一种具有促进创伤愈合作用的鹿茸多肽制造技术

本发明专利技术提供一种具有促进创伤愈合作用的鹿茸多肽，是将鹿茸粉碎加水匀浆制成匀浆液，然后将匀浆液调节pH值为6.0～7.5，再加入蛋白酶进行酶解，获得的酶解液进行离心，取上层酶解液经过超滤膜，截取3kDa分子量以下的酶解液，再采用Sephadex G25进行纯化，得到鹿茸多肽。本发明专利技术提供的鹿茸多肽提取物在促进伤口愈合及皮肤修护方面功效显著。可诱导创伤部位产生蛋白肽Pro

【技术实现步骤摘要】
一种具有促进创伤愈合作用的鹿茸多肽


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种具有促进创伤愈合作用的鹿茸多肽，及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]柳叶刀杂志统计数据显示，全球每年大约开展的各类型手术达2.34亿例。在发达国家，1％～2％的人群面临着皮肤创伤问题，仅在美国，每年大约有50万烧伤患者住院。目前我国就慢性伤口而言，患者数就高达1,300万。典型的慢性伤口主要由糖尿病、下肢静脉溃疡及造口等疾病诱发。其中，糖尿病足的典型特征为局部皮肤及深层组织破坏，伴随着伤口溃烂并反复发作，约20％的糖尿病患者甚至面临着截肢风险，因此，安全、高效的创伤修复产品具有极大的市场需求。
[0003]皮肤损伤的愈合是包括细胞、体液和分子机制在内的一个动态的、可高度调控的过程，伤口愈合过程分为四期:凝血期、炎症期、修复期、成熟期；涉及免疫细胞、角质形成细胞、成纤维细胞、毛囊干细胞等，各种细胞功能异常或修复细胞数量不足常常导致伤口延迟愈合或慢性伤口。目前市面促进伤口愈合药物和保健品都是根据伤口愈合四个时期来设计，不能同时兼顾多个时期共同发挥作用。
[0004]鹿茸中粗蛋白含量占干重的60％以上，特别是胶原蛋白、IGF
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1、EGF和NGF等含量丰富，具有显著促进骨骼发育、免疫调节、促进表皮细胞增殖、神经再生等生物活性。相较于鹿茸蛋白，鹿茸活性肽具有组织透过性好、免疫原性弱等优点，而且由于其分子小可以直接作用于关键位点，对于皮肤损伤有显著治疗作用，开发潜力较大。研究表明使用鹿茸多肽对大鼠皮肤创伤分别采用单纯注射、单纯外用、肌肉注射与外用协同的方式处理后发现，无论注射还是外用，鹿茸多肽都有显著促进创面愈合的能力，验证了鹿茸多肽的促进创伤愈合的能力。因此，以鹿茸粗蛋白制备多肽在食品和医疗领域中受到人们的认可。然而，针对鹿茸多天活性的而研究多为抗氧化、骨愈合活性，而制备具有促进伤口愈合活性的多肽的方法鲜有报道，因此，确定一种具有促进伤口愈合活性的鹿茸多肽的制备方法是行业发展的攻坚方向。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种具有促进创伤愈合作用的鹿茸多肽，及其制备方法和应用，所提供的鹿茸多具有伤口修复的效果，其主要治疗作用包括抗炎、调节细胞因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕生成等活性。
[0006]本专利技术所提供的鹿茸多肽，其制备方法如下：
[0007]将鹿茸粉碎加水匀浆制成匀浆液，然后将匀浆液调节pH值为6.0～7.5，再加入蛋白酶进行酶解，获得的酶解液进行离心，取上层酶解液经过超滤膜，截取3kDa分子量以下的酶解液，再采用Sephadex G25进行纯化，得到鹿茸多肽。
[0008]所述的匀浆制成匀浆液，其一种具体条件是采用高速剪切匀浆，剪切速度为8000
‑
10000rpm，剪切时间为60
‑
90s。
[0009]所述的酶解，是采用胰蛋白酶和中性蛋白酶对匀浆液进行酶解；
[0010]作为实施例的一种具体记载，所述的酶解，是在50℃酶解5h；
[0011]更进一步的，所述的鹿茸多肽中，其一种多肽的氨基酸序列为
[0012]GGYDESMPDPLPEFTE(SEQ ID NO:1)。
[0013]本专利技术制得的促进伤口愈合的鹿茸多肽，其多肽分子量主要在500
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2000Da之间，由脯氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、谷氨酸、缬氨酸组成，能有效提高伤口愈合速度、及伤口处炎症因子及胶原蛋白分泌。
[0014]本专利技术再一个方面还保护所提供的鹿茸多肽在制备皮肤浅皮层或皮肤真皮层损伤修复相关的药物、保健品、化妆品中的应用。
[0015]本专利技术还提供一种药物组合物，其包含有所述的鹿茸多肽以及药学上可接受的辅料。
[0016]本专利技术的药物组合物可以制成本领域常规剂型，包括但不限于口服地散剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、可分散粉末、水性或有幸混悬剂、水性或油性溶液剂、乳剂、糖浆剂等，适用于局部使用的霜剂、软膏剂、凝胶、水性或油性溶液剂、水性或油性混悬剂等。
[0017]本专利技术提供的鹿茸多肽提取物在促进伤口愈合及皮肤修护方面功效显著。可诱导创伤部位产生蛋白肽Pro
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Hyp，以及多种炎性细胞因子，促进伤口处胶原合成，预防瘢痕生成，具有免疫调节以及促表皮再上皮化等多重功效，快速形成封闭空间，防止伤口感染。
附图说明
[0018]图1：伤口皮肤组织HE染色照片图。
具体实施方式
[0019]在前期实验中，直接使用鹿茸粉具有一定促进伤口愈合的作用，但但使用量较大，因此采用本专利技术分离纯化鹿茸粉，得到效果更优的鹿茸多肽提取物，用于皮肤修护，可以更快的使伤口愈合，从而减少伤口感染的几率。
[0020]下面结合实施例对本专利技术进行详细的描述。
[0021]实施例1：鹿茸多肽提取物制备
[0022]取1kg鹿茸剁成小块，粉碎，过100目筛，按重量比1:10加入蒸馏水，采用高速剪切匀浆，剪切速度为8000
‑
10000rpm，剪切时间为60
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90s，剪切3次打碎鹿茸使得细胞内容物流出。调节pH 6.8，加入胰蛋白酶：中性蛋白酶，质量比为1:1，蛋白酶添加量为5％；在50℃酶解5h，酶解结束后于沸水浴(90℃)灭酶10min，冷却，8000rpm离心10min，将上层酶解液经过超滤膜，截取3kDa分子量以下酶解液，减压浓缩，冻干。
[0023]取鹿茸蛋白酶解产物用蒸馏水溶解至100mg/mL溶液，Sephadex G25凝胶色谱柱层析，2.0cm
×
100cm进行分离纯化，流动相为蒸馏水，洗脱速度为0.5mL/min，收集洗脱组分。将上述洗脱液进行真空浓缩后，再进行冷冻干燥，从而得到具有促进伤口愈合功效的鹿茸多肽，得到鹿茸多肽提取物0.11kg，得率为11％。
[0024]采用凝胶渗透色谱法检测多肽相对分子量分布，鹿茸多肽分子量小于2000Da的多肽占92％，分布在500
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2000Da之间。采用全自动氨基酸分析仪对鹿茸多肽氨基酸组成进行
测定。结果显示，鹿茸多肽包含有脯氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、谷氨酸和缬氨酸。
[0025]实施例2：鹿茸多肽提取物制备
[0026]取5kg鹿茸剁成小块，粉碎，过100目筛，按重量比1:10加入蒸馏水，采用高速剪切匀浆，剪切速度为8000
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10000rpm，剪切时间为60
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90s，剪切3次打碎鹿茸使得细胞内容物流出。调节pH 6.8，加入胰蛋白酶：中性蛋白酶1:1(含量为5％)在50℃酶解5h，酶解结束后于沸水浴(90℃)灭酶10min，冷却，8000rpm离心10min，将上层酶解液经过超滤膜，截取3kDa分子量以下酶解液，减压浓缩，冻干。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鹿茸多肽，其特征在于，所述的鹿茸多肽，其制备方法如下：将鹿茸粉碎加水匀浆制成匀浆液，然后将匀浆液调节pH值为6.0～7.5，再加入蛋白酶进行酶解，获得的酶解液进行离心，取上层酶解液经过超滤膜，截取3kDa分子量以下的酶解液，再采用Sephadex G25进行纯化，得到鹿茸多肽。2.如权利要求1所述的鹿茸多肽，其特征在于，所述的匀浆制成匀浆液，是采用高速剪切匀浆，剪切速度为8000
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10000rpm，剪切时间为60
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90s。3.如权利要求1所述的鹿茸多肽，其特征在于，所述的酶解，是采用胰蛋白酶和中性蛋白酶对匀浆液进行酶解。4.如权利要求3所述的鹿茸多肽，其特征在于，所述胰蛋白酶和中...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晗，裴栋，刘建飞，邸多隆，
申请(专利权)人：中国科学院兰州化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：