一种幽门螺旋杆菌试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种幽门螺旋杆菌试纸条及其制备方法，包括PVC底板和顺次在PVC底板上粘连的样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，所述结合垫上喷涂有被胶体金偶联标记的幽门螺旋杆菌包被抗体，所述偶联标记的幽门螺旋杆菌包被抗体的浓度为0.03

【技术实现步骤摘要】
一种幽门螺旋杆菌试纸条及其制备方法


[0001]本专利技术涉及免疫层析检测
，具体涉及一种幽门螺旋杆菌试纸条制备方法。

技术介绍

[0002]幽门螺旋杆菌可导致胃癌且具有传染性、感染率高等特性，使得其作为一种大众的常见病，影响着多数人的胃部健康，因此建立起幽门螺旋杆菌的快速检测方法显得尤为重要。基于传统胶体金的制备方法往往耗时久且偶联时容易聚沉，使得实验进度慢且易失败。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种幽门螺旋杆菌试纸条制备方法，以解决上述
技术介绍
中提出的现有的问题。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种幽门螺旋杆菌试纸条，包括PVC底板和顺次在PVC底板上粘连的样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，所述结合垫上喷涂有被胶体金偶联标记的幽门螺旋杆菌包被抗体，所述偶联标记的幽门螺旋杆菌包被抗体的浓度为0.03
‑
0.1mg/ml；
[0005]所述胶体金的发射波长为500
‑
550nm，粒径为10
‑
50nm；
[0006]所述反应膜上喷涂有检测线和质控线，其中检测线为T线，质控线为C线；所述检测线上喷涂有包被幽门螺旋杆菌的捕获抗体溶液，所述质控线上喷涂有羊抗鼠IgG抗体溶液。
[0007]优选的，所述反应膜为结合聚合物的硝酸纤维素膜，所述PVC底板的宽度为0.3
‑
0.5cm。
[0008]优选的，所述样品垫与结合垫部分重合，且样品垫与结合垫的重合部分长度为0.2
‑
0.4cm；
[0009]所述结合垫与反应膜部分重合，且结合垫与反应膜重合部长度为0.2
‑
0.4cm；
[0010]所述反应膜与吸水垫部分重合，且反应膜与吸水垫重合部分长度为0.2
‑
0.4cm。
[0011]本专利技术还公开了一种幽门螺旋杆菌试纸条的制备方法，经过胶体金的制备、负载有胶体金的偶联物溶液的制备和整体的制备，完成幽门螺旋杆菌试纸条的制备；具体步骤如下：
[0012](Ⅰ)胶体金的制备：
[0013]a.配备5％的柠檬酸钠溶液；
[0014]b.将25μl20％四氯金酸水合物加入100μl超纯水里，加热至沸腾后，向其中加入900μl配置好的柠檬酸钠水溶液，持续加热直至变红后继续加热10min，得到胶体金；
[0015](Ⅱ)负载有胶体金的偶联物溶液的制备：取100μL20倍浓缩的胶体金溶液，加入1μl幽门螺旋杆菌抗体，摇匀，再加入1μl10％牛血清白蛋白溶液，摇匀，得到混合溶液A，按1：6.5的比例将混合溶液A加入到丁醇中进行脱水，取出丁醇，加100μl超纯水，离心，再经过
1％PBS缓冲溶液和1％牛血清白蛋白溶液洗涤一次，最后取出混合溶液A，最终重悬在100μlElutionBuffer中，得到负载有胶体金的偶联物溶液，并将其置于4℃下避光保存，备用；
[0016](Ⅲ)整体的制备：
[0017](A)将包被幽门螺旋杆菌的捕获抗体与0.1Mol的PBS缓冲液混合得到2mg/mL的包被幽门螺旋杆菌的捕获抗体溶液，并将该溶液喷涂在反应膜的检测线上，形成检测区；
[0018](B)将羊抗鼠IgG抗体与0.1Mol的PBS缓冲液混合得到2mg/mL的羊抗鼠IgG抗体溶液；并将该溶液喷涂在反应膜的质控线上，形成质控区；
[0019](C)将负载有胶体金的偶联物溶液喷涂在结合垫上，烘干，备用；
[0020](D)在PVC底板上依次固定样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，即完成了幽门螺旋杆菌试纸条的制备。
[0021]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术可以直接用于检测幽门螺旋杆菌，相较于现有的通过PCR检测的技术，能够有效的缩短检测时间，且检测成本低，操作便捷度高；同时，本申请利用胶体金进行标记，利用丁醇进行脱水，该方法能够大幅度提高偶联的时间，比传统的吸附法更加的稳定，不易聚沉。
附图说明
[0022]图1为本专利技术的整体结构示意图；
[0023]图2为本专利技术的检测原理图；
[0024]图3为本专利技术的检测效果图。
具体实施方式
[0025]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0026]如图1
‑
3所示，本专利技术公开了一种幽门螺旋杆菌试纸条及其制备方法。
[0027]一种幽门螺旋杆菌试纸条，包括PVC底板和顺次在PVC底板4上粘连的样品垫1、结合垫3、反应膜2和吸水垫5，所述结合垫3上喷涂有被胶体金偶联标记的幽门螺旋杆菌包被抗体，所述偶联标记的幽门螺旋杆菌包被抗体的浓度为0.03
‑
0.1mg/ml；
[0028]可行的，所述胶体金的发射波长为500
‑
550nm，粒径为10
‑
50nm；
[0029]可行的，所述反应膜2上喷涂有检测线和质控线，其中检测线为T线，质控线为C线；所述检测线上喷涂有包被幽门螺旋杆菌的捕获抗体溶液，所述质控线上喷涂有羊抗鼠IgG抗体溶液。
[0030]可行的，所述反应膜2为结合聚合物的硝酸纤维素膜，所述PVC底板4的宽度为0.3
‑
0.5cm。
[0031]可行的，所述样品垫1与结合垫3部分重合，且样品垫1与结合垫3的重合部分长度为0.2
‑
0.4cm；所述结合垫3与反应膜2部分重合，且结合垫3与反应膜2重合部长度为0.2
‑
0.4cm；所述反应膜2与吸水垫5部分重合，且反应膜2与吸水垫5重合部分长度为0.2
‑
0.4cm。
[0032]一种幽门螺旋杆菌试纸条的制备方法，经过胶体金的制备、负载有胶体金的偶联
物溶液的制备和整体的制备，完成幽门螺旋杆菌试纸条的制备；具体步骤如下：
[0033](1)胶体金的制备：
[0034]a.配备5％的柠檬酸钠溶液；
[0035]b.将25μl20％四氯金酸水合物加入100μl超纯水里，加热至沸腾后，向其中加入900μl配置好的柠檬酸钠水溶液，持续加热直至变红后继续加热10min，得到胶体金；
[0036](2)负载有胶体金的偶联物溶液的制备：取100μL20倍浓缩的胶体金溶液，加入1μl幽门螺旋杆菌抗体，摇匀，再加入1μl10％牛血清白蛋白溶液，摇匀，得到混合溶液A，按1：6.5的比例将混合溶液A加入到丁醇中进行脱水，取出丁醇，加100μl超纯水，离心，再经过1％PBS缓冲溶液和1％牛血清白蛋白溶液洗涤一次，最后取出混合溶液A，最终重悬在100μlElutionBuffer中，得到负载有胶体金的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种幽门螺旋杆菌试纸条，包括PVC底板和顺次在PVC底板(4)上粘连的样品垫(1)、结合垫(3)、反应膜(2)和吸水垫(5)，其特征在于：所述结合垫(3)上喷涂有被胶体金偶联标记的幽门螺旋杆菌包被抗体，所述偶联标记的幽门螺旋杆菌包被抗体的浓度为0.03
‑
0.1mg/ml；所述胶体金的发射波长为500
‑
550nm，粒径为10
‑
50nm；所述反应膜(2)上喷涂有检测线和质控线，其中检测线为T线，质控线为C线；所述检测线上喷涂有包被幽门螺旋杆菌的捕获抗体溶液，所述质控线上喷涂有羊抗鼠IgG抗体溶液。2.根据权利要求1所述的一种幽门螺旋杆菌试纸条，其特征在于：所述反应膜(2)为结合聚合物的硝酸纤维素膜，所述PVC底板(4)的宽度为0.3
‑
0.5cm。3.根据权利要求1所述的一种幽门螺旋杆菌试纸条，其特征在于：所述样品垫(1)与结合垫(3)部分重合，且样品垫(1)与结合垫(3)的重合部分长度为0.2
‑
0.4cm；所述结合垫(3)与反应膜(2)部分重合，且结合垫(3)与反应膜(2)重合部长度为0.2
‑
0.4cm；所述反应膜(2)与吸水垫(5)部分重合，且反应膜(2)与吸水垫(5)重合部分长度为0.2
‑
0.4cm。4.一种如权利要求1所述的幽门螺旋杆菌试纸条的制备方法，其特征在于：经过胶体...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱星宇，刘国东，孙春雪，任宏鑫，王振洋，朱永新，
申请(专利权)人：江苏相霖生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：