一种金荞麦黑粉菌休眠孢子的诱导萌发培养基及其制备方法和诱导萌发方法技术

本发明专利技术公开了一种金荞麦黑粉菌休眠孢子的诱导萌发培养基及其制备方法和应用，属于农作物病害休眠孢子高效诱导萌发技术领域。所述诱导萌发培养基包含金荞麦茎叶水和PSA培养基，本发明专利技术针对金荞麦黑粉菌休眠孢子萌发困难的技术瓶颈，充分利用黑粉菌专性寄生特性，在PSA培养基的基础上加入寄主植物茎叶成分，优化诱导培养基组成，显著提高了金荞麦黑粉菌休眠孢子萌发率。本方法易操作、高效率，为开展金荞麦黑粉病相关研究提供了基础保障，同时也为其他作物黑粉病菌休眠孢子的诱导萌发提供新思路。思路。

【技术实现步骤摘要】
一种金荞麦黑粉菌休眠孢子的诱导萌发培养基及其制备方法和诱导萌发方法


[0001]本专利技术涉及农作物病害休眠孢子高效诱导萌发
，特别是涉及一种金荞麦黑粉菌休眠孢子的诱导萌发培养基及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]金荞麦(Fagopyrum cymosum)为蓼科荞麦属多年生草本植物，又名野荞麦、荞麦三七、赤地利、金锁开银等，因其金黄色的根而得名“金荞”，是我国传统的中药材，其种子、根、茎、叶均可入药，主要分布在我国西南地区。金荞麦的籽粒中含有人体必需的8种氨基酸及多种微量元素和维生素(如铜、硒、锌、铁、维生素E等)，还含有芦丁等生物类黄酮，可以增加血管的抵抗力，对毛细血管的脆性和通透性有减弱的作用，对脑血管、贫血等症状也可以起到一定的积极作用，以金荞麦籽粒为原料研制开发的营养保健品有金荞麦茶、金荞麦挂面、金荞麦蛋糕和土司面包等。金荞麦种子是繁殖和遗传育种的重要材料，对于金荞麦维持物种基因多样性及进化、繁衍后代和广泛传播具有重要意义。
[0003]金荞麦黑粉病是由黑粉菌引起的一种系统性侵染真菌病害，主要危害花序，花未开放即被侵染，花瓣不能正常生长，子房肿胀膨大，呈圆柱形或卵球形，表面组织逐渐变褐、变枯，形成菌瘿。随着病情发展，菌瘿顶端产生破口，释放黑粉菌孢子，最后剩下由真菌不育细胞组成的中轴，不能结出种子，给遗传育种工作造成严重影响。
[0004]黑粉菌休眠孢子的诱导萌发，是黑粉病病原菌种类鉴定(柯赫氏法则)、致病力测定、寄主植物鉴别等工作的重要环节。文献显示，诱导黑粉菌休眠孢子萌发的常用培养基有PSA、PDA和水琼脂培养基，黑粉菌是一类引起多种症状并形成成堆黑色孢子的专性寄生菌，有50多个属950余种，科研过程中，对休眠孢子萌发的方法和处理温度不尽相同。金荞麦黑粉病是一种新病害，相关研究文献报道缺乏，为有效开展金荞麦黑粉病病害研究提供基础性技术保障，探索建立高效诱导休眠孢子萌发方法尤为迫切。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种金荞麦黑粉菌休眠孢子的诱导萌发培养基及其制备方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0007]本专利技术提供一种金荞麦黑粉菌休眠孢子的诱导萌发培养基，所述诱导萌发培养基包含金荞麦茎叶水和PSA培养基。
[0008]本专利技术还提供所述诱导萌发培养基的制备方法，将金荞麦茎叶剪碎、加水煮沸，过滤得到茎叶水，加入PSA培养基，高温灭菌后冷却即可。
[0009]优选的是，所述金荞麦茎叶与水的质量比为1:10。
[0010]优选的是，所述茎叶水与PSA培养基的体积比为1:2。
[0011]本专利技术还提供一种金荞麦黑粉菌休眠孢子的诱导萌发方法，将金荞麦黑粉菌的菌
源母液接种于所述的诱导萌发培养基中进行诱导萌发。
[0012]优选的是，所述菌源母液的制备方法为：对饱满、未破裂的金荞麦黑粉菌菌瘿进行消毒、清洗、风干，捣碎后加无菌水培养。
[0013]优选的是，所述无菌水培养的条件为：每60个金荞麦黑粉菌菌瘿加入20mL无菌水进行培养，培养条件为：20℃培养24h。
[0014]优选的是，所述消毒为分别用升汞和75％酒精各表面消毒2min。
[0015]优选的是，所述诱导萌发的培养条件为：每4
‑
5mL诱导萌发培养基接种200μL菌源母液，于20℃培养24h。
[0016]基于上述技术方案，本专利技术公开了以下技术效果：
[0017]本专利技术针对金荞麦黑粉菌休眠孢子萌发困难的技术瓶颈，充分利用黑粉菌专性寄生特性，在PSA培养基的基础上加入寄主植物茎叶成分，优化诱导培养基组成，显著提高了金荞麦黑粉菌休眠孢子萌发率。本方法易操作、高效率，为开展金荞麦黑粉病相关研究提供了基础保障，同时也为其他作物黑粉病菌休眠孢子的诱导萌发提供新思路。
具体实施方式
[0018]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，实施例中方法如无特殊说明均采用常规方法，使用试剂如无特殊说明，均为常规市售试剂或采用常规方法配置的试剂。该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0019]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0020]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
[0021]在不背离本专利技术的范围或精神的情况下，可对本专利技术说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本专利技术的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本专利技术说明书和实施例仅是示例性的。
[0022]关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
[0023]本专利技术所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规方案，所用试剂或原料，如未特别说明，均购自商业渠道或是已公开。
[0024]实施例1
[0025]1.培养基种类及制备：
[0026]1.1PSA培养基：马铃薯200g，琼脂20g，蔗糖20g，蒸馏水定容1000mL；
[0027]1.2茎叶水+PSA培养基：取50克金荞麦茎叶剪碎，加自来水500mL煮沸5分钟，过滤除去杂质后，用自来水补足至500mL，加1000mL PSA培养基高温灭菌，冷却，制备成1.5L的培养基备用；
[0028]1.3花水+PSA培养基：取50克金荞麦花序剪碎，加自来水500mL煮沸5分钟，过滤除去杂质后，用自来水补足至500mL，加1000mL PSA培养基高温灭菌，冷却，制备成1.5L的培养基备用；
[0029]1.4茎叶水培养液：取50克金荞麦茎叶剪碎，加自来水500mL煮沸5分钟，过滤除去杂质后，用自来水补足至500mL高温灭菌备用；
[0030]1.5无菌水(CK)：取自来水500mL高温灭菌备用。
[0031]2.试验菌源母液的制备：
[0032]选取60个饱满、未破裂的黑粉菌菌瘿，分别用升汞和75％酒精各表面消毒2分钟，然后无菌水清洗3次自然风干。将处理好的菌瘿于消毒灭菌的培养皿(φ90mm)中捣碎，除去菌瘿杂质后加入20mL无菌水，摇匀后盖上培养皿盖，于20℃培养箱中培养24h后备用。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种金荞麦黑粉菌休眠孢子的诱导萌发培养基，其特征在于，所述诱导萌发培养基包含金荞麦茎叶水和PSA培养基。2.如权利要求1所述诱导萌发培养基的制备方法，其特征在于，将金荞麦茎叶剪碎、加水煮沸，过滤得到茎叶水，加入PSA培养基，冷却即可。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述金荞麦茎叶与水的质量比为1:10。4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述茎叶水与PSA培养基的体积比为1:2。5.一种金荞麦黑粉菌休眠孢子的诱导萌发方法，其特征在于，将金荞麦黑粉菌的菌源母液接种于权利要求1所述的诱导萌发培养基中进行诱导萌发。6.根据权利要求5所述的诱导萌发方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙道旺，王莉花，尹桂芳，卢文洁，隆文杰，李程鹏，
申请(专利权)人：云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所，
类型：发明
国别省市：