用于诊断川崎病冠状动脉瘤的生物标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了用于诊断川崎病冠状动脉瘤的生物标志物及其应用。本发明专利技术鉴定出一种新的川崎病冠状动脉瘤诊断生物标志物

【技术实现步骤摘要】
用于诊断川崎病冠状动脉瘤的生物标志物及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及用于诊断川崎病冠状动脉瘤的生物标志物及其应用。

技术介绍

[0002]川崎病(Kawasaki disease,KD)又称皮肤黏膜淋巴结综合征，多发于5岁以下儿童，是一种病因不明，以全身非特异性血管炎为特征的儿童获得性心血管疾病。该病主要累及中小动脉，尤其是冠状动脉。据统计，约25％未经治疗的KD患儿可进展为冠状动脉瘤(Coronary artery aneurysm,CAA)，冠状动脉狭窄，缺血性心脏病，甚至心肌梗塞而危及生命。早期治疗联合应用静脉用丙种球蛋白(Intravenous immunoglobulin,IVIG)和阿司匹林(Aspirin，ASA)后，冠状动脉瘤的比率可降至5％
‑
6％。据研究显示，童年时患过KD的患儿，在成年后早期极易出现动脉粥样硬化，血栓，或者心肌梗死等缺血性心脏病，严重影响人类健康，给社会带来巨大的经济负担。目前临床上尚缺乏特异性的实验室诊断指标，尤其是早期预测冠脉瘤的指标，临床上主要依据超声心动图，对已发生的冠脉瘤进行诊断。
[0003]尽管近年来，越来越多的学者们致力于找寻川崎病早期诊断的生物学标志物，分别发现炎症标志物(CRP，降钙素原)，免疫标志物(Treg和Th17细胞比例失衡，促炎细胞因子IL
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1β，IL
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6，TNF
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α)，蛋白标志物(氨基末端脑钠肽前体(N
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terminal probrain natriuretic peptide，NT
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proBNP)，凝血酶致敏蛋白(thrombospondin，TSP)，骨膜蛋白)，血清外泌体miRNA(miR
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1246，miR
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4436b
‑
5p，miR
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197
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3p，miR
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671
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5p)等可能作为川崎病诊断的分子标志物。虽然炎症标志物、免疫标志物可以辅助用于KD的临床诊断，但这些标志物对KD的诊断特异性较低。NT
‑
proBNP虽可作为KD床旁检测的理想指标，但可能与其他伴有心功能障碍的发热疾病相混淆。另外几种蛋白质生物标志物仍处于早期发现阶段，且大多数研究结果是建立在单个中心的小样本研究对象之上，需要在更大的人群进行验证，才可能将其应用于临床。到目前为止，仍未发现一个生物学标志物可提早预测川崎病有瘤患者，能在疾病早期给予有效治疗，从而降低川崎病血管病变的风险，提高KD患儿的生活质量。
[0004]血小板激活是川崎病炎症的主要病理学特征。研究表明，在冠状动脉疾病(CAD)，血小板激活如白细胞血小板聚集和p
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选择素表达升高，与心血管事件的发生密切相关。在败血症小鼠模型中，血小板和单核细胞聚集数早在造模4h时明显升高，并与致死率成正相关；在所有白细胞中，单核细胞对血小板的亲和力最高，极易与血小板形成聚集。然而，在川崎病急性期，是否存在血小板与单核细胞相互作用，血小板和单核细胞聚集数能否成为川崎病冠脉瘤的特异性诊断指标，尚不清楚。
[0005]本专利技术提供了一种川崎病冠脉瘤的诊断标志物，通过血小板和单核细胞聚集数来诊断川崎病冠脉瘤；该检测方法的优势在于，仅需少量外周血，收集白细胞成分，通过检测CD41
+
CD14
+
双阳细胞群的百分比，即可在川崎病急性期提早预测患者是否可能进展为冠脉瘤。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种诊断川崎病冠脉瘤的生物标志物。
[0007]本专利技术所采取的技术方案是：
[0008]本专利技术的第一方面，提供血小板单核细胞聚集体(monocyte
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platelet aggregates,MPA)作为标志物在制备诊断川崎病冠状动脉瘤和/或川崎病冠状动脉瘤严重程度判断的产品中的应用。
[0009]本专利技术的第二方面，提供检测血小板单核细胞聚集体的物质在制备诊断川崎病冠状动脉瘤和/或川崎病冠状动脉瘤严重程度判断的产品中的应用。
[0010]在本专利技术的一些实施方式中，所述诊断为早期诊断；也即川崎病急性期的诊断；可以通过检测血小板单核细胞聚集体来对川崎病急性期是否有瘤进行诊断。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，所述检测血小板单核细胞聚集体的物质为检测所述血小板单核细胞聚集体所需的试剂和/或仪器。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，所述检测血小板单核细胞聚集体的物质包括通过流式细胞术、单细胞测序、免疫荧光中的至少一种方法检测血小板单核细胞聚集体的物质。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，所述血小板单核细胞聚集体为CD14
+
CD41
+
的血小板单核细胞聚集体。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，所述产品包括试剂盒、试纸、芯片中的至少一种。
[0015]本专利技术的第三方面，提供一种诊断川崎病冠状动脉瘤和/或川崎病冠状动脉瘤严重程度判断的产品，所述产品包括本专利技术第二方面所述检测血小板单核细胞聚集体的物质。
[0016]本专利技术的第四方面，提供血小板单核细胞聚集体作为靶点在筛选或制备川崎病冠状动脉瘤靶向药物中的应用。
[0017]在本专利技术的一些实施方式中，将候选药物给药川崎病冠状动脉瘤模型动物，检测给药前后动物样品中血小板单核细胞聚集体的表达量差异；其中，若给药后标志物表达量与给药前表达量有显著差异，则是候选药物为靶向药物的指示。对于目标靶向药物的筛选具有极为重要的意义。
[0018]本专利技术的第五方面，提供筛选治疗川崎病冠状动脉瘤药物的方法，通过检测给药前后川崎病冠状动脉瘤患者的血小板单核细胞聚集体的比例。
[0019]本专利技术的有益效果是：
[0020]本专利技术鉴定出一种新的川崎病冠状动脉瘤的生物标志物
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血小板单核细胞聚集体，发现有瘤患者中的血小板单核细胞聚集体水平高于川崎病无瘤患者，说明血小板单核细胞聚集体可用于川崎病冠状动脉瘤的诊断或辅助诊断，其AUC为0.9883，具有非常高的诊断价值。相对传统的川崎病有瘤或无瘤的诊断指标，本专利技术具有取材更为方便，采血量更少，特异性更强，灵敏度更高，且能绝对定量，结果更为准确的优势，能够快速，准确，客观诊断川崎病冠状动脉瘤病变，这是传统诊断方法所不具备的优势。
附图说明
[0021]图1为单细胞测序证实KD急性期患儿外周血存在MPA％，而正常对照组儿童不存在。其中图1A为单细胞分析技术检测对照组(HC、Fever)组、KD急性期，KD恢复期患儿外周血
PBMC中细胞分布，单核细胞分布明显不同；图1B显示单核细胞和血小板标志基因在细胞群中的表达；图1C显示MPA细胞在各组人群细胞中的占比改变。
[0022]图2为流式细胞术检测MP本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.血小板单核细胞聚集体作为标志物在制备诊断川崎病冠状动脉瘤和/或川崎病冠状动脉瘤严重程度判断的产品中的应用。2.检测血小板单核细胞聚集体的物质在制备诊断川崎病冠状动脉瘤和/或川崎病冠状动脉瘤严重程度判断的产品中的应用。3.根据权利要求1～2任一项所述的应用，其特征在于，所述血小板单核细胞聚集体与川崎病冠状动脉瘤严重程度正相关。4.根据权利要求1～2任一项所述的应用，其特征在于，所述血小板单核细胞聚集体为CD14
+
CD41
+
的血小板单核细胞聚集体。5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测血小板单核细胞聚集体的物质为检测所述血小板单核细胞聚集...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓伟豪，张媛，郭漫丽，贾翠萍，陈乾，
申请(专利权)人：广州市妇女儿童医疗中心，
类型：发明
国别省市：