一种狼疮抗凝物试剂的基液以及筛选确认试剂的制备方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，且公开了一种狼疮抗凝物试剂的基液以及筛选确认试剂的制备方法在基液和筛选确认试剂中均包20％甘氨酸、50mM

【技术实现步骤摘要】
M
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CaCl2)0.56％，甘露醇5％，BSA 1.5％，proclin
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300 0.5％，Tris 0.1％，余量为水。
[0011]优选的，所述狼疮抗凝物试剂的基液的PH值为6.11
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6.49之间。
[0012]本专利技术该提供了一种狼疮抗凝物试剂筛选确认试剂的制备方法，所述筛选确认试剂包括筛选试剂和确认试剂；
[0013]筛选试剂包括甘氨酸20％，氯化钙(25m M
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CaCl2)0.56％，甘露醇5％，BSA 1.5％，proclin
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300 0.5％，Tris 0.01％，RVV Factor X Activator凝血因子X激活剂(蝰蛇毒)0.9U/L，合成磷脂25mg/L,余量为水，下表为1L筛选试剂中各组分具体用量
[0014]序号材料名称用量1狼疮抗凝物的试剂基液1000ml22.5U/mlRVVFactorXActivator360ul325mg/ml合成磷脂混合物1ml
[0015]确认试剂包括甘氨酸20％，氯化钙(25m M
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CaCl2)0.56％，甘露醇5％，BSA 1.5％，proclin
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300 0.5％，Tris 0.01％，RVV Factor X Activator凝血因子X激活剂(蝰蛇毒)0.9U/L，合成磷脂25mg/L,余量为水，下表为1L确认试剂具体用量
[0016]序号材料名称用量1狼疮抗凝物的试剂基液1000ml22.5U/mlRVVFactorXActivator360ul325mg/ml合成磷脂混合物10ml
[0017]优选的，所述筛选试剂制备方法包括如下步骤：
[0018]步骤一，量取狼疮抗凝物基液500ml于烧杯中，加入2.5U/ml RVV Factor X Activator 180ul和25mg/ml合成磷脂混合物0.5ml，磁力搅拌器搅拌均匀，2～8℃静置过夜，待用。
[0019]步骤二，过夜后的筛选试剂混匀后，于室温下分装，每瓶2ml。
[0020]步骤三，分装好的筛选试剂冻干机冻干处理。
[0021]步骤四，冻干后的筛选试剂于2～8℃保存。
[0022]优选的，所述确认试剂制备方法包括如下步骤：
[0023]步骤一，量取狼疮抗凝物基液500ml于烧杯中，加入2.5U/ml RVV Factor X Activator 180ul和25mg/ml合成磷脂混合物5ml，磁力搅拌器搅拌均匀，待用。
[0024]步骤二，确认试剂混匀后，于室温下分装，每瓶2ml。
[0025]步骤三，分装好的确认试剂冻干机冻干处理。
[0026]步骤四，冻干后的确认试剂于2～8℃保存。
[0027]优选的，所述狼疮抗凝物筛选确认试剂中使用的合成磷脂混合物的来源没有生物活性，采用纯化学手段合成，所述合成磷脂混合物的比例是PE:PS:PC＝5:3:2。
[0028]优选的，所述合成磷脂的使用量在筛选试剂和确认试剂中的用量为1:10。
[0029]优选的，样本与筛选确认试剂的使用比例为1：1。
[0030]与现有技术相比，本专利技术提供了一种狼疮抗凝物试剂的基液以及筛选确认试剂的制备方法，具备以下有益效果：
[0031]1、本专利技术中筛选试剂或确认试剂中使用到的狼疮抗凝物的试剂基液成分简单，容易获取，稳定性强，易于保存，且配置成对应的筛选试剂或确认试剂的冻干品可以稳定存在
于2～8℃下2年。筛选试剂或确认试剂中使用到的基液一致，使得生产过程更加简单。
[0032]2、本专利技术使用到的磷脂为纯化学合成磷脂，不存在生物活性的来源，成分更加稳定，有效缩小批间差，瓶间差问题，有效保证了试剂的稳定性。
[0033]3、本专利技术检测时用到的试剂和样本的比例为1：1，更好的缓解了试剂与样本之间PH不统一的情况，反应时的PH值趋近于PH7.0的中性。
具体实施方式
[0034]下面对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0035]一种狼疮抗凝物试剂的基液，基液成分为甘氨酸20％，氯化钙(25mM
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CaCl2)0.56％，甘露醇5％，BSA 1.5％，proclin
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300 0.5％，Tris0.01％，余量为水。
[0036]配制1L狼疮抗凝物基液：
[0037]称取甘氨酸200g，氯化钙5.55g，甘露醇50g，BSA 15g，加入烧杯中，再加入1L纯化水，移液器吸取proclin
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300 5ml，1M Tris 0.8ml，充分搅拌均匀，PH6.45，备用。
[0038]配制100ml蛇毒稀释缓冲液：
[0039]S1，0.1M Tris配制：
[0040]使用电子天平称取1.2114g Tris(三羟甲基氨基甲烷)(分子量121.14)，超纯水定容至100mL即可。
[0041]S2，0.1M HCl配制：
[0042]使用1ml移液器量取0.867ml的浓盐酸(质量分数36％)加入超纯水定容至100ml即可。
[0043]S3，0.05M Tris
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HCl缓冲液配制：
[0044]取50ml 0.1mol/L Tris(三羟甲基氨基甲烷)溶液与44.7ml 0.1mol/L盐酸混匀后，加超纯水定容至100ml以配制PH7.20的溶液。
[0045]S4，2M NaOH配制：
[0046]称取8g NaOH(分子量40)，超纯水定容至100mL，混匀后备用。
[0047]S5，0.02M Tris
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HCl
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0.15M NaCl(pH 7.2)缓冲液配制：
[0048]量取40ml的0.05M Tris
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HCl缓冲液加入60ml纯净水混匀后即为100ml0.02M Tris
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HCl缓冲液，使用2M的NaOH调节PH值最终为PH7.2(注意调节使用的NaOH体积不能超过总体积的3％)，然后加入0.8775g NaCl混匀后备用。
[0049]配制2.5U RVV
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X蛇毒溶液：
[0050]吸取0.02M Tris
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HCl
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0.15M NaCl(pH 7.2)缓冲液2ml加入到RVV Factor X Activator 5U的西林瓶中颠倒混匀后备用。
[0051]配制25mg/ml合成磷脂混合物PE:PS:PC＝5:3:2混悬液：
[0052]吸取超纯水1ml到合成磷脂混合物PE:PS:PC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种狼疮抗凝物试剂的基液，其特征在于：基液由甘氨酸、氯化钙、甘露醇，BSA、proclin
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300、Tris(三羟甲基氨基甲烷)组成。2.根据权利要求1所述的一种狼疮抗凝物试剂的基液，其特征在于：所述狼疮抗凝物试剂的基液由下述原料制成：甘氨酸20％，氯化钙(50mM
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CaCl2)0.56％，甘露醇5％，BSA 1.5％，proclin
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300 0.5％，Tris0.01％，余量为水。3.根据权利要求1所述的一种狼疮抗凝物试剂的基液，其特征在于：所述狼疮抗凝物试剂的基液的PH值为6.11
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6.49之间。4.根据权利要求1所述的一种狼疮抗凝物试剂的基液，其特征在于：1L所述狼疮抗凝物试剂的基液中各组分量为：甘氨酸200g，氯化钙5.55g，甘露醇50g，BSA 15g，proclin
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300 5ml，1M Tris 0.8ml。5.一种狼疮抗凝物试剂筛选确认试剂的制备方法，包括狼疮抗凝物的试剂基液，其特征在于：所述筛选确认试剂包括筛选试剂和确认试剂；筛选试剂包括甘氨酸20％，氯化钙(50m M
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CaCl2)0.56％，甘露醇5％，BSA 1.5％，proclin
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300 0.5％，Tris 0.01％，RVV Factor X Activator凝血因子X激活剂(蝰蛇毒)0.9U/L，合成磷脂25mg/L,余量为水；确认试剂包括甘氨酸20％，氯化钙(50m M
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CaCl2)0.56％，甘露醇5％，BSA 1.5％，proclin
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300 0.5％，...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨军京，
申请(专利权)人：北京众驰伟业科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：