用于治疗甲型流感感染的抗体和方法技术

本公开提供了中和甲型流感病毒感染的抗体。本公开还提供了编码这样的抗体的核酸以及产生这样的抗体的永生化B细胞和培养浆细胞。此外，本公开提供了本公开的抗体在预防和治疗甲型流感感染中的用途。甲型流感感染中的用途。甲型流感感染中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗甲型流感感染的抗体和方法
[0001]本申请要求2020年12月8日提交的美国临时申请第63/122894号的优先权，其通过引用并入本文。
[0002]关于序列表的声明
[0003]与本申请相关的序列表以文本格式代替纸质副本提供，并且在此通过引用并入说明书中。包含序列表的文本文件的名称为930485_431WO_SEQUENCE_LISTING.txt。文本文件大小为23.9KB，创建于2021年12月4日，目前正通过EFS
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Web以电子方式提交。
[0004]背景


[0005]本公开涉及有效减少甲型流感感染的抗体以及这种抗体的用途。特别地，本公开涉及甲型流感感染的预防和治疗。

技术介绍

[0006]流感是传染性疾病，每年在世界各地爆发，每年导致约三百万至五百万例重症病例和约290000至650000例呼吸道死亡(WHO，流感(季节性)情况说明书，2018年11月6日)。最常见的症状包括：突然发烧、咳嗽(通常是干咳)、头痛、肌肉和关节疼痛、严重乏力(感觉不适)、喉咙痛和流鼻水。潜伏期从一天到四天不等，尽管症状通常在接触病毒后大约两天开始。流感的并发症可能包括肺炎、鼻窦感染，以及先前健康问题的恶化，如哮喘或心力衰竭、败血症或慢性基础疾病的恶化。
[0007]流感是由流感病毒引起的，流感病毒是正粘病毒科的一组抗原性和遗传多样性的病毒，含有负义、单链、分节段的RNA基因组。在四种类型流感病毒(A、B、C和D)中，有三种(A、B和C)影响人类。甲型流感病毒是人类最致命的病原体，导致最严重的疾病。甲型流感病毒可以根据主要表面蛋白的不同亚型进行分类：血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)。甲型流感至少有18种亚型，由其血凝素(HA)蛋白限定。HA可分为两组。第1组包括H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13、H16和H17亚型，第2组包括H3、H4、H7、H10、H14和H15亚型。虽然所有亚型都存在于鸟类中，但大多数H1、H2和H3亚型会导致人类疾病。H5、H7和H9亚型在人类中引起散发性严重感染，并可能产生新的疫情。甲型流感病毒不断进化产生新的变种，这种现象称为抗原漂移。因此，针对过去病毒产生的抗体对漂移产生的新病毒的保护性很差或者没有保护性。结果是，每年都必须生产新的疫苗来对抗预计会出现的H1和H3病毒，这个过程非常昂贵，而且并不总是有效的。这同样适用于H5流感疫苗的生产。
[0008]HA是甲型流感病毒的主要表面蛋白，它是由感染或疫苗接种诱导的中和抗体的主要靶标。HA负责将病毒与膜上含唾液酸的细胞，如上呼吸道细胞或红细胞结合。此外，在pH降低后，HA还介导病毒被膜与内吞体膜的融合。HA是同源三聚体完整膜糖蛋白。HA三聚体由三个相同的单体组成，每个单体都由完整的HA0单一多肽链组成，所述多肽链具有由两个二硫键连接的HA1和HA2区域。每个HA2区采用α螺旋卷曲结构，主要形成HA的“茎部”或“柄部”区，而HA1区是含有混合α/β结构的小球状结构域(HA的“头部”区)。球形的HA头部区介导与
al.The Hemagglutinin A Stem Antibody MEDI8852 Prevents and Controls Disease and Limits Transmission of Pandemic Influenza Viruses.J Infect Dis 216，356
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365，https：//doi.org/10.1093/infdis/jix292(2017))。MEDI8852被证明与高度保守的表位结合，该表位与其他结构特征的干细胞反应性中和抗体显著不同(Kallewaard NL，Corti D，CoHins PJ，et al.Structure and Function Analysis of an Antibody Recognizing All Influenza A Subtypes.Cell.2016；166(3)：596
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608)。

技术实现思路

[0011]鉴于上述，本公开的目的是提供新型抗体，其广泛中和甲型流感病毒，并与现有技术的抗体相比提供增强的疗效。
[0012]这些目的是通过下文和所附权利要求书中提出的主题来实现的。
[0013]附图的简要说明
[0014]以下将对所附附图作简要说明。这些图旨在更详细地说明本公开。但不旨在以任何方式限制本公开的主题。
[0015]图1显示，对于实施例1，通过抗H1N1HA CA09(A/California/07/09)的ELISA评估的FluAB_wt、FluAB_MLNS、FluAB_GAALIE和FluAB_GAALIE+MLNS与血凝素(HA)的结合。
[0016]图2A和图2B显示，对于实施例2，(A)通过FluAB_wt、FluAB_MLNS、FluAB_GAALIE和FluAB_GAALIE+MLNS对H1N1 CA09株(A/California/07/09)的中和，和(B)通过FluAB_wt、FluAB_MLNS和FluAB_GAALIE对H3N2株A/Aichi/2/68的中和。
[0017]图3显示，对于实施例3，通过BLI评估的FluAB_wt、FluAB_MLNS、FluAB_GAALIE和FluAB_GAALIE+MLNS与人FcγR的结合。通过Octet测量FluAB变体与多个人FcgR的结合。将2μg/ml的His标记的人FcgR(FcgRIIa等位基因H131、FcgRIIa等位基因R131、FcgRIIa等位基因F158、FcgRIIIa等位基因V158和FcgRIIb)捕获到抗penta
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His传感器上6分钟。然后，在1μg/ml的affiniPure F(ab
′
)2片段山羊抗人IgG、F(ab
′
)2片段特异性(通过Fab片段交联抗体)的存在下，将负载FcgR的传感器暴露于含有2μg/ml的每种mAb的动力学缓冲液(pH 7.1)中4分钟(图的左侧)，随后在同一缓冲液中进行另外4分钟的解离步骤(图的右侧)。使用Octet RED96(Fort
é
Bio)随干扰模式的变化实时测量结合和解离曲线。
[0018]图4显示，对于实施例4，FluAB_wt和FluAB_GAALIE与C1q的结合。通过Octet测量FluAB_wt和FluAB_GAALIE与人C1q的结合。抗人Fab(CH1)传感器用于通过Fab片段捕获10μg/ml的FluAB_wt和FluAB_GAALIE的全IgG1，作用10分钟。然后将负载IgG的传感器暴露于含有3μg/ml纯化的人C1q的动力学缓冲液(pH 7.1)中4分钟(图的左侧)，随后在同一缓冲液中进行另外4分钟的解离步骤(图的右侧)。
[0019]图5A和图5B显示，对于实施例5，在工程Jurkat细胞中，使用NFAT介导本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗体，包含含有分别在SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3中所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链；含有分别在SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6中所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链；以及重链恒定区中的G236A突变、A330L突变和I332E突变。2.根据权利要求1所述的抗体，其中抗体不包含重链恒定区的S239D突变。3.根据权利要求1或2所述的抗体，其中抗体与甲型流感病毒的血凝素结合。4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体，其中抗体中和甲型流感病毒的感染。5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体，其中抗体在重链恒定区包含延长半衰期的突变。6.根据权利要求5所述的抗体，其中抗体包含重链恒定区的M428L突变和N434S突变。7.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中抗体是人类抗体。8.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中抗体是单克隆抗体。9.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中抗体是IgG型抗体。10.根据权利要求9所述的抗体，其中抗体是IgG1型抗体。11.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中抗体的轻链是κ轻链。12.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括与SEQ ID NO：7具有至少70％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：8具有至少70％同一性的氨基酸序列，其中权利要求1中限定的CDR序列保持不变。13.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括与SEQ ID NO：7具有至少75％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：8具有至少75％同一性的氨基酸序列，其中权利要求1中限定的CDR序列保持不变。14.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括与SEQ ID NO：7具有至少80％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：8具有至少80％同一性的氨基酸序列，其中权利要求1中限定的CDR序列保持不变。15.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括与SEQ ID NO：7具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：8具有至少85％同一性的氨基酸序列，其中权利要求1中限定的CDR序列保持不变。16.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括与SEQ ID NO：7具有至少90％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：8具有至少90％同一性的氨基酸序列，其中权利要求1中限定的CDR序列保持不变。17.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括与SEQ ID NO：7具有至少95％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：8具有至少95％同一性的氨基酸序列，其中权利要求1中限定的CDR序列保持不变。
18.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列，所述轻链可变区包括SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列，其中权利要求1中限定的CDR序列保持不变。19.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中抗体包含CH2区，除G236A、A330L和I332E外，该CH2区不包含其他突变。20.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：达维德，
申请(专利权)人：胡默波斯生物医学公司，
类型：发明
国别省市：