一种多靶点神经元保护剂在防治神经系统退行性疾病中的应用技术方案

本发明专利技术公开了一种多靶点神经元保护剂在防治神经系统退行性疾病尤其是阿尔茨海默病和帕金森病中的应用。本发明专利技术证实了来源于中药黄柏的去亚甲基小檗碱作为防治神经系统退行性疾病的重大潜力，首次公开了去亚甲基小檗碱可显著抑制乙酰胆碱酯酶活性以及对抗谷氨酸、H2O2和MPP

【技术实现步骤摘要】
一种多靶点神经元保护剂在防治神经系统退行性疾病中的应用


[0001]本专利技术涉及医药
，具体涉及一种多靶点神经元保护剂在防治神经系统退行性疾病中的应用。

技术介绍

[0002]神经系统退行性疾病是好发于老年人的退化性疾病，以阿尔茨海默病和帕金森病最为常见。阿尔茨海默病主要表现为学习记忆功能减退，而帕金森病则以肌肉僵直、震颤等为临床症状。
[0003]神经系统退行性疾病的发病机制非常复杂，但大多认为是多种基因突变和环境因素共同作用的结果。不论何种原因导致的神经系统退行性疾病，脑区功能性神经元死亡是最后的共同通路。其中大脑海马和皮层神经元(负责学习记忆的功能性神经元)的死亡是阿尔茨海默病的最重要病理学改变，而中脑黑质多巴胺能神经元(调控运动的功能性神经元)死亡是帕金森病的主要生物学变化。
[0004]目前临床治疗神经系统退行性疾病的药物旨在提高神经元突触内的神经递质水平，改善临床症状，如乙酰胆碱酯酶抑制剂(多奈哌齐、加兰他敏、利斯的明)可提高乙酰胆碱浓度，改善学习记忆功能，单胺氧化酶
‑
B抑制剂可防止多巴胺水解，提高多巴胺递质水平，改善帕金森样运动障碍。但这些药物无法挽救受损的神经元，故无法阻止或延缓疾病进程。因此，亟需开发既能提高神经递质水平(改善临床症状)，又具有神经保护作用的神经元保护剂，多靶点协同防治神经系统退行性疾病。
[0005]中药是我国的宝藏资源，也是新药开发的重要来源，高效低毒以及多靶点协同干预是天然中药的优势所在。去亚甲基小檗碱是一种从中药黄柏中分离提取得到的异喹啉生物碱，具有抗炎、抗肝纤维化、抗氧化等多种药理活性，但鲜有其防治神经系统退行性疾病的研究报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术目的在于提供去亚甲基小檗碱一类新的适应症。去亚甲基小檗碱可显著抑制乙酰胆碱酯酶活性和对抗谷氨酸、H2O2和MPP
+
诱发的神经毒性，可作为一种强效的神经元保护剂，为防治神经系统退行性疾病提供了一种新的备选药物。
[0007]本专利技术所采用的技术方案如下：
[0008]一种多靶点神经元保护剂，该多靶点神经元保护剂为去亚甲基小檗碱。
[0009]如上所述的多靶点神经元保护剂的应用，所述应用为在制备防治神经系统退行性疾病药物中的应用。
[0010]进一步地，所述多靶点神经元保护剂对神经系统退行性疾病的防治是通过抑制乙酰胆碱酯酶活性以及对抗谷氨酸、H2O2和MPP
+
诱发的神经毒性而发挥作用的。
[0011]进一步地，所述神经系统退行性疾病包括阿尔茨海默病和帕金森病。
[0012]本专利技术的有益效果在于：
[0013]本专利技术证实了来源于中药黄柏的去亚甲基小檗碱作为防治神经系统退行性疾病的重大潜力，首次公开了去亚甲基小檗碱可显著抑制乙酰胆碱酯酶活性以及对抗谷氨酸、H2O2和MPP
+
诱发的神经毒性，可发展成为既能提高神经递质水平，又能保护功能性神经元，延缓神经系统退行性疾病进程的候选药物，为防治神经系统退行性疾病提供了一种新的备选药物，扩展了去亚甲基小檗碱的适应症，极大地提高了去亚甲基小檗碱的应用潜力及市场前景。
附图说明
[0014]图1为去亚甲基小檗碱抑制乙酰胆碱酯酶活性试验结果图。
[0015]图2为去亚甲基小檗碱对抗谷氨酸在HT22海马神经元上诱导的神经毒性试验结果图。
[0016]图3为去亚甲基小檗碱对抗H2O2在HT22海马神经元上诱导的神经毒性试验结果图。
[0017]图4为去亚甲基小檗碱对抗MPP
+
在SN4741多巴胺能神经元上诱导的神经毒性试验结果图。
[0018]图5为去亚甲基小檗碱对SN4741多巴胺能神经元形态学变化的影响试验结果图。
具体实施方式
[0019]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步描述，但不限制本专利技术的保护范围和应用范围。
[0020]实施例1去亚甲基小檗碱显著抑制乙酰胆碱酯酶活性
[0021]1、实验材料
[0022]SD大鼠(广东省医学实验动物中心)、乙丙嗪(ethopropazine)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate，SDS)、5,5
’‑
二硫代
‑
双
‑
(2
‑
硝基苯甲酸)(DTNB)。
[0023]2、实验方法
[0024](1)胆碱酯酶提取：4％水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，断头，剥离大脑组织，液氮干燥，称重，按照0.1g/mL的比例加入裂解液(10mM HEPES，0.5％Triton X
‑
100，5mM EDTA，5mM EGTA，1M NaCl)，冰浴超声裂解5分钟，4℃，3000rpm，离心15分钟，留取上清(含胆碱酯酶)。
[0025](2)乙酰胆碱酯酶活性测定：在96孔培养板中，设置空白组、对照组和药物组。首先，在空白孔中加入溶液：0.5μL ethopropazine(终浓度：0.1mM)+84.5μLNa2HPO4(0.1M)+5μL裂解液；对照组和药物组中均加入溶液：0.5μL ethopropazine+84.5μLNa2HPO4+5μL胆碱酯酶粗酶，37℃孵育5分钟。然后，空白孔和对照孔中加入5μLH2O，药物孔中加入5μL去亚甲基小檗碱溶液，37℃孵育5分钟。接着，每孔中均加入5μL乙酰胆碱酯酶底物，37℃孵育30分钟。最后依次加入50μL 3％SDS溶液和50μL 0.2％DTNB溶液，412nm处检测吸光值。
[0026]3、实验结果
[0027]如图1所示，去亚甲基小檗碱可显著抑制乙酰胆碱酯酶活性，其半数抑制浓度IC
50
为16.23μM。
[0028]实施例2去亚甲基小檗碱对抗谷氨酸在HT22海马神经元上诱导的神经毒性，保护
海马神经元
[0029]1、实验材料
[0030]HT22海马神经元、DMEM培养基、胎牛血清、谷氨酸、乳酸脱氢酶检测试剂盒(Abcam公司，ab65391)。
[0031]2、实验方法
[0032]HT22海马神经元培养于含有10％胎牛血清的DMEM培养基中，以0.8
×
105细胞/mL的密度接种于96孔细胞培养板。贴壁后，设置对照组、模型组(谷氨酸)和给药组。给药组给予终浓度分别为1μM、10μM、100μM、200μM和300μM的去亚甲基小檗碱，预先孵育2小时，对照组和模型组给予相同体积的H2O。而后，模型组和给药组均给予终浓度为11mM的谷氨酸，对照组给予相同体积的H2O，24小时后，用乳酸脱氢酶试剂盒进行检测，于酶标仪(SpectraMax i3x,Molecular Devices)490nm处检测吸光度值，计算乳酸脱氢酶释放率。
[0033]3、实验结果
[0034]如图2所示，谷氨酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多靶点神经元保护剂，其特征在于，该多靶点神经元保护剂为去亚甲基小檗碱。2.如权利要求1所述的多靶点神经元保护剂的应用，其特征在于，所述应用为在制备防治神经系统退行性疾病药物中的应用。3.根据权利要求2所述的多靶点神经元保护剂的应用，其特征在于，所述多靶点神经元保...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴正治，胡胜全，李芷悦，刘展艳，李利民，李子雯，马玉翠，
申请(专利权)人：吴正治，
类型：发明
国别省市：