一种腮腺炎病毒突变体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及病毒技术领域，具体涉及一种腮腺炎病毒突变体及其应用。本发明专利技术提供一种腮腺炎病毒突变体，所述腮腺炎病毒突变体的基因组序列如SEQ ID NO.1所示或如SEQ ID NO.1所示序列的完全互补序列所示。该腮腺炎病毒突变体具有较高的遗传稳定性，能够在病毒传代过程中保持稳定遗传。此外，该腮腺炎病毒突变体的病毒滴度高，且质量可控，具有较高的免疫原性，制得疫苗具有较高的安全性，具有较好的应用前景。景。

【技术实现步骤摘要】
一种腮腺炎病毒突变体及其应用


[0001]本专利技术涉及病毒
，尤其涉及一种腮腺炎病毒突变体及其应用。

技术介绍

[0002]腮腺炎病毒（Mumps Virus，MuV）属于副粘病毒科、副粘病毒属病毒，呈球形，核衣壳呈螺旋对称，有包膜。病毒直径约为100~600nm，基因组为单负链RNA，全基因组由15384个核苷酸组成，RNA的排列顺序为：3
’
NP
‑
V/P/I
‑
M
‑
F
‑
SH
‑
HN
‑
L5
’
，编码7个蛋白：核蛋白（nucleoprotein，NP）、磷蛋白（phosphoprotein，P）、基质蛋白（matrix protein，M）、融合蛋白（fusion protein，F）、小疏水蛋白（membrane small hydrophobic protein，SH）、血凝素
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神经氨酸酶蛋白（hemagglutinin/neuraminidase surface proteins，HN）和大蛋白（large protein，L）。
[0003]目前，全球使用的所有含腮腺炎病毒的疫苗均为减毒活疫苗，使用的主要疫苗株包括：Jeryl Lynn或Jeryl Lynn
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derived株、Urabe AM9株、Leningrad
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Zagreb、Leningrad
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3等，但使用最为广泛的疫苗株是Jeryl Lynn株或Jeryl Lynn
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derived株。
[0004]Jeryl Lynn流行性腮腺炎活疫苗（MVL）毒株由默克公司于1966年开发，自19世纪70年代初以来已在美国和其他国家广泛使用。测序表明，该疫苗含有两种核苷酸序列截然不同的亚株的混合物。相关研究已经确定了两种亚株的完整基因组序列，并确定了414个核苷酸差异（2.69%），导致87个氨基酸取代（1.67%）（Amexis G, Rubin S, Chizhikov V, et al. Sequence diversity of Jeryl Lynn strain of mumps virus: quantitative mutant analysis for vaccine quality control.[J].Virology, 2002, 300( 2):171
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179.）。通过监测它们在不同条件下繁殖的病毒群体中的动力学，发现在Vero或CEF细胞培养物中传代Jeryl Lynn毒株导致主要成分JL1的快速选择，而在胚胎鸡蛋中（ECE）生长则有利于次要成分JL2的积累。为了确保疫苗的一致性，必需对Jeryl Lynn疫苗的亚毒株组成进行质控。
[0005]现阶段中国使用的腮腺炎疫苗以S79株病毒为主，为19世纪60年代末采用Jeryl Lynn株腮腺炎减毒活疫苗在原代鸡胚细胞上传代扩增获得。研究显示，以SH序列作为亚株分型标准，S79主要有2个亚型，即与主要亚株JL
‑
5对应的S79major，与次要亚株JL
‑
2对应的S79minor，经蚀斑纯化证明S79major与S79minor的比例为2:5。然而，随着传代，该比例无法维持平衡，且无法保证该比例在任意一批疫苗中的一致性。
[0006]为了解决这一问题，葛兰素史克公司通过鸡胚胎成纤维细胞（CEFs）培养物获得单个Jeryl Lynn克隆体（即RIT4385毒株）用于麻腮风减毒活联合疫苗（MMR）的制备。然而Connaughton, Sarah M等的研究发现，即使JL
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5成分在鸡胚成纤维细胞中传代产生的RIT4385单克隆株疫苗，也发现了三个突变（V529A，L542L和L557P突变频率分别为6.2%，16.6%或21.3%）（Connaughton, S. M., Wheeler, J. X., Vitkov
á
, E., Minor, P.,&Schepelmann, S. (2015). In vitro and in vivo growth alter the population dynamic and properties of a Jeryl Lynn mumps vaccine.Vaccine,33(36),4586
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4593.）。由此可见，MuV具有较高的遗传不稳定性。病毒传播过程中的遗传漂变有可能改变疫苗的效力或安全性。因此亟待开发MuV传代过程毒力不增强或过度减毒，遗传漂变小的稳定腮腺炎病毒突变体。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供一种腮腺炎病毒突变体及其应用。
[0008]具体地，本专利技术提供以下技术方案：第一方面，本专利技术提供一种腮腺炎病毒突变体，所述腮腺炎病毒突变体的基因组序列如SEQ ID NO.1所示或如SEQ ID NO.1所示序列的完全互补序列所示。
[0009]本专利技术通过大量实验偶然发现了具有上述基因组序列的腮腺炎病毒突变体具有较高的遗传稳定性，能够在传代过程中保持稳定遗传，保持较高的病毒滴度，且具有较高的免疫原性和安全性。
[0010]本专利技术所述的腮腺炎病毒突变体命名为腮腺炎病毒MuV
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365
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W株。
[0011]本专利技术提供一种腮腺炎病毒突变体，其已于2019年09月18日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101），分类命名为腮腺炎病毒，保藏编号为CGMCC No.18504。
[0012]保藏编号为CGMCC No.18504的腮腺炎病毒突变体具有较高的遗传稳定性，能够在传代过程中保持稳定遗传，保持较高的病毒滴度，且具有较高的免疫原性和安全性。
[0013]第二方面，本专利技术提供一种病毒制剂，所述病毒制剂包含以上所述的腮腺炎病毒突变体。
[0014]上述病毒制剂可为液体或固体制剂，除包含所述腮腺炎病毒突变体外，还可包含微生物制剂领域常用的辅料。
[0015]优选地，所述病毒制剂中，所述腮腺炎病毒突变体以活病毒形式存在。
[0016]在本专利技术的一些实施方式中提供一种冻干病毒制剂，其包含所述腮腺炎病毒突变体和保护剂。
[0017]本专利技术提供所述病毒制剂的制备方法，所述方法包括培养所述腮腺炎病毒突变体并收集病毒液的步骤。
[0018]所述腮腺炎病毒突变体的培养方法包括：将SPF鸡蛋孵化至9～11日龄，经胰蛋白酶消化制备原代鸡胚细胞，细胞密度0.1~1.5亿/胚，以混合接种的方式接种MOI为0.00006~0.002的所述腮腺炎病毒突变体，在33~35℃培养，收获病毒液。优选地，所述培养的时间为130h
±
18h。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种腮腺炎病毒突变体，其特征在于，所述腮腺炎病毒突变体的基因组序列如SEQ ID NO.1所示或如SEQ ID NO.1所示序列的完全互补序列所示。2.一种腮腺炎病毒突变体，其特征在于，所述腮腺炎病毒突变体保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 18504。3.一种病毒制剂，其特征在于，所述病毒制剂包含权利要求1或2所述的腮腺炎病毒突变体。4.生物材料，其特征在于，其为以下（1）
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（4）中的任意一种：（1）序列如SEQ ID NO.1所示或如SEQ ID NO.1所示序列的完全互补序列所示的核酸分子；（2）含有（1）中所述核酸分子的表达盒；（3）含有（1）中所述核酸分子或（2）中所述表达盒的载体；（4）含有（1）中所述核酸分子或（2）中所述表达盒或（3）中所述载体的宿主细胞。5.一种免疫原性组合物，其特征在于，所述免疫原性组合物包含权利要求1或2所述的腮腺炎病毒突变体或权利要求3所述的病毒制剂或权利要求4所述的生物材料。6.权利要求1或2所述的腮腺炎病毒突变体或权利要求3所述的病毒制剂或权利要求4所述的生物材料或权利要求5所述的免疫原性组合物的以下（1）
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（9）中任意一种应用：（1）在制备预防和/或治疗腮腺炎病毒感染或腮腺炎病毒感染引起疾病的药物中的应用；（2）在制备预...

【专利技术属性】
技术研发人员：张燕，宋雪，任秀梅，刘建凯，
申请(专利权)人：北京民海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：