病和心源性猝死等其他心血管病变密切相关。
[0003]丝氨酸
‑
精氨酸蛋白激酶(SRPKs)是一类细胞周期依赖性激酶，主要通过磷酸化修饰富含丝氨酸
‑
精氨酸序列的蛋白参与前体信使RNA(pre
‑
mRNA)的剪切调控过程，同时控制剪切调控因子的亚细胞定位；另外，SRPKs参与调控细胞周期和调亡，由于这些功能，SRPKs可能在肿瘤发生中发挥作用。除了剪接调节因子外，SRPKs还参与多种蛋白的磷酸化，比如SRPK2磷酸化Tau蛋白引起阿尔茨海默病的发生发展，SRPKs磷酸化病毒蛋白(如HBV核心蛋白)并调节其复制过程。SRPKs是一个控制选择性剪接的激酶家族，与许多类型的癌症有关。靶向SRPKs提出了一种通过调节异常选择性剪接抑制癌细胞增殖和转移的潜在策略。其中，SRPK3为一类肌肉特异性蛋白激酶，参与帕金森等疾病的发生发展，但SRPK3在心脏疾病中仍没有研究报道。

技术实现思路

[0004]申请人发现Srpk
fl/f
小鼠敲除SRPK3基因后，与未敲除SRPK3基因的Srpk
fl/fl
小鼠相比，心重/体重、肺重/体重、心肌细胞横截面积和纤维化均显著减轻，心脏收缩功能明显改善，这些结果表明SRPK3基因敲除缓解病理性心肌肥厚的疾病进程。基于上述发现，可将SRPK3基因用作筛选治疗心肌肥厚和心力衰竭的药物靶标，其抑制剂可用于制备预防、缓解和/或治疗病理性心肌肥厚的药物。
[0005]本专利技术提供的技术方案如下：
[0006]第一方面，本专利技术提供SRPK3基因表达抑制剂在制备预防、缓解和/或治疗心肌肥厚的药物中的用途，SRPK3基因的序列如SEQ ID NO.1所示，SRPK3基因表达抑制剂为以SRPK3基因为作用靶标制备或筛选得到的对SRPK3基因具有抑制效果的物质。
[0007]在上述技术方案的基础上，SRPK3基因表达抑制剂为核酸、核酸构建体、腺病毒、蛋白或小分子化合物。
[0008]在上述技术方案的基础上，SRPK3基因表达抑制剂包括干扰质粒，干扰质粒包括如SEQ ID NO.6所示的序列。
[0009]在上述技术方案的基础上，干扰质粒被包装成腺病毒，通过腺病毒转染进入细胞。
[0010]在上述技术方案的基础上，腺病毒通过如下方式获得：将含SEQ ID NO.6所示序列的干扰质粒与腺病毒骨架载体pADEasy
‑
1共转染到HEK293细胞中，获得重组的腺病毒。
[0011]在上述技术方案的基础上，心肌肥厚为病理性心肌肥厚，包括高血压、主动脉狭窄、二尖瓣关闭不全中的一种或多种引发的心肌肥厚或心力衰竭。
[0012]第二方面，本专利技术提供一种预防、缓解和/或治疗心肌肥厚的药物，包括上述SRPK3基因表达抑制剂的一种或多种。
[0013]第三方面，本专利技术提供一种心肌肥厚联合治疗药物组合，该药物组合包括上述一种或几种SRPK3基因表达抑制剂和至少一种其他治疗心肌肥厚的药物。
[0014]在上述技术方案的基础上，心肌肥厚合治疗药物组合选自以下形式中的任意一种：
[0015](i)将SRPK3基因表达抑制剂和其他治疗心肌肥厚药物分别制成独立的制剂；
[0016](ii)将SRPK3基因表达抑制剂和其他治疗心肌肥厚药物配制成复方制剂。
[0017]第四方面，本专利技术提供一种心肌肥厚检测系统，包括：
[0018]特异性识别SRPK3蛋白的检测试剂或检测试剂组合；以及
[0019]能定量检测检测试剂或检测试剂组合的仪器。
[0020]心肌肥厚检测系统检测到心肌细胞内SRPK3蛋白的含量高于正常值时，判断为心肌肥厚。
[0021]相对于现有技术，本专利技术具有如下的优点及效果：
[0022](1)本专利技术发现抑制SRPK3基因能够改善心肌肥厚，提供了一种以SRPK3基因为抑制靶标预防、缓解和/或治疗心肌肥厚的新思路。
[0023](2)本专利技术提供了多种SRPK3基因抑制剂及其在制备预防、缓解和/或治疗心肌肥厚的药物中的用途，丰富了心肌肥厚药物库。
附图说明
[0024]图1是正常人和临床心肌肥厚患者(心衰病人)心脏中BNP、β
‑
MHC、SRPK3的蛋白表达情况及统计柱状图，β
‑
Tubulin作为内参，心肌肥厚病人心脏组织中SRPK3的表达上调(*：p＜0.05vs正常人组)。
[0025]图2是C57BL/6小鼠在假手术和主动脉弓缩窄手术(TAC)造模后2周、4周心脏中BNP、β
‑
MHC、SRPK3的表达情况及统计图，β
‑
Tubulin作为内参，发生心肌肥厚的心脏SRPK3的表达上调(*：p＜0.05vs假手术组)。
[0026]图3是体外培养乳鼠原代心肌细胞中对照组和血管紧张素II刺激后SRPK3的蛋白表达情况及统计图，β
‑
Tubulin作为内参，血管紧张素II刺激后SRPK3表达上调(*：p<0.05vs对照组)。
[0027]图4是Ad
‑
shSRPK3质粒结构图谱以及SRPK3基因敲低后SRPK3蛋白表达验证及统计图，β
‑
Tubulin作为内参，发现SRPK3表达显著降低(*：p<0.05vsAd
‑
shRNA组)。
[0028]图5是体外培养乳鼠原代心肌细胞用腺病毒Ad
‑
shRNA和Ad
‑
shSRPK3感染，经血管
紧张素II刺激48小时后的免疫荧光及细胞表面面积统计图，SRPK3的干扰腺病毒抑制心肌细胞肥大(*：p＜0.05vsAd
‑
shRNA对照组，#：p＜0.05vsAd
‑
shRNA血管紧张素II组)。
[0029]图6是SRPK3
fl/fl
/Myh6
‑
Cre和同窝野生型SR本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.SRPK3基因表达抑制剂在制备预防、缓解和/或治疗心肌肥厚的药物中的用途，其特征在于：所述SRPK3基因的序列如SEQ ID NO.1所示，所述SRPK3基因表达抑制剂为以SRPK3基因为作用靶标制备或筛选得到的对SRPK3基因具有抑制效果的物质。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述SRPK3基因表达抑制剂为核酸、核酸构建体、腺病毒、蛋白或小分子化合物。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述SRPK3基因表达抑制剂包括干扰质粒，所述干扰质粒包括如SEQ ID NO.6所示的序列。4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述干扰质粒被包装成腺病毒，通过腺病毒转染进入细胞。5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述腺病毒通过如下方式获得：将含SEQ ID NO.6所示序列的干扰质粒与腺病毒骨架载体pADEasy
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1共转染到HEK293细胞中，获得重组的腺病...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐其柱，谢赛阳，邓伟，刘士强，张彤，
申请(专利权)人：武汉大学人民医院湖北省人民医院，
类型：发明
国别省市：