双特异性或多特异性抗体制造技术

本发明专利技术涉及一种新形式的双特异性或多特异性抗体，其包括其中CH3二聚体已被引入Fab区的一部分的多肽。新形式的双特异性或多特异性抗体尽管在重链和轻链之间几乎不表现出非特异性结合并且几乎不产生同源二聚体，但能够形成异源二聚体，并且因此可以通过动物细胞高度表达。另外，双特异性或多特异性抗体可以通过现有的单克隆抗体的纯化过程获得，并且具有等同于或高于单克隆抗体的稳定性。同于或高于单克隆抗体的稳定性。同于或高于单克隆抗体的稳定性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】双特异性或多特异性抗体


[0001]本专利技术涉及一种新型双特异性或多特异性抗体，并且涉及一种包括具有引入Fab区的一部分的CH3二聚体的多肽的双特异性或多特异性抗体。

技术介绍

[0002]由于最近已经确定了一种适应症的各种原因和机制，在治疗剂开发中出现了从一种类型的靶标到多种类型的靶标的方法。因此，在使用抗体的治疗剂的开发中，几十年来已经进行了各种研究，以将单特异性抗体的特征赋予能特异性结合两种或更多种抗原性蛋白质的双特异性或多特异性机制。
[0003]大多数生物抗体药物由单一靶抗体骨架诸如IgG1或IgG4组成。然而，由于多种靶标的机制作用于疾病，这种生物抗体药物作为针对单一靶标的抗体治疗剂具有诸如功效、便利性和副作用的局限性。
[0004]目前，各种临床阶段集中于两种单克隆抗体的联合疗法。因此，需要开发使一种蛋白质结合两种或更多种靶标的抗体。
[0005]在过去20年左右的时间里，已经发表了几篇与此相关的研究论文。目前，在临床阶段中，研究/开发了少量经许可的双特异性抗体和大量的候选材料，并且经许可的双特异性抗体的实例包括卡妥索单抗(Removab)、博纳吐单抗(Blincyto)(BiTE
TM
)和艾美赛珠单抗(Hemlibra)。
[0006]然而，仍然需要改进所开发的双靶或多靶抗体的产量、生产率、溶解性、聚集性和稳定性。
[0007]在这一技术背景下，作为开发新型双特异性或多特异性抗体的长期努力的结果，本专利技术人开发出了包括具有引入Fab区的CH3二聚体的多肽的双特异性或多特异性抗体。基于此，完成了本专利技术。

技术实现思路

[0008]技术问题
[0009]因此，鉴于上述问题完成了本专利技术，并且本专利技术的目的是提供新型双特异性或多特异性抗体平台。
[0010]技术方案
[0011]根据本专利技术的一个方面，上述和其他目的可以通过提供双特异性抗体来实现，该双特异性抗体包括与第一抗原结合且包括VH1
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CHa
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Fc1和VL1
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CLb的第一臂，以及与第二抗原结合且包括VH2
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CH1
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Fc2和VL2
‑
CL的第二臂，
[0012]其中，VH1和VH2各自是包括相同或不同抗原结合区的重链可变区，
[0013]VL1和VL2各自是包括相同或不同抗原结合区的轻链可变区，
[0014]CHa包括i)IgG重链恒定区或IgD重链恒定区CH1，和IgG重链恒定区CH2或CH3，或ii)IgM重链恒定区CH3，
[0015]CLb包括i)含有IgG轻链恒定区λ或κ的CL1，和选自由IgG重链恒定区CH1、CH2和CH3组成的组的至少一个，或ii)IgM重链恒定区CH3，
[0016]CHa和CLb相互连接形成二聚体，
[0017]CH1是IgG重链恒定区CH1，以及CL是IgG轻链恒定区CL，并且
[0018]第一臂的Fc1与第二臂的Fc2连接，以形成重链恒定区二聚体。
[0019]根据本专利技术的另一方面，提供双特异性抗体，该双特异性抗体包括与第一抗原结合且包括VH1
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CHa
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Fc1和VL1
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CLb的第一臂，以及与第二抗原结合且包括VH2
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CH1
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Fc2和VL2
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CL的第二臂，
[0020]其中，VH1和VH2各自是包括相同或不同抗原结合区的重链可变区，
[0021]VL1和VL2各自是包括相同或不同抗原结合区的轻链可变区，
[0022]CHa包括IgG重链恒定区CH3和IgG重链恒定区CH1，
[0023]CLb包括含有IgG轻链恒定区λ或κ的CL1，和含有IgG重链恒定区的CH3，
[0024]CHa和CLb相互连接形成二聚体，
[0025]CH1是IgG重链恒定区CH1，以及CL是IgG轻链恒定区CL，并且
[0026]第一臂的Fc1与第二臂的Fc2连接，以形成重链恒定区二聚体。
[0027]根据本专利技术的另一方面，提供了包括双特异性抗体的多特异性抗体。
附图说明
[0028]图1示出了第一双特异性抗体候选物的结构。
[0029]图2示出了第二双特异性抗体候选物的结构。
[0030]图3示出了第三双特异性抗体候选物的结构。
[0031]图4示出了第四双特异性抗体候选物的结构。
[0032]图5示出了第五双特异性抗体候选物的结构。
[0033]图6示出了第六双特异性抗体候选物的结构。
[0034]图7示出了第七双特异性抗体候选物的结构。
[0035]图8示出了结合三种靶标的多特异性抗体的结构。
[0036]图9示出了结合四种靶标的多特异性抗体的结构。
[0037]图10示出了示例性二价双特异性抗体形式。
[0038]图11是分别示出Q
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SBL1和R
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SBL1构建体的双特异性抗体形式的示意图。
[0039]图12A至12B是示出根据接头数量的Q
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SBL1(图12A)和R
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SBL1(图12B)的各种双特异性抗体形式的示意图。
[0040]图13A至13B是示出根据铰链区的Q
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SBL1(图13A)和R
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SBL1(图13B)的各种双特异性抗体形式的示意图。
[0041]图14是示出在杵(knob)
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CH3/臼(hole)
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CH3结构域互换时Q
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SBL1的各种双特异性抗体形式的示意图。
[0042]图15是示出每个Q
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SBL9的双特异性抗体形式的示意图。
[0043]图16示出了示例性三价双特异性抗体形式。
[0044]图17示出了示例性四价双特异性抗体形式。
[0045]图18示出了通过瞬时生产ExpiCHO
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S培养上清液获得的双特异性抗体候选物的非
还原SDS
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PAGE，其中，(A)是Q
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SBL
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1、2、3、4和R
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SBL
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1、2、3、4的SDS
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PAGE凝胶图像(S：大小标记(kDa)，泳道1：Q
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SBL
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2，泳道2：Q
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SBL
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1，泳道3：Q
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SBL
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3，泳道4：Q
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SBL
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4，泳道5：R
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SBL
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2，泳道6：R
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种双特异性抗体，包括：第一臂，所述第一臂结合第一抗原并包括VH1
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CHa
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Fc1和VL1
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CLb；和第二臂，所述第二臂结合第二抗原并包括VH2
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CH1
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Fc2和VL2
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CL，其中，所述VH1和所述VH2各自是包括相同或不同抗原结合区的重链可变区，所述VL1和VL2各自是包括相同或不同抗原结合区的轻链可变区，所述CHa包括i)IgG重链恒定区或IgD重链恒定区CH1，和IgG重链恒定区CH2或CH3，或ii)IgM重链恒定区CH3，所述CLb包括i)含有IgG轻链恒定区λ或κ的CL1，以及选自由IgG重链恒定区CH1、CH2和CH3组成的组的至少一个，或ii)IgM重链恒定区CH3，所述CH1是IgG重链恒定区CH1，以及CL是IgG轻链恒定区CL，并且所述第一臂的Fc1与所述第二臂的Fc2连接，以形成重链恒定区二聚体。2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，所述CHa和所述CLb衍生自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD或IgM。3.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，在所述第一臂中，所述CHa从N
‑
末端至C
‑
末端按顺序包括衍生自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD或IgM的重链恒定区CH1和衍生自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD或IgM的重链恒定区CH3。4.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，在所述第一臂中，所述CHa从所述N
‑
末端至所述C
‑
末端按顺序包括衍生自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD或IgM的重链恒定区CH3和衍生自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD或IgM的重链恒定区CH1。5.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，所述第一臂的所述CHa包括衍生自IgM的重链恒定区CH3。6.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，在所述第一臂中，所述CLb从所述N
‑
末端至所述C
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末端按顺序包括衍生自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD或IgM的轻链恒定区CL1和衍生自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD或IgM的重链恒定区CH3。7.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，在所述第一臂中，所述CLb从所述N
‑
末端至所述C
‑
末端按顺序包括衍生自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD或IgM的CH3和衍生自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD或IgM的CL1。8.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，在所述第一臂中，所述CLb包括衍生自IgM的重链恒定区CH3。9.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，所述CHa的CH1和所述CLb的CL1不用二硫键连接。10.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，所述CHa和所述CLb各自包括CH3，并且所述CH3通过二硫键形成二聚体。11.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，所述CHa和CLb各自包括CH3，并且通过键合CH3形成的二聚体中的一个包括选自由Y349C、S354C、T366S、T366W、L368A和Y407V组成的组的至少一个，以及包括选自由S354C、Y349C、T366W、T366S、L368A和Y407V组成的组的至少一个，以形成杵臼结构。12.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，所述CHa的CH1和所述CLb的CL1不用二硫键连接，并且i)所述CHa的CH3和所述CLb的CH3中的任何一个包括选自由Y349C、T366S、
L368A和Y407V组成的组的至少一个，以及另一个包括S354C和/或T366W，或者ii)所述CHa的CH3和所述CLb的CH3中的任何一个包括选自由S354C、T366S、L368A和Y407V组成的组的至少一个，以及另一个包括Y349C和/或T366W。13.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：李东宪，梁元准，金玎沅，丁愚锡，朴珠铉，文升兑，金智娜，李相浩，金美谦，宋泫炵，崔亨硕，
申请(专利权)人：三星生物株式会社，
类型：发明
国别省市：