一种液相色谱法测定左西孟旦中丙二腈含量的方法技术

本发明专利技术属于药物分析技术领域，解决了现有技术中存在的不足，提供了一种液相色谱法测定左西孟旦中丙二腈含量的方法，丙二腈的定量限可达0.02%，且可控制左西孟旦中残留量不得过0.1%，满足左西孟旦的质量控制需求，确保了制剂产品左西孟旦注射液的质量安全。剂产品左西孟旦注射液的质量安全。剂产品左西孟旦注射液的质量安全。

【技术实现步骤摘要】
一种液相色谱法测定左西孟旦中丙二腈含量的方法


[0001]本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种左西孟旦中丙二腈含量的HPLC测定方法。

技术介绍

[0002]左西孟旦注射液适用于传统治疗（利尿剂、血管紧张素转换酶抑制剂和洋地黄类）疗效不佳，并且需要增加心肌收缩力的急性失代偿心力衰竭（ADHF）的短期治疗。自2000年在瑞典获批至今，左西孟旦在临床上已有20年的应用历史，其作用机制复杂，既有母体药物的作用，也有长效代谢物的作用，通过正性肌力、扩张血管、心肌保护三重作用机制，可减轻心肌缺血，改善顿抑心肌功能。
[0003]左西孟旦注射液的原料药左西孟旦，CAS号：141505
‑
33
‑
1，化学名称为(R)
‑
[[4
‑
(1,4,5,6,
‑
四氢
‑4‑
甲基
‑6‑
氧代
‑3‑
哒嗪基)苯基]‑
亚肼基]‑
丙二睛，结构式如下：
[0004][0005]丙二腈，CAS号：109
‑
77
‑
3，是左西孟旦合成工艺中最后一步反应使用的起始物料，结构式如下：
[0006][0007]由于丙二腈系在左西孟旦合成工艺中最后一步反应中使用，故容易残留至左西孟旦中，且左西孟旦在高温条件下，也可降解产生丙二腈（左西孟旦降解产生丙二腈的反应式如下），影响终产品左西孟旦的质量。因此，建立一种稳定有效的丙二腈的检测方法，完善对左西孟旦的质量控制，是非常必要的。
[0008][0009]目前检索到的丙二腈检测方法有气相色谱法、气相色谱质谱联用法、液相色谱质谱联用法。左西孟旦在高温条件下可降解产生丙二腈，在气相色谱法或气相色谱质谱联用法的检测过程中，进样口的高温环境会导致左西孟旦少量降解，从而使丙二腈的检测存在假阳性结果。液相色谱质谱联用仪不是常用仪器，价格高，大多数药厂无法配置该仪器，受仪器限制，无法推广。而且丙二腈在液相色谱质谱中无保留，死体积出峰，容易受样品溶解
的溶剂及合成工艺中残留溶剂的干扰，丙二腈分子量低，碎片质量低，质谱中检测稳定性差。
[0010]故需建立一种适用于左西孟旦的，专属的，准确的，灵敏的，且仪器设备条件易于实现的检测丙二腈的测定方法，以实现左西孟旦产品中丙二腈的有效控制。

技术实现思路

[0011]本专利技术解决了现有技术中存在的不足，提供了一种液相色谱法测定左西孟旦中丙二腈含量的方法，丙二腈的定量限可达0.02%，且可控制左西孟旦中残留量不得过0.1%，满足左西孟旦的质量控制需求，确保了制剂产品左西孟旦注射液的质量安全。
[0012]本专利技术提供了一种液相色谱法测定左西孟旦中丙二腈含量的方法，包括以下步骤：
[0013]（1）供试品溶液的配制：取左西孟旦适量，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成供试品溶液；
[0014]（2）对照品溶液的配制：取丙二腈适量，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成对照品溶液；
[0015]（3）衍生化：取对照品溶液和供试品溶液各适量，分别与衍生试剂溶液和反应介质溶液各适量混合，衍生化反应后用溶剂稀释成对照品溶液待测液和供试品溶液待测液；
[0016]（4）色谱实验：取对照品溶液待测液和供试品溶液待测液各适量，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。
[0017]其中， 步骤（3）中所述衍生试剂溶液为0.12g/ml对二甲氨基苯甲醛的无水乙醇溶液，反应介质溶液为0.77mg/ml醋酸铵溶液；衍生化反应条件为65~75℃水浴中加热25~35分钟，优选为70℃加热30分钟；衍生试剂与左西孟旦质量比为120:1以上，反应介质与左西孟旦质量比为0.2: 1以上；
[0018]步骤（1）~（3）所述溶剂为取无水乙醇与反应介质溶液混合，二者体积比为90:10；
[0019]步骤（4）中，所述液相色谱仪为反相高效液相色谱仪，具体色谱条件为：
[0020]检测器：紫外检测器；
[0021]色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，优选Inertsil ODS
‑
3, 4.6mm
×
250mm,5μm；
[0022]流动相：0.1%（ml/ml）磷酸溶液：乙腈=40~20:60~80，优选比例为30:70；
[0023]流速：1.0ml/min；
[0024]柱温：35℃；
[0025]检测波长：438nm；
[0026]进样量：对照品进样量不低于1ng，供试品进样量不低于1μg。
[0027]本专利技术提供了一种液相色谱法测定左西孟旦中丙二腈含量的方法，包括以下步骤：
[0028]（1）供试品溶液的配制：取左西孟旦适量，精密称定，加溶剂适量超声使溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；
[0029]（2）对照品溶液的配制：取丙二腈对照品适量，精密称定，加溶剂使溶解并定量稀释制成每1ml中约含1μg的溶液，作为对照品溶液；
[0030]（3）衍生化：精密量取对照品溶液和供试品溶液各1ml，分别置10ml量瓶中，各加衍生试剂溶液4ml，反应介质溶液3ml，摇匀，密塞，置70℃水浴中加热30分钟，放冷，再分别用溶剂稀释至刻度，摇匀，分别作为供试品溶液待测液和对照品溶液待测液；
[0031]（4）色谱实验：精密量取供试品溶液待测液和对照品溶液待测液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算；
[0032]其中， 步骤（3）中所述衍生试剂溶液为0.12g/ml对二甲氨基苯甲醛的无水乙醇溶液，反应介质溶液为0.77mg/ml醋酸铵溶液；
[0033]步骤（1）~（3）所述溶剂为取无水乙醇与反应介质溶液混合，二者体积比为90:10；
[0034]步骤（4）所述液相色谱条件为：
[0035]检测器：紫外检测器；
[0036]色谱柱： 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，优选Inertsil ODS
‑
3, 4.6mm
×
250mm,5μm；
[0037]流动相：0.1%（ml/ml）磷酸溶液：乙腈=30∶70；
[0038]流速：1.0ml/min；
[0039]柱温：35℃；
[0040]检测波长：438nm；
[0041]进样体积：10μl。
[0042]本专利技术的有益技术效果为：
[0043]（1）本专利技术用对二甲氨基苯甲醛为衍生试剂，以醋酸铵溶液作为反应介质，操作简单，反应完全，避免了气相色谱条件的假阳性结果，也不需要使用昂贵的不易获得的仪器设备。
[0044]（2）本专利技术通过色谱条件的筛选和优化，实现了丙二腈衍生产物峰与其他色谱峰的分离，避免了左西孟旦中其他杂质的干扰。
[0045]（3）本专利技术采用外标法进行左西孟旦中丙二本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种液相色谱法测定左西孟旦中丙二腈含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）供试品溶液的配制：取左西孟旦适量，加溶剂溶解并稀释制成供试品溶液；（2）对照品溶液的配制：取丙二腈适量，加溶剂溶解并稀释制成对照品溶液；（3）衍生化：取对照品溶液和供试品溶液各适量，分别与衍生试剂溶液和反应介质溶液各适量混合，衍生化反应后用溶剂稀释成对照品溶液待测液和供试品溶液待测液；（4）色谱实验：取对照品溶液待测液和供试品溶液待测液各适量，注入反相高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算；其中，步骤（4）中，色谱条件具体为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：磷酸溶液：乙腈=40~20:60~80。2.根据权利要求1所述的液相色谱法测定左西孟旦中丙二腈含量的方法，其特征在于，所述色谱条件还包括：检测器：紫外检测器；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：438nm；进样量：对照品进样量不低于1ng，供试品进样量不低于1μg。3.根据权利要求1所述的液相色谱法测定左西孟旦中丙二腈含量的方法，其特征在于，所述衍生试剂溶液为0.12g/ml对二甲氨基苯甲醛的无水乙醇溶液，反应介质溶液为0.77mg/ml醋酸铵...

【专利技术属性】
技术研发人员：房娟娟，蒲静，徐国芹，刘敏雪，陈晓荔，李英杰，朱官花，安雪，
申请(专利权)人：山东朗诺制药有限公司，
类型：发明
国别省市：