一种检测西洋参花中皂苷类化学成分的方法及其在西洋参花皂苷鉴定中的应用技术

本发明专利技术关于中药成分分析鉴定技术领域，尤其涉及一种检测西洋参花中皂苷类化学成分的方法及其在西洋参花皂苷鉴定中的应用。本发明专利技术基于超高效液相色谱/离子淌度四极杆飞行时间质谱联用技术，构建了迭代排除列表数据依赖采集质谱方法，能够大幅提升鉴定的覆盖度，为西洋参花中皂苷类化学成分深入分析表征提供了一种高效、快速、准确的分析鉴定方法，可对西洋参花和含有西洋参花的保健品进行西洋参花的表征与鉴定，为西洋参花的化学物质基础和药效活性成分研究提供理论依据和技术参考，有利于西洋参花的后续开发和利用。西洋参花的后续开发和利用。西洋参花的后续开发和利用。

【技术实现步骤摘要】
一种检测西洋参花中皂苷类化学成分的方法及其在西洋参花皂苷鉴定中的应用


[0001]本专利技术关于中药成分分析鉴定
，尤其涉及一种检测西洋参花中皂苷类化学成分的方法及其在西洋参花皂苷鉴定中的应用。

技术介绍

[0002]西洋参花为五加科人参属植物西洋参(Panax quinquefolium L
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)地上部分的干燥花蕾。目前国内外对西洋参的研究主要集中于药用部位根部，对其地上部分花、茎叶及果实的研究报道相对较少。但花蕾作为植物营养成分的重要贮存器官，也含有丰富的皂苷类等成分，且近年来由于其大补元气、安神益智等功效被广泛用于保健品。为阐明其活性成分，证明其药理作用，对其化学物质进行基础研究非常有必要。
[0003]液质联用技术已被广泛应用于中药化学成分分析。二级或者多级质谱信息的采集方式，主要包括数据依赖采集(DDA)与数据非依赖采集(DIA)。DDA得到的谱图准确度高、易于解析，但面对复杂成分时往往覆盖度低；而DIA理论上能够采集所有母离子的裂解信息，但需要对母离子
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子离子进行匹配，会引入一些假阳性结果。

技术实现思路

[0004]针对以上技术问题，本专利技术提供一种检测西洋参花中皂苷类化学成分的方法及其在西洋参花皂苷鉴定中的应用，本专利技术方法的构建基于超高效液相色谱/质谱以及迭代排除列表数据依赖采集模式(EL
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HDDDA)，能够实现西洋参花中多种微量皂苷成分的表征，可为其他人参属药材的分析鉴定提供参考。
[0005]为达到上述专利技术目的，本专利技术实施例采用了如下的技术方案：
[0006]一种检测西洋参花中皂苷类化学成分的方法，具体包括以下步骤：
[0007]S1、用甲醇水溶液对待测样品进行提取，得待测溶液；
[0008]S2、用超高效液相色谱/质谱联用分析方法对所述待测溶液进行检测，用高分辨数据依赖采集(HDDDA)方法采集离子的一级二级信息，并构建离子排除列表；
[0009]S3、用包含S2所得排除列表的HDDDA方法采集所述待测溶液的一级二级质谱信息，进行UNIFI处理后将所筛选的一级母离子质荷比和保留时间信息增添至排除列表，重复操作直至获得采集低丰度离子的二级信息。
[0010]该方法用HDDDA方法采集同一样品，UNIFI处理后增添排除列表，方法更新后重复采集同一样品，此时添加至排除列表的母离子将不再重复采集二级信息，最终经迭代排除后得以采集低丰度或一级响应不在前5强离子的二级信息，从而采集到更多有效的二级信息用于化合物的鉴定。
[0011]优选地，S1中所述甲醇水溶液的浓度为60％～80％v/v。可选70％v/v。
[0012]可选地，S1中提取的方法为超声提取，超声时间可选为1h左右，以确保化合物的充分提取。
[0013]结合第一方面，所述超高效液相色谱的色谱条件为：
[0014]色谱柱：极性修饰十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
[0015]流动相A为0.095％～0.105％v/v甲酸水溶液，流动相B为0.095％～0.105％v/v甲酸乙腈溶液，进行线性梯度洗脱，所述线性梯度洗脱的程序如下：
[0016][0017][0018]流速：0.28～0.32mL/min；
[0019]柱温：25～35℃。
[0020]在本专利技术所采用的色谱柱、流动相、线性洗脱程序、柱温等条件下，色谱峰分离效果好，检测离子数多，色谱峰形良好。
[0021]以上线性梯度洗脱程序中，如果不同时间后流动相B的体积百分比有变化，则表示流动相在该时间段内是线性变化的，如，0min流动相B的比例为15％，2min流动相B的比例为20％，表示流动相B在0min至2min从15％线性增加到20％。4min与8min的流动相比例相同，表示这个时间段内流动相比例不变。
[0022]优选地，所述色谱柱为CSH C18。在本专利技术的色谱条件下，采用该色谱柱检测的离子数最多、保留效果最强且峰形及分离效果均较好。
[0023]优选地，所述柱温为30℃。在本专利技术的色谱条件下，柱温30℃时色谱峰分离效果、检测离子数、色谱峰形的综合结果更好。
[0024]优选地，所述流速为0.3ml/min。
[0025]优选地，所述甲酸水溶液中的甲酸浓度为0.1％v/v。
[0026]优选地，所述甲酸乙腈溶液中的甲酸浓度为0.1％v/v。
[0027]结合第一方面，所述质谱采用离子淌度四极杆飞行时间质谱。
[0028]优选地，所述质谱的质谱条件包括：离子源为电喷雾离子源，在负离子模式下采集
数据；所述离子源的参数为：毛细管电压1.5kV；锥孔电压40V；离子源温度120℃；脱溶剂气体温度500℃；脱溶剂气体流速(N2)800L/h；锥形气流速(N2)50L/h；MS1碰撞能量为6eV；HDDDA二级参数设置中MS2质量依赖梯度裂解能量为30/50
–
50/70eV，触发二级采集的母离子强度阈值为500计数，TOP N值设为5，即采集一级响应前5强离子的二级信息。
[0029]优选地，所述质谱的质谱条件还包括：质谱扫描范围m/z 250
–
1500，每0.3s扫描一次；停止二级采集的时间(timeout)为1.2s；质量误差为80.00mDa，碰撞截面积误差为
[0030]优选地，所述质谱的质谱条件还包括：数据采集过程中连续注入外部校正液，用于进行负离子模式下质量数的精准校正。外部校正液可采用浓度为200pg/μL的LockSpray TM
，以10μL/min的流速连续不断地注入，用于进行负离子模式下质量数(m/z 554.2620)的精准校正。
[0031]结合第一方面，S3的具体操作包括：
[0032]第一步、用HDDDA方法采集60％～80％v/v甲醇水溶液进行UNIFI处理后筛选响应值大于500的离子并去重复，得到第一部分离子质量数及对应的保留时间列表，将其添加至排除列表中，更新采集方法；
[0033]第二步、在包含第一步所得排除列表的HDDDA方法上继续采集同一待测溶液数据，结合数据库进行UNIFI处理，将与数据库匹配的离子筛选出来，去掉重复质量数，得到第二部分离子质量数及对应的保留时间列表，继续添加至排除列表中，更新采集方法；重复三次，并在第一次和第二次中分别筛出未匹配列表中响应值大于10000和大于5000的离子。
[0034]以及，本专利技术还提供上述检测西洋参花中皂苷类化学成分的方法在西洋参花皂苷表征与鉴定中的应用。上述方法灵敏度高、分辨率高、准确性高、重现性好、分析时间短，能够鉴定出西洋参花中大量的皂苷类化学成分，可对西洋参花和含有西洋参花的保健品进行西洋参花的表征与鉴定。
[0035]本专利技术的有益效果在于：本专利技术基于超高效液相色谱/离子淌度四极杆飞行时间质谱联用技术(UHPLC/IM
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QTOF
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MS)，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测西洋参花中皂苷类化学成分的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：S1、用甲醇水溶液对待测样品进行提取，得待测溶液；S2、用超高效液相色谱/质谱联用分析方法对所述待测溶液进行检测，用高分辨数据依赖采集方法采集离子的一级二级信息，并构建离子排除列表；S3、用包含S2所得排除列表的高分辨数据依赖采集方法采集所述待测溶液的一级二级质谱信息，进行UNIFI处理后将所筛选的一级母离子质荷比和保留时间信息增添至排除列表，重复操作直至获得采集低丰度离子的二级信息。2.根据权利要求1所述的检测西洋参花中皂苷类化学成分的方法，其特征在于，S1中所述甲醇水溶液的浓度为60％～80％v/v。3.根据权利要求1所述的检测西洋参花中皂苷类化学成分的方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的色谱条件为：色谱柱：极性修饰十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相A为0.095％～0.105％v/v甲酸水溶液，流动相B为0.095％～0.105％v/v甲酸乙腈溶液，进行线性梯度洗脱，所述线性梯度洗脱的程序如下：腈溶液，进行线性梯度洗脱，所述线性梯度洗脱的程序如下：流速：0.28～0.32mL/min；柱温：25～35℃。4.根据权利要求1所述的检测西洋参花中皂苷类化学成分的方法，其特征在于，所述色谱柱为CSH C18；和/或所述柱温为30℃；和/或所述流速为0.3ml/min；和/或所述甲酸水溶液中的甲酸浓度为0.1％v/v；和/或
所述甲酸乙腈溶液中的甲酸浓度为0.1％v/v。5.根据权利要求1所述的检测西洋参花中皂苷类化学成分的方法，其特征在于，所述质谱采用离子淌度四极杆飞行时间质谱。6.根据权利要求5所述的检测西洋参花中皂苷类化学成分的方法，其特征在于，所述质谱的质谱条件包括：离子源为电喷雾离子源，在负离子模式下采集数据...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨文志，李雪，孙梦晓，胡莹，王洪达，荆绮，李晓航，徐晓艳，
申请(专利权)人：天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：