一种基于HPLC-Q-TOF-MS和网络药理学分析田基黄治疗急性胰腺炎药效成分的方法技术

本发明专利技术公开了基于HPLC

【技术实现步骤摘要】
一种基于HPLC
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Q
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TOF
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MS和网络药理学分析田基黄治疗急性胰腺炎药效成分的方法


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种基于HPLC
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Q
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TOF
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MS和网络药理学分析田基黄治疗急性胰腺炎药效成分的方法。

技术介绍

[0002]急性胰腺炎是一种消化系统疾病，胰酶在胰腺内被激活，引起炎性因子释放，导致从局部到全身的炎症反应。临床主要症状包括胰腺水肿、继发性感染、出血坏死、腹膜炎和多器官衰竭等,其中20％～25％的病人病情严重，出现局部或全身并发症，多器官功能衰竭，甚至危及生命。发生急性胰腺炎时，白细胞过度激活发生呼吸爆发,产生氧自由基。过多的氧自由基还可使腺泡细胞破坏,引起胰酶的细胞外和细胞内激活，导致胰腺损伤的一系列恶性循环。目前临床上用于治疗急性胰腺炎的药物，包括人工合成的八肽环状化合物奥曲肽、蛋白酶抑制剂乌司他丁以及奥美拉唑注射液。奥曲肽能够减轻胰腺组织损害，而乌司他丁不仅能够抑制胰蛋白酶和糖类水解酶，还具有抑制炎症因子和内源休克因子生成的作用。除此之外中西药联用，例如大承气汤或血必净联合丙氨酰谷氨酰胺也有一定的疗效。
[0003]随着中药在临床应用的广泛推广，已经取得了在急性胰腺炎治疗中显著的疗效。中药所含有的一种或多种化学成分群，可以从多个靶点、多个角度、全方位来治疗急性胰腺炎。不同的活性成分群对急性胰腺炎的作用各有所侧重，包括阻断炎性反应、改善胰腺分泌功能、调节免疫炎症反应、有效清除氧自由基，减轻氧化应激反应等作用。因此，从中药中挖掘具有治疗急性胰腺炎活性化学成分是非常必要的。田基黄(Hypericum japonicum Thunb.ex Murray)为藤黄科金丝桃属植物地耳草的全草，为一年生草本植物。其性味甘、苦、凉，气味微香；归肺、肝、胃经，主要功效有清热解毒、活血消肿、利湿退黄、散瘀止痛。
[0004]网络药理学通过构建“药物
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疾病
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靶点”网络，为药物与疾病之间的关系提供了整体视角。由于其对于中药所具有的“多成分、多靶点、多途径”特征具有整体性、系统性的可视化，因此它已经在预测中药中潜在活性成分以及研究其对特定疾病靶点的作用机制方面得到广泛应用。
[0005]而目前的文献报道中，未有田基黄能治疗急性胰腺炎，且使用网络药理学方法研究田基黄中治疗急性胰腺炎的有效成分的方法。本专利技术采用高效液相色谱
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四级杆飞行时间串联质谱(HPLC
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Q
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TOF
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MS/MS)分析鉴定田基黄的化学成分，利用网络药理学探讨田基黄治疗急性胰腺炎的作用机制，并用急性胰腺炎大鼠模型初步验证网络药理学结果，旨在阐明田基黄治疗急性胰腺炎的药效物质基础，为新药研发提供理论依据。并对后续田基黄药材的开发和临床应用提供一定的参考和借鉴意义。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是确定一种基于HPLC
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Q
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TOF
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MS和网络药理学分析田基黄治疗急性胰腺炎药效成分的方法，得到田基黄治疗急性胰腺炎的有效成分、关键靶点和富集显著性
高的通路。
[0007]本专利技术的技术方案：一种基于HPLC
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Q
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TOF
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MS和网络药理学分析田基黄治疗急性胰腺炎药效成分的方法，所述分析方法是采用HPLC
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Q
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TOF
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MS/MS分析技术，通过精确质量数、二级质谱数据、质谱裂解规律和数据库生成化学成分的分子网络，再用网络药理学相关数据库，获得急性胰腺炎疾病相关靶点，构建“成分
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疾病
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靶点”网络图，构建蛋白相互作用网络，再进行GO功能与KEGG通路富集分析。
[0008]前述基于HPLC
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Q
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TOF
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MS和网络药理学分析田基黄治疗急性胰腺炎药效成分的方法，所述方法按照以下步骤进行：
[0009](1)田基黄提取物的制备:称取田基黄药材350
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400g，粉碎，加入70
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90％乙醇1.8
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2.5L，加热回流提取3
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5次，每次1.5
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2.5h，合并提取液，减压回收溶剂，得到田基黄提取物，放入
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20℃冰箱保存，备用；
[0010](2)HPLC
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Q
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TOF
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MS/MS分析：将色谱峰的保留时间、高分辨质谱数据以及多级质谱数据通过与GNPS的谱库数据比对，通过精确质量数、二级质谱数据、质谱裂解规律和数据库生成化学成分的分子网络，得到田基黄提取物化学成分的结构信息；
[0011]HPLC色谱条件：色谱柱为WatersXSelectCSH
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C18，150
×
4.6mm,2.5μm；流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为乙腈；进行梯度洗脱；流速为0.4mL/min，柱温为35℃，进样量为2μL，分流比为1:4；
[0012]质谱条件：ESI离子源正、负离子模式；干燥气温度350℃；干燥气流速10L/min；雾化气45psig；鞘气温度350℃；鞘气流速10L/min；毛细管电压4000V；裂解电压180V；锥孔电压65V；质量扫描范围：100～2000Da；
[0013](3)田基黄活性化学成分靶点的筛选：将HPLC
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Q
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TOF
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MS/MS分析鉴定的田基黄提取物化学成分的结构信息，输入TCMSP数据库、SwissTargetPrediction数据库和UniProt数据库对合并的靶点进行校正，剔除非人源基因，得到田基黄化学成分的作用靶点；
[0014](4)急性胰腺炎相关疾病靶点筛选：通过OMIM、DrugBank和GeneCards三个数据库，以Acute pancreatitis为关键词获取急性胰腺炎疾病靶点，用Venny2.1在线分析工具，将所述急性胰腺炎疾病靶点与步骤(3)中的田基黄化学成分的作用靶点做交集处理，得到田基黄提取物治疗急性胰腺炎的潜在靶点，即得潜在靶点；
[0015](5)构建“成分
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疾病
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靶点”网络图：将步骤(4)中的潜在靶点用SwissTargetPrediction数据库预测靶点信息，删除重复数据后导入Cytoscape软件，构建“化合物
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疾病
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靶点”网络，得到10个关键化学成分；
[0016](6)蛋白相互作用网络的构建：将步骤(4)中的潜在靶点基因导入STRING数据库，选择“multipl本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于HPLC
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Q
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TOF
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MS和网络药理学分析田基黄治疗急性胰腺炎药效成分的方法，其特征在于：所述分析方法是采用HPLC
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Q
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TOF
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MS/MS分析技术，通过精确质量数、二级质谱数据、质谱裂解规律和数据库生成化学成分的质谱分子网络，再用网络药理学相关数据库，获得急性胰腺炎疾病相关靶点，构建“成分
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疾病
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靶点”网络图，构建蛋白相互作用网络，再进行GO功能与KEGG通路富集分析。2.如权利要求1所述基于HPLC
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Q
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TOF
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MS和网络药理学分析田基黄治疗急性胰腺炎药效成分的方法，其特征在于：所述方法按照以下步骤进行：（1）田基黄提取物的制备:称取田基黄药材350
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400 g，粉碎，加入70
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90%乙醇1.8
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2.5L，加热回流提取3
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5次，每次1.5
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2.5h，合并提取液，减压回收溶剂，得到田基黄提取物，放入
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20℃冰箱保存，备用；（2）HPLC
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Q
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TOF
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MS/MS分析：将色谱峰的保留时间、高分辨质谱数据以及多级质谱数据通过与GNPS的谱库数据比对，通过精确质量数、二级质谱数据、质谱裂解规律和数据库生成化学成分的分子网络，得到田基黄提取物化学成分的结构信息；HPLC色谱条件：色谱柱为Waters XSelect CSH
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C18，150
ꢀ×ꢀ
4.6 mm, 2.5 μm；流动相A 为0.1% 甲酸水溶液，流动相B为乙腈；进行梯度洗脱；流速为0.4 mL/min，柱温为35 ℃，进样量为2 μL，分流比为1: 4；质谱条件：ESI离子源正、负离子模式；干燥气温度350℃；干燥气流速10 L/min；雾化气45 psig；鞘气温度350℃；鞘气流速10 L/min；毛细管电压4000 V；裂解电压180 V；锥孔电压65 V；质量扫描范围：100~2000 Da；（3）田基黄活性化学成分靶点的筛选：将HPLC
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Q
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TOF
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MS/MS分析鉴定的田基黄提取物化学成分的结构信息，输入TCMSP数据库、SwissTargetPrediction数据库和UniProt数据库对合并的靶点进行校正，剔除非人源基因，得到田基黄化学成分的作用靶点；（4）急性胰腺炎相关疾病靶点筛选：通过OMIM、DrugBank和GeneCards三个数据库，以Acute pancreatitis为关键词获取急性胰腺炎疾病靶点，用Venny2.1在线分析工具，将所述急性胰腺炎疾病靶点与步骤（3）中的田基黄化学成分的作用靶点做交集处理，得到田基黄提取物治疗急性胰腺炎的潜在靶点，即得潜在靶点；（5）构建“成分
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疾病
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靶点”网络图：将步骤（4）中的潜在靶点用SwissTargetPrediction数据库预测靶点信息，删除重复数据后导入Cytosca...

【专利技术属性】
技术研发人员：任强，
申请(专利权)人：济宁医学院，
类型：发明
国别省市：