一种长链非编码RNAPGM5-AS1及检测方法和应用技术

本发明专利技术属于分子生物学技术领域，公开了一种长链非编码RNAPGM5

【技术实现步骤摘要】
一种长链非编码RNA PGM5
‑
AS1及检测方法和应用


[0001]本专利技术属于分子生物学
，尤其是一种长链非编码RNA PGM5
‑
AS1(LncRNA PGM5
‑
AS1)及检测方法和用于膀胱癌诊断分子标志物的用途。

技术介绍

[0002]膀胱癌，也称为泌尿系统肿瘤，是全球第九大常见癌症，且发病率呈稳步上升趋势。90％的膀胱癌症病例据报道是由膀胱中的尿路上皮细胞失控增殖引起的。虽然当前在膀胱癌预防、早期诊断和治疗方面有许多突破，但全世界膀胱癌症死亡率仍在全球癌症死亡中占极大比例。因此，确定尽早发现膀胱癌风险因素并识别预防和诊断显得极为迫切。另外，目前临床上，膀胱癌的检测仍缺乏高灵敏度和高特异性的早期诊断指标。
[0003]据报道，长度超过200个核苷酸的长非编码RNA(lncRNA)参与了多种癌症的进展，尽管它们不能编码蛋白质，lncRNAs可以通过剪接调控、表观遗传沉默或海绵状miRNAs来调节基因表达。在膀胱癌中发现lncRNA SNHG18可抑制膀胱癌细胞的生长和侵袭，并与膀胱癌的不良预后密切相关。Hu等人证明lncRNA LNPPS在膀胱癌中下调并通过PDCD5/p53依赖的信号通路调节细胞凋亡。lncRNAPGM5
‑
AS1(PGM5反义RNA 1)是lncRNA家族的一员，已被证明是多种癌症的肿瘤促进剂，如膀胱、宫颈和乳腺癌症。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有技术中的不足之处，提供一种长链非编码RNA PGM5
‑
AS1及检测方法和用于膀胱癌诊断分子标志物的用途。
[0005]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0006]一种长链非编码RNA PGM5
‑
AS1，所述长链非编码RNA PGM5
‑
AS1的核酸序列如SEQ ID No.1所示，该长链非编码RNA PGM5
‑
AS1为膀胱癌相关差异表达基因，且能够作为膀胱癌诊断标志物。
[0007]进一步地，所述长链非编码RNA PGM5
‑
AS1在膀胱癌中与在健康组织中的表达水平差异在20倍以上，p<0.0001。
[0008]如上所述的长链非编码RNA PGM5
‑
AS1在作为和/或制备膀胱癌诊断标志物中的应用。
[0009]一种检测膀胱癌组织中如上所述的长链非编码RNA PGM5
‑
AS1表达水平的检测方法，所述检测方法为荧光定量聚合酶链式反应qRT
‑
PCR，该检测方法所需材料包括：
[0010]1)用于扩增LncRNA PGM5
‑
AS1的特异性引物对；
[0011]2)标准DNA模板；
[0012]3)PCR反应液。
[0013]LncRNA PGM5
‑
AS1的检测方法为荧光定量PCR法。
[0014]进一步地，所述扩增LncRNA PGM5
‑
AS1的特异性引物对包括上游引物和下游引物，其
[0015]中上游引物序列为SEQ ID No.2(5
′‑
GACTATGTTGTGAGCCTGCG
‑3′
)，下游引物序列为SEQ ID No.3(5
′‑
AAAAGGGGAGGGGCAATACA
‑3′
)。
[0016]进一步地，所述荧光定量聚合酶链式反应qRT
‑
PCR的荧光定量体系为20μl：
[0017]2×
SYBR GREEN Mix 10μl，上游引物0.5μl，下游引物0.5μl，cDNA 2μl，ddH 2O 7μl；PCR循环为：50℃2min，95℃2min，95℃30sec，58℃30sec，72℃30sec，循环数为40。
[0018]一种膀胱癌组织中如上所述的长链非编码RNA PGM5
‑
AS1表达水平的检测试剂盒，所述检测试剂盒包括：
[0019]1)用于扩增LncRNA PGM5
‑
AS1的特异性引物对；
[0020]2)标准DNA模板；
[0021]3)PCR反应液。
[0022]进一步地，所述扩增LncRNA PGM5
‑
AS1的特异性引物对包括上游引物和下游引物，其
[0023]中上游引物序列为SEQ ID No.2(5
′‑
GACTATGTTGTGAGCCTGCG
‑3′
)，下游引物序列为SEQ ID No.3(5
′‑
AAAAGGGGAGGGGCAATACA
‑3′
)。
[0024]进一步地，所述检测试剂盒包括：
[0025]2×
SYBR GREEN Mix 10μl，上游引物0.5μl，下游引物0.5μl，cDNA2μl，ddH2O补足到20μl；PCR循环为：50℃2min，95℃2min，95℃30sec，58℃30sec，72℃30sec，循环数为40。
[0026]本专利技术取得的优点和积极效果为：
[0027]1、本专利技术长链非编码RNA PGM5
‑
AS1可用作膀胱癌诊断分子标记物，达到膀胱癌早诊断、早治疗的用途。长链非编码RNA调控机制是肿瘤发病机理研究中的一个新领域，LncRNA PGM5
‑
AS1在膀胱癌组织和健康组织中均有表达，且在癌组织中的表达水平均显著低于健康组织，差异具有统计学意义，提示LncRNA PGM5
‑
AS1作为膀胱癌诊断分子标志物的可行性及临床应用价值。LncRNAPGM5
‑
AS1在膀胱癌中的检测结果如下：膀胱癌中，差异在20倍以上，p<0.0001。
[0028]2、本专利技术针对目前临床上，膀胱癌的检测仍缺乏高灵敏度和高特异性的早期诊断指标，由此提供了LncRNA PGM5
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AS1用于作为膀胱癌诊断标志物的用途。前期研究中，专利申请人采用全基因组表达谱芯片筛选技术发现了大量的膀胱癌相关差异表达基因，经PCR方法检测发现，与癌旁组织比较，所有膀胱癌组织中LncRNA PGM5
‑
AS1表达水平显著增高。
[0029]3、本专利技术运用PCR法进行LncRNAPGM5
‑
AS1不需要增加其他的试剂，通用市面上常用的试剂盒，可直接用于PCR实验室检测，可有效地降低使用成本。
附图说明
[0030]图1为本专利技术中长链非编码RNA PGM5
‑
AS1在膀胱癌组织及健康人组织中的表达水平比较图。
具体实施方式
[0031]下面结合实施例，对本专利技术进一步说明，下属实施例是叙本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种长链非编码RNA PGM5
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AS1，其特征在于：所述长链非编码RNA PGM5
‑
AS1的核酸序列如SEQ ID No.1所示，该长链非编码RNA PGM5
‑
AS1为膀胱癌相关差异表达基因，且能够作为膀胱癌诊断标志物。2.根据权利要求1或2所述的长链非编码RNA PGM5
‑
AS1，其特征在于：所述长链非编码RNA PGM5
‑
AS1在膀胱癌中与在健康组织中的表达水平差异在20倍以上，p<0.0001。3.如权利要求1所述的长链非编码RNA PGM5
‑
AS1在作为和/或制备膀胱癌诊断标志物中的应用。4.一种检测膀胱癌组织中如权利要求1或2所述的长链非编码RNA PGM5
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AS1表达水平的检测方法，其特征在于：所述检测方法为荧光定量聚合酶链式反应qRT
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PCR，该检测方法所需材料包括：1)用于扩增LncRNA PGM5
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AS1的特异性引物对；2)标准DNA模板；3)PCR反应液；LncRNA PGM5
‑
AS1的检测方法为荧光定量PCR法。5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于：所述扩增LncRNA PGM5
‑
AS1的特异性引物对包括上游引物和下游引物，其中上游引物序列为SEQ ID ...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡良昌，贾正虎，武晓丽，马骏，孙倩，
申请(专利权)人：天津尤金生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：