circCHPT1在制备非小细胞肺癌早期诊断或预后检测试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术发现非小细胞肺癌I期患者血液中circCHPT1显著增高；在50例肺癌组织中同样检测到其高表达，并与较差预后相关；在肺癌细胞中过表达circCHPT1促进细胞增殖和周期加速；Pull down实验显示其与MARK3结合并导致RAF1磷酸化，从而激活下游MAPK信号通路。本发明专利技术将有助于阐明肺癌恶性进展的机制，并将为肺癌提供潜在的无创性早诊标志物、肺癌预后判断标志物和治疗靶点分子，为临床开发新的早期预测试剂和治疗药物提供理论和实验依据。剂和治疗药物提供理论和实验依据。

【技术实现步骤摘要】
circCHPT1在制备非小细胞肺癌早期诊断或预后检测试剂盒中的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及circCHPT1在制备非小细胞肺癌早期诊断或预后检测试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]肺癌是全球常见恶性肿瘤，是世界范围中恶性肿瘤致死的主要原因之一。肺癌的早期诊断、预后判断和靶向治疗在其诊治中十分重要。
[0003]circRNA共价闭环结构缺乏自由5 '和3 '端，circRNA分子对外切酶Rnase R具有很强的抗性，比线性RNA更稳定。CircRNA在血浆中的平均半衰期超过48小时，而mRNA的半衰期平均为10小时，结构相对稳定。此外，环状RNA在癌组织和非癌组织中有差异表达,具有组织特异性和发育阶段特异性，其表达的差异模式可用于区分癌症类型或组织学亚型。环状RNA可在体液中检测到，如唾液或全血，外泌体中也有大量环状RNA环状RNA存在于体液的游离细胞中，如循环血细胞(血小板和红细胞)和CTC。有试验表明，来源于人类癌症的circRNA可以进入循环系统，利用血清中体外环状RNA能够区分健康对照组和结肠癌患者。Maass等人发现，在20个不同的组织中，血小板环状RNA的表达最高。某些环状RNA可以在癌患者液体活检中出现差异表达，如Li L. 等，在SCLC患者血清中纯化的外泌体中检测到了FECR1 circRNA，与正常健康献血者相比，SCLC患者血清
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FECR1表达异常升高，且与化疗后病情进展相关。肺癌中源于EML4
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ALK融合基因的内源性F
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circEA存在于具有EML4
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ALK变异体3b易位的H2228细胞，F
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circEA不仅存在于非小细胞肺癌组织中，也存在于EML
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ALK易位患者的血浆中。因此，基于circRNA的结构稳定及存在于体液中的特点，被认为是适合的无创诊断生物标志物。
[0004]除了作为诊断标志物之外，CircRNA以多种方式参与肿瘤的发生发展。作为miRNA海绵或竞争性内源性核糖核酸，与蛋白质相互作用，翻译成蛋白质/肽，调节可变剪接或转录。高表达的circRNA_02231与肺癌患者的晚期TNM分期、淋巴结转移和整体存活率差异显著相关，促进肺癌细胞增殖和侵袭能力。机制方面研究表明，CircRNA作为蛋白质诱饵，通过为特定蛋白质提供结合位点来吸附蛋白质，并通过作为竞争元件来调控蛋白质活性。Circ
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Foxo3主要位于细胞质中，它可以结合p21和CDK2，并通过circ
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Foxo3
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p21
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CDK2三元复合物的形成诱导细胞周期停滞；在另一研究中，乳腺癌中的circ
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Ccnb1通过结合Ccnb1/Cdk1复合物，抑制肿瘤侵袭和发展。circPABPN1结合HuR，减少PABPN1的翻译。circANRIL与PES1结合，抑制PES1介导的rRNA成熟。
[0005]现有技术中并未报到circCHPT1与非小细胞肺癌早期诊断和预后判断以及非小细胞肺癌治疗之间的关系。

技术实现思路

[0006]针对现有技术的不足，本专利技术的目的是研究circCHPT1，明确circCHPT1作为非小
细胞肺癌早期诊断和预后判断标志物，明确circCHPT1与非小细胞肺癌治疗药物的关系，并研究其机理。
[0007]本专利技术的技术方案是：本专利技术提供了circCHPT1的检测试剂在制备非小细胞肺癌早期诊断或预后判断检测试剂盒中的应用。
[0008]本专利技术提供了circCHPT1的检测试剂作为非小细胞肺癌的靶向治疗药物预后判断检测试剂盒中的应用。
[0009]本专利技术还提供了circCHPT1的抑制剂在制备非小细胞肺癌治疗药物中的应用。
[0010]进一步的，所述circCHPT1的抑制剂通过对MARK3
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RAF1
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MAPK信号通路的调控从而参与非小细胞肺癌的治疗。
[0011]进一步的，circCHPT1的序列为：GCACCATACTGGACATACCTTTTATGTGCACTGGGACTTTTTATTTACCAGTCACTGGATGCTATTGATGGGAAACAAGCCAGAAGAACAAACTCTTGTTCCCCTTTAGGGGAGCTCTTTGACCATGGCTGTGACTCTCTTTCCACAGTATTTATGGCAGTGGGAGCTTCAATTGCCGCTCGCTTAGGAACTTATCCTGACTGGTTTTTTTTCTGCTCTTTTATTGGGATGTTTGTGTTTTATTGCGCTCATTGGCAGACTTATGTTTCAGGCATGTTGAGATTTGGAAAAGTGGATGTAACTGAAATTCAGATAGCTTTAGTGATTGTCTTTGTGTTGTCTGCATTTGGAGGAGCAACAATGTGGGACTATACG（SEQ ID NO.1）。
[0012]进一步的，所述circCHPT1的抑制剂为si
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circCHPT1，si
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circCHPT1的具体序列为ATACGGCACCATACTGGACAT（SEQ ID NO.2）。
[0013]与现有技术相比，本专利技术的优势是：（1）本专利技术鉴定出新的NSCLC早期诊断和预后判断标志物：
①
肺癌早期诊断标志物：在本课题中，我们将收集30例肺部良性病变的病人和40例早期肺癌及60例中晚期肺癌病人的血样，全血抽提RNA进行RT
‑
PCR检测circCHPT1的表达水平，我们将首次鉴定出circCHPT1作为早期肺癌的无创性诊断标志物。
②
同样，我们将收集200例肺癌样本随机分为训练组和验证组，抽提细胞总RNA，以RT
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PCR检测circCHPT1的表达水平，结合临床和随访资料分析，明确circCHPT1作为肺癌病人预后判断的标志物。也就是，本专利技术公开了：circCHPT1的检测试剂可以用于制备非小细胞肺癌早期诊断试剂或预后检测试剂，可以用于检测试剂盒。
[0014]（2） 本专利技术首次阐明 circCHPT1在肺癌发展中的作用机制：提出circCHPT1结合MARK3促进RAF1上调及MAPK信号通路的激活。也就是，本专利技术公开了：circCHPT1的抑制剂可以用于制备非小细胞肺癌治疗药物。
[0015]以下结合附图和具体实施方式对本专利技术的详细结构作进一步描述。
附图说明
[0016]图1为筛选全血中的CircRNA 并验证目标 circRNA的图，其中A.非小细胞肺癌I期患者和健康人群血液采集后RNA提取及测序示意图；B. 聚类热图显示在非小细胞肺癌患者(C)与正常对照人群(N)中出现的差异表达circRNAs；C. 对50个非小细胞肺本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.circCHPT1的检测试剂在制备非小细胞肺癌早期诊断或预后检测试剂盒中的应用。2.circCHPT1的检测试剂作为非小细胞肺癌的靶向治疗药物预后检测试剂盒中的应用。3.circCHPT1的抑制剂在制备非小细胞肺癌治疗药物中的应用。4.根据权利要求3所述应用，其特征是，所述circCHPT1的抑制剂通过对MARK3
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RAF...

【专利技术属性】
技术研发人员：王睿琪，孙艺昊，董嘉媚，何鑫，杨海葵，宋梦姣，
申请(专利权)人：珠海市人民医院，
类型：发明
国别省市：