【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种基因重组人铁蛋白轻链的制备方法，其特征在于包括以下步骤： （１）采用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人血细胞中获得人铁蛋白轻链基因片段； （２）将步骤（１）中ＰＣＲ获得的人铁蛋白轻链基因片段亚克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上，转化感受态Ｔｏｐ１０细菌，然后接种于含氨苄青霉素的ＬＢ培养基，筛选阳性克隆菌株，提取阳性克隆菌株的质粒ｐＧＥＭ－Ｔ／ｆｅｒｒｉｔｉｎ Ｌ，并进行测序鉴定； （３）以步骤（２）中的质粒ｐＧＥＭ－Ｔ／ＦＴＬ为模板，进行ＰＣＲ扩增，然后对扩增产物进行双酶切，同时将空质粒ｐＥＴ－３０ａ进行双酶切，分别回收并纯化酶切产物，用Ｔ４连接酶连接，获得表达载体，转化感受态大肠杆菌，然后接种于含卡那霉素的ＬＢ培养基，筛选阳性克隆菌株，提取阳性克隆菌株的表达质粒ｐＥＴ－３０ａ／ｆｅｒｒｉｔｉｎ Ｌ，并进行测序鉴定； （４）用ＩＰＴＧ诱导蛋白表达，纯化铁蛋白轻链。
【技术特征摘要】
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