肽类化合物simplicilliumtideB在制备抗肿瘤药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了肽类化合物simplicilliumtide B在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明专利技术从海洋珊瑚共附生真菌Simplicillium sp.SCSIO41209的发酵培养物中分离得到如式(Ⅰ)所示的化合物simplicilliumtide B。本发明专利技术证明，化合物simplicilliumtide B对PD

【技术实现步骤摘要】
肽类化合物simplicilliumtide B在制备抗肿瘤药物中的应用


[0001]本专利技术属于天然药物
，具体涉及肽类化合物simplicilliumtide B在制备抗肿瘤药物中的应用。

技术介绍

[0002]程序性细胞死亡受体1(programmed cell death 1，PD
‑
1)属于第二代免疫检查点蛋白，在T细胞、B细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞和肿瘤相关巨噬细胞等多种免疫细胞中均会表达，在肿瘤的发展过程中，肿瘤细胞会刺激T细胞，引起机体产生免疫反应，从而被T细胞的免疫监视功能消除。但是如果肿瘤细胞上的程序性细胞死亡配体1(PD
‑
L1)与T细胞上的PD
‑
1结合,引起PD
‑
1结构中免疫受体酪氨酸抑制基序和免疫受体酪氨酸开关基序发生磷酸化，从而引起一系列反应，最终抑制了T细胞活化、增殖、存活，从而使肿瘤细胞逃脱了免疫系统的监控。因此研究PD
‑
1或者PD
‑
L1的抑制剂，通过阻断PD
‑
1与PD
‑
L1的相互作用，重新激活T细胞识别肿瘤抗原，从而在癌症的治疗中发挥作用。

技术实现思路

[0003]本专利技术的第一个目的是提供肽类化合物simplicilliumtide B或其药用盐在制备抗肿瘤药物中的应用，所述的化合物simplicilliumtide B的结构式如式(Ⅰ)所示：
[0004][0005]进一步的，所述的抗肿瘤药物为PD
‑
1抑制剂。
[0006]进一步的，所述的化合物simplicilliumtide B是从海洋珊瑚共附生真菌Simplicillium sp.SCSIO41209的发酵培养物中分离获得的。具体制备步骤如下：制备海洋珊瑚共附生真菌Simplicillium sp.SCSIO41209的发酵培养物，将发酵培养物用丙酮浸泡提取，乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩后得到提取物，提取物经硅胶柱层析和半制备HPLC纯化后，得到化合物simplicilliumtide B。
[0007]所述的发酵培养物是通过以下方法制备：将真菌Simplicillium sp.SCSIO41209接入种子培养基中，振荡培养，获得种子发酵液，将种子发酵液再接种到大米培养基中，静态发酵获得发酵培养物。
[0008]所述的种子培养基的配方为：麦芽浸膏15g，精海盐2.5g，蒸馏水1000mL，pH 7.4
‑
7.8；所述的大米培养基的配方为：大米200g，精海盐3g，蒸馏水200mL。
[0009]本专利技术的第二个目的是提供一种抗肿瘤药物，包含如式(Ⅰ)所示的化合物simplicilliumtide B或其药用盐作为活性成分。
[0010]优选的，所述的抗肿瘤药物还包含药学上可以接受的辅料或载体。优选的，所述的抗肿瘤药物为PD
‑
1抑制剂。
[0011]本专利技术具有以下有益效果：
[0012]本专利技术从一株海洋珊瑚共附生真菌Simplicillium sp.SCSIO41209的发酵培养物中分离获得的一个肽类化合物simplicilliumtide B，该该化合物对PD
‑
1具有显著的抑制活性，为开发新的抗肿瘤药物提供了备选化合物，对开发中国海洋药用微生物资源具有重要的意义。
[0013]本专利技术的海洋珊瑚共附生真菌Simplicillium sp.SCSIO41209于2023年3月22日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，邮编：510070，保藏编号：GDMCC No：63288。
具体实施方式
[0014]以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制。
[0015]实施例1:化合物simplicilliumtide B的制备和结构鉴定
[0016]一、化合物simplicilliumtide B的制备
[0017]1.微生物培养条件：
[0018]将海洋珊瑚共附生真菌Simplicillium sp.SCSIO41209接入到含有10mL种子培养基的三角瓶(100mL)中，25℃，178rpm摇床震荡培养3d获得种子液，将10mL种子液分别转接于装有大米培养基的锥形瓶(1000mL)中，自然光照下，于25℃静止培养60d，共发酵30瓶，获得真菌Simplicillium sp.SCSIO41209的发酵产物。所述的种子培养基为MB培养基，其配方为：麦芽浸膏15g，精海盐2.5g，蒸馏水1000mL，pH 7.4
‑
7.8，配制步骤为：将各成分溶于水，搅拌混匀，调节pH，灭菌即得。大米培养基的配方为：大米200g，精海盐3g，蒸馏水200mL，配制步骤为：将各成分与水混合，搅拌混匀，灭菌即得。
[0019]2.提取分离：
[0020]发酵完毕后大米发酵产物用两倍体积丙酮浸泡2天，然后将大米捣碎，超声15分钟，用8层纱布进行减压过滤，滤液减压浓缩以除去丙酮。然后再用两倍体积乙酸乙酯萃取3次，浓缩后得到乙酸乙酯相粗浸膏。滤渣继续用乙酸乙酯提取3遍，浓缩后合并以上乙酸乙酯部分得总粗浸膏(56.0g)。将总粗浸膏采用中压色谱进行分离，用100～200目硅胶拌样，流动相为石油醚：乙酸乙酯(V:V＝100:0～1:1，流速50mL
·
min
‑1)梯度洗脱得到第一部分馏分，再用石油醚：乙酸乙酯：甲醇(V:V:V＝20:20:1～0:0:100，流速50mL
·
min
‑1)梯度洗脱得到第二部分馏分。两部分馏分通过薄层色谱法(TLC)检识合并得26个馏分。其中Fr.20(石油醚：乙酸乙酯＝1:1～2:1洗脱馏分)经反相中压色谱(ODS)(V
MeOH
:V
H2O
＝20:80～100:0，流速30mL
·
min
‑1)梯度洗脱得17个子馏分，子馏分Fr.20
‑
14(甲醇：水＝55:45～70:30洗脱馏分)经半制备液相(V
MeOH
:V
H2O
＝60:40，流速3.0mL
·
min
‑1)洗脱得到化合物simplicilliumtide B(8.4mg，t
R
＝44min)，使用YMC ODS半制备柱(YMC
‑
Pack ODS
‑
A,250
×
10mm I.D.,S
‑
5μm,12nm)，柱温27℃条件制备。
[0021]二、化合物的结构鉴定
[0022]化合物simplicilliumtide B为淡黄色粉末，能溶于甲醇、氯仿等有机溶剂。1H
‑
NMR和
13
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.如式(Ⅰ)所示的化合物simplicilliumtide B或其药用盐在制备抗肿瘤药物中的应用；2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物为PD
‑
1抑制剂。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的化合物simplicilliumtide B是从海洋珊瑚共附生真菌Simplicillium sp.SCSIO41209的发酵培养物中分离获得的。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的化合物simplicilliumtide B的制备步骤具体为：制备海洋珊瑚共附生真菌Simplicillium sp.SCSIO41209的发酵培养物，将发酵培养物用丙酮浸泡提取，乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩后得到提取物，提取物经硅胶柱层析和半制备HPLC纯化后，得到化合物simplicilliumtide B。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的发酵培养物是通过以下方法制备：将真菌Simplici...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨斌，周雪峰，刘永宏，庞小艳，林秀萍，廖升荣，王俊锋，
申请(专利权)人：中国科学院南海海洋研究所，
类型：发明
国别省市：