基于外泌体突触核蛋白的帕金森病早期诊断系统技术方案

本发明专利技术公开了一种基于外泌体突触核蛋白的帕金森病早期诊断系统。本发明专利技术发现，在对患者的实验中，发现与健康对照组比较，血浆总外泌体中的α

【技术实现步骤摘要】
基于外泌体突触核蛋白的帕金森病早期诊断系统
专利

[0001]本专利技术涉及分子生物学技术的应用领域，具体涉及一种基于外泌体的帕金森病早期诊断标志物及其应用。
[0002]专利技术背景
[0003]帕金森病(Parkinson
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s Disease,PD)是全球第二大常见中枢神经系统退行性疾病，其核心病理过程是错误折叠的α
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突触核蛋白(α
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synuclein或简称为α
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Syn)在中脑黑质致密部多巴胺能神经元沉积和神经元变性丢失造成运动功能障碍。目前PD的诊断主要基于临床医生对于临床症状的经验性判断，而大多数患者在诊断PD时中脑多巴胺神经元就已损失50％以上。因此，准确有效的早期预测系统对于预防PD起病、延缓疾病进展尤为必要。然而，PD的隐匿性发作使早期诊断变得困难。
[0004]外泌体是一种由多种细胞分泌的脂质双层膜囊泡，直径在40
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100nm之间。在外泌体中包含RNA和丰富的蛋白质，在细胞间信息交流过程中发挥着重要作用。研究表明外泌体中的蛋白在血液中比较稳定，其作为临床诊断标志物的潜力很大，也是众多疾病诊断研究的热点和突破口。
[0005]近年来研究发现，α
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突触核蛋白在PD进展过程中可通过外泌体作为载体在细胞间传播，并可向细胞外分泌。中枢神经元分泌的外泌体可通过循环系统进入血液并在外周血中检测。这种分泌的活动在PD运动症状出现之前就开始出现了。因此外周血外泌体α
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突触核蛋白含量是可能的PD早期诊断标志物。
[0006]快动眼睡眠障碍(rapid eye movement sleep behavior disorder，RBD)被广泛认为是PD的前驱期疾病，随着年龄的增长有80％的可能转变为PD。但是目前RBD的诊断有赖于多导睡眠监测，费时费力且漏诊率高，在临床上很难将其与其他睡眠问题区分开。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种基于外泌体的帕金森病早期诊断标志物，所述的生物标记物为α
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突触核蛋白，磷酸化α
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突触核蛋白及α
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突触核蛋白寡聚体。
[0008]本专利技术的另一个目的是提供所述生物标记物在制备PD早期诊断试剂盒中的应用。所述试剂盒包括总外泌体提取试剂EXOQ(SBI(System Biosciences))，中枢来源外泌体分离试剂(包括抗体亲和磁珠，L1CAM(L1 cell adhesion molecule)抗体和抗体洗脱试剂)和α
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突触核蛋白检测试剂(包括α
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突触核蛋白抗体，α
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突触核蛋白标准品，激发液和发光液)。本试剂盒还应包括实验中用到的样品稀释液和清洗液等试剂和耗材。
[0009]以α
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突触核蛋白为标志物的试剂盒可用于帕金森病及帕金森病前驱期的诊断、快动眼睡眠障碍的诊断、帕金森病疾病进展预测等用途，或其他用途。
[0010]本专利技术分离了人血浆中的总外泌体和中枢来源外泌体并检测其中α
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突触核蛋白含量，使PD出现临床症状前对其做出诊断成为可能。
[0011]本专利技术公开了一种基于外泌体突触核蛋白的帕金森病早期诊断系统。本系统包括外泌体提取、外泌体中α
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突触核蛋白(α
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synuclein)的检测和早期诊断三个过程。外泌体提
取包括从血液样品中提取总外泌体和中枢来源外泌体；外泌体中α
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突触核蛋白检测使用α
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突触核蛋白抗体、应用化学发光免疫分析技术、酶联免疫吸附测定技术(ELISA)及其他免疫相关的检测方法定量计算外泌体中α
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突触核蛋白的含量；早期诊断过程通过将受试者样品中的α
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突触核蛋白含量与健康人群作比较，若α
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突触核蛋白含量升高，则表明处于帕金森病前驱期阶段。在对患者的实验中，发现与健康对照组比较，血浆总外泌体中的α
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突触核蛋白含量在RBD患者中轻度升高，在PD患者中显著升高，血浆中枢来源外泌体中α
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突触核蛋白含量在RBD和PD中均显著升高，具有早期诊断价值。血浆总外泌体中的α
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突触核蛋白含量随疾病进展而升高，具有预测疾病进展价值。
[0012]因此，在一方面，本专利技术提供一种基于外泌体突触核蛋白的帕金森病早期诊断系统，其特征在于，通过检测样品中血液来源外泌体中α
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突触核蛋白含量，实现帕金森病的早期诊断，所使用的检测试剂包括总外泌体提取试剂，中枢来源外泌体分离试剂和α
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突触核蛋白含量检测试剂。
[0013]在一个实施方案中，检测样品包括受试者的血清或血浆。
[0014]在另一个实施方案中，检测包括提取外泌体，所提取的外泌体包括外周血来源的总外泌体和中枢来源外泌体。
[0015]在又一个实施方案中，检测包括检测α
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突触核蛋白、磷酸化α
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突触核蛋白和α
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突触核蛋白寡聚体。
[0016]在另一个实施方案中，检测所使用的检测方法包括化学发光免疫分析技术、酶联免疫吸附测定技术(ELISA)以及其他免疫相关的检测方法。
[0017]在又一个实施方案中，检测所使用的检测试剂包含α
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突触核蛋白抗体，所述α
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突触核蛋白包括单体、寡聚体和磷酸化抗体。
[0018]在另一个实施方案中，本专利技术的系统用于帕金森病早期诊断和/或帕金森病前驱期诊断，任选地，用于鉴别快动眼睡眠障碍患者和/或帕金森病高风险人群。
[0019]在另一方面，本专利技术提供检测外泌体中α
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突触核蛋白含量的试剂在制备用于诊断早期帕金森病的系统中的用途。
[0020]在一个实施方案中，诊断包括通过将受试者样品中的α
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突触核蛋白含量与健康人群作比较，若α
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突触核蛋白含量升高，则表明受试者处于帕金森病前驱期阶段。
[0021]在又一方面，本专利技术提供检测外泌体中α
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突触核蛋白含量的试剂在制备用于鉴别快动眼睡眠障碍患者和/或帕金森病高风险人群的系统中的用途。
[0022]在一个实施方案中，检测外泌体中α
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突触核蛋白含量的试剂包括总外泌体提取试剂、中枢来源外泌体分离试剂和α
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突触核蛋白含量检测试剂。
[0023]在另一方面，本专利技术提供一种生物标记物，其中所述生物标记物选自包括α
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突触核蛋白，磷酸化α
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突触核蛋白及α
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突触核蛋白寡聚体的组，并且所述生物标记物用于基于外泌体早期诊断帕金森病。
[0024]在又一方面，本专利技术提供生物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于外泌体突触核蛋白的帕金森病早期诊断系统，其特征在于，通过检测样品中血液来源外泌体中α
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突触核蛋白含量，实现帕金森病的早期诊断，所使用的检测试剂包括总外泌体提取试剂、中枢来源外泌体分离试剂和α
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突触核蛋白含量检测试剂。2.根据权利要求1所述的帕金森病早期诊断系统，其特征在于，所检测的样品包括受试者的血清或血浆。3.根据权利要求1或2所述的帕金森病早期诊断系统，其特征在于，所述检测包括提取外泌体，所提取的外泌体包括外周血来源的总外泌体和中枢来源外泌体。4.根据权利要求1或2所述的帕金森病早期诊断系统，其特征在于，所述检测包括检测α
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突触核蛋白、磷酸化α
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突触核蛋白和α
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突触核蛋白寡聚体。5.根据权利要求1或2所述的帕金森病早期诊断系统，其特征在于，所述检测所使用的检测方法包括化学发光免疫分析技术、酶联免疫吸附测定技术以及其他免疫相关的检测方法。6.根据权利要求1或2所述的帕金森病早期诊断系统，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：张宝荣，浦佳丽，颜轶群，张燚，张立莹，温轶，郑冉，胡柳，
申请(专利权)人：浙江养生堂天然药物研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：