含有无碱基核苷酸的核酸制造技术

本发明专利技术涉及用于治疗或预防疾病的核酸分子。子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含有无碱基核苷酸的核酸


[0001]本专利技术提供了适用于治疗用途的新型寡核苷酸化合物，该寡核苷酸化合物是核酸化合物。此外，本专利技术提供制备这些化合物的方法，以及使用此类化合物用于治疗各种疾病和病症的方法。

技术介绍

[0002]寡核苷酸化合物在医学上具有重要的治疗应用。寡核苷酸可用于使导致特定疾病的基因沉默。基因沉默通过抑制翻译来阻止蛋白质的形成。重要的是，基因沉默剂是抑制与疾病相关的蛋白质功能的传统小型有机化合物的有前途的替代品。siRNA、反义RNA和微小RNA是通过基因沉默阻止蛋白质形成的寡核苷酸。
[0003]在过去的二十年中，特别是为了诊断和治疗目的开发了许多修饰的siRNA化合物，包括用于治疗各种疾病的siRNA/RNAi治疗剂，该疾病包括中枢神经系统疾病、炎性疾病、代谢障碍、肿瘤、传染性疾病和眼部疾病。
[0004]本专利技术涉及用于治疗和/或预防疾病的此类寡核苷酸化合物，该寡核苷酸化合物是核酸化合物。

技术实现思路

[0005]一种用于抑制细胞中靶基因的表达的核酸(任选地是RNA)，其包含至少一个双链体区域，该双链体区域包含第一链的至少一部分和与第一链至少部分互补的第二链的至少一部分，其中所述第一链与从待抑制的所述靶基因转录的RNA的至少一部分至少部分互补，其中第二链包含在第二链的末端区域中的一个或多个无碱基核苷酸，并且其中所述无碱基核苷酸通过反向核苷酸间键与相邻核苷酸连接。
[0006]一种用于抑制细胞中靶基因的表达的缀合物，所述缀合物包含核酸部分和一个或多个配体部分，所述核酸部分包含如本文所公开的核酸。
[0007]一种药物组合物，其包含如本文所公开的核酸或如本文所公开的缀合物以及生理上可接受的赋形剂。
附图说明
[0008]图1显示了总共45种人源性癌细胞裂解物和原代人肝细胞(PHH)裂解物中hsC5 mRNA表达水平的分析。mRNA表达水平以相对光单位[RLU]显示。
[0009]图2显示了总共45种人源性癌细胞裂解物和原代人肝细胞(PHH)裂解物中hsHAO1mRNA表达水平的分析。mRNA表达水平以相对光单位[RLU]显示。
[0010]图3显示了总共45种人源性癌细胞裂解物和原代人肝细胞(PHH)裂解物中hsTTR mRNA表达水平的分析。mRNA表达水平以相对光单位[RLU]显示。
[0011]图4A
‑
B显示了实例1中HepG2细胞中靶向hsTTR的GalNAc
‑
siRNA的剂量响应分析结果。
[0012]图5A
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B显示了实例1中HepG2细胞中靶向hsC5的GalNAc
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siRNA的剂量响应分析结果。
[0013]图6显示了所有三批原代人肝细胞BHuf16087(左)、CHF2101(中)和CyHuf19009(右)各自在培养0小时、24小时、48小时和72小时后的hsTTR(上)、hsC5(中)和hsHAO1(下)mRNA表达水平的分析。mRNA表达水平以相对光单位[RLU]显示。
[0014]图7显示了所有三批原代人肝细胞BHuf16087(左)、CHF2101(中)和CyHuf19009(右)各自在培养0小时、24小时、48小时和72小时后的hsGAPDH(上)和hsAHSA1(下)mRNA表达水平的分析。mRNA表达水平以相对光单位[RLU]显示。
[0015]图8A
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B显示了实例1中PHH中靶向hsHAO1的GalNAc
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siRNA的剂量响应分析结果。
[0016]图9A
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B显示了实例1中PHH中靶向hsC5的GalNAc
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siRNA的剂量响应分析结果。
[0017]图10A
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B显示了实例1中PHH中靶向hsTTR的GalNAc
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siRNA的剂量响应分析结果。
[0018]图11A
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B显示了实例3中HepG2细胞中靶向hsTTR的GalNAc
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siRNA的剂量响应分析结果。
[0019]图12A
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B显示了实例3中HepG2细胞中靶向hsC5的GalNAc
‑
siRNA的剂量响应分析结果。
[0020]图13A
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B显示了实例3中PHH中靶向hsHAO1的GalNAc
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siRNA的剂量响应分析结果。
[0021]图14A
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B显示了实例3中PHH中靶向hsC5的GalNAc
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siRNA的剂量响应分析结果。
[0022]图15A
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B显示了实例3中PHH中靶向hsTTR的GalNAc
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siRNA的剂量响应分析结果。
[0023]图16.ETX005的单剂量小鼠药理学。HAO1 mRNA表达相对于盐水对照组显示。每个点代表3只小鼠的平均值和标准偏差。
[0024]图17.ETX005的单剂量小鼠药理学。显示了血清乙醇酸浓度。每个点代表3只小鼠的平均值和标准偏差，除了来自一组5只小鼠的基线乙醇酸浓度(第0天)以外。
[0025]图18.ETX006的单剂量小鼠药理学。HAO1 mRNA表达相对于盐水对照组显示。每个点代表3只小鼠的平均值和标准偏差。
[0026]图19.ETX006的单剂量小鼠药理学。显示了血清乙醇酸浓度。每个点代表3只小鼠的平均值和标准偏差，除了来自一组5只小鼠的基线乙醇酸浓度(第0天)以外。
[0027]图20.ETX014的单剂量小鼠药理学。C5 mRNA表达相对于盐水对照组显示。每个点代表3只小鼠的平均值和标准偏差。
[0028]图21.ETX0014的单剂量小鼠药理学。血清C5浓度相对于盐水对照组显示。每个点代表3只小鼠的平均值和标准偏差。
[0029]图22.ETX015的单剂量小鼠药理学。C5 mRNA表达相对于盐水对照组显示。每个点代表3只小鼠的平均值和标准偏差。
[0030]图23.ETX0015的单剂量小鼠药理学。血清C5浓度相对于盐水对照组显示。每个点代表3只小鼠的平均值和标准偏差。
[0031]图24.ETX023的单剂量NHP药理学。血清TTR浓度相对于研究第1天显示。每个点代表3只动物的平均值和标准偏差。
[0032]图25.ETX024的单剂量NHP药理学。血清TTR浓度相对于研究第1天显示。每个点代表3只动物的平均值和标准偏差。
[0033]图26ETX019的单剂量NHP药理学。血清TTR浓度相对于研究第1天以及给药前显示。
每个点代表3只动物的平均值和标准偏差。显示最多84天的时间点。
[0034]图27ETX020的单剂量NHP药理学。血清TTR浓度相对于研究第1天以及给药前显示。每个点代表3只动物的平均值和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于抑制细胞中靶基因的表达的核酸，任选地是RNA，其包含至少一个双链体区域，所述双链体区域包含第一链的至少一部分和与所述第一链至少部分地互补的第二链的至少一部分，其中所述第一链与从待抑制的所述靶基因转录的RNA的至少一部分至少部分地互补，其中所述第二链包含在所述第二链的末端区域中的一个或多个无碱基核苷酸，并且其中所述无碱基核苷酸通过反向核苷酸间键与相邻核苷酸连接。2.根据权利要求1所述的核酸，其中所述第二链包含：i所述第二链的末端区域中的2个或超过2个无碱基核苷酸；和/或ii所述第二链的5'或3'末端区域中的2个或超过2个无碱基核苷酸；和/或iii所述第二链的5'或3'末端区域中的2个或超过2个无碱基核苷酸，其中所述无碱基核苷酸存在于如本文所述的突出端中；和/或iv所述第二链的末端区域中的2个或超过2个连续无碱基核苷酸，其中优选地一个此类无碱基核苷酸是末端核苷酸；和/或v所述第二链的5'或3'末端区域中的2个或超过2个连续无碱基核苷酸，其中优选地，一个此类无碱基核苷酸是所述第二链的5'或3'末端区域中的末端核苷酸；和/或vi反向核苷酸间键，其将所述第二链的末端区域中的至少一个无碱基核苷酸与相邻碱基核苷酸连接；和/或vii反向核苷酸间键，其将所述第二链的5'或3'末端区域中的至少一个无碱基核苷酸与相邻碱基核苷酸连接；和/或viii作为倒数第二个核苷酸的无碱基核苷酸，其经由反向键与不是所述末端核苷酸的核苷酸(本文称为倒数第三个核苷酸)连接；和/或ix在朝向末端的方向读取所述链时，作为经由5'
‑
3'键而连接的2个末端核苷酸的无碱基核苷酸；x在朝向包含所述末端核苷酸的末端的方向读取所述链时，作为经由3'
‑
5'键而连接的2个末端核苷酸的无碱基核苷酸；xi作为末端2个位置的无碱基核苷酸，其中所述倒数第二个核苷酸经由所述反向键与所述倒数第三个核苷酸连接，并且其中所述反向键是5
‑
5'反向键或3'
‑
3'反向键；xii作为末端2个位置的无碱基核苷酸，其中所述倒数第二个核苷酸经由所述反向键与所述倒数第三个核苷酸连接，并且其中(1)当朝向包含末端和倒数第二个无碱基核苷酸的末端读取时，所述反向键是5
‑
5'反向键并且所述末端与倒数第二个无碱基核苷酸之间的键是3'5'；或者(2)当朝向包含末端和倒数第二个无碱基核苷酸的末端读取时，所述反向键是3
‑
3'反向键并且所述末端与倒数第二个无碱基核苷酸之间的键是5'3'。3.根据权利要求1或2所述的核酸，其中所述反向核苷酸间键是3'3反向键。4.根据权利要求3所述的核酸，其中所述反向核苷酸间键位于远离所述第二链的5'末端区域的末端区域，或位于远离所述第二链的3'末端区域的末端区域。5.根据权利要求1或2所述的核酸，其中所述反向核苷酸间键是5'5反向键。6.根据权利要求5所述的核酸，其中所述反向核苷酸间键位于远离所述第二链的5'末端区域的末端区域，或位于远离所述第二链的3'末端区域的末端区域。
7.根据前述权利要求中任一项所述的核酸，其中i)所述核酸的所述第一链的长度在15至30个核苷酸范围内，优选19至25个核苷酸，更优选23或25个核苷酸；且/或ii)所述核酸的所述第二链的长度在15至30个核苷酸范围内，优选19至25个核苷酸，更优选23个核苷酸。8.根据前述权利要求中任一项所述的核酸，其中在所述第一链和/或所述第二链上的一个或多个核苷酸被修饰以形成经修饰的核苷酸。9.根据权利要求8所述的核酸，其中修饰是在核糖糖的2'
‑
OH基团处的修饰，任选地选自2'
‑
Me或2'
‑
F修饰。10.根据权利要求9所述的核酸，其中所述第一链包含在从所述第二链的位置1开始计数的位置14、位置2、位置6或其任何组合中的任一个处的2'
‑
F。11.根据权利要求9或10所述的核酸，其中所述第二链包含在从所述第二链的位置1开始计数的位置7和/或9和/或11和/或13处的2'
‑
F修饰。12.根据权利要求9至11所述的核酸，其中所述第一链和所述第二链各自包含2'
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Me和2'
‑
F修饰。13.根据前述权利要求中任一项所述的核酸，其中所述核酸包含至少一个热去稳定化修饰，其合适地在所述第一链的位置1至9中的一个或多个处，和/或所述第二链上与所述第一链的位置1至9对齐的位置中的一个或多个处，其中所述去稳定化修饰选自修饰的未锁核酸(IMUNA)和乙二醇核酸(GNA)，优选乙二醇核酸。14.根据权利要求13所述的核酸，其是双链分子，优选双链RNA，其解链温度在约40℃至80℃的范围内。15.根据权利要求14或15所述的核酸，其包含在所述第一链的位置7处的至少一个热去稳定化修饰。16.根据权利要求9至15中任一项所述的核酸，其中所述核酸包含从所述第二链的位置1开始计数的在所述第二链的位置7至13处的3个或更多个2'
‑
F修饰，诸如在所述第二链的位置7至13处的4、5、6或7个2'
‑
F修饰17.根据权利要求9至16中任一项所述的核酸，其中所述第二链包含从所述第二链的位置1开始计数的在所述第二链的位置1至6处的至少3个，诸如4、5或6个2'
‑
Me修饰。18.根据权利要求9至17中任一项所述的核酸，其中所述第一链包含在3'末端区域处的至少5个2'
‑
Me连续修饰，优选包括在所述3'末端区域处的末端核苷酸，或至少在距离所述3'末端区域处的末端核苷酸1或2个核苷酸内。19.根据权利要求18所述的核酸，其中所述第一链包含在所述3'末端区域处的7个2'
‑
Me连续修饰，优选包括在所述3'末端区域处的末端核苷酸。20.根据权利要求9至19中任一项所述的核酸，其中所述第二链包括以下修饰模式：N
A
–
(N)3‑5–
N
B
其中N表示具有第一修饰的核苷酸；N
A
表示具有不同于N的所述第一修饰的第二修饰的核苷酸；N
B
表示具有不同于N的所述第一修饰但与N
A
的所述第二修饰相同或不同的第三修饰的核苷酸；且
其中所述模式具有沿所述第二链的5'至3'方向性。21.根据权利要求20所述的核酸，其中所述第二链包括以下修饰模式：N
A
–
(N)3–
N
B
。22.根据权利要求20所述的核酸，其中所述第二链包括以下修饰模式：N
A
–
(N)5–
N
B
。23.根据权利要求21所述的核酸，其中所述第二链包括以下修饰模式：Me
–
(F)3–
Me。24.根据权利要求22所述的核酸，其中所述第二链包括以下修饰模式：Me
–
(F)5–
Me。25.根据权利要求20所述的核酸，其中所述第二链包括以下修饰模式：N
C
–
N
A
–
(N)3‑5–
N
B
–
N
D
其中N
C
和N
D
可以相同或不同，分别表示多个5'和3'末端区域化学修饰的核苷酸，其中至少N
C
包含至少两个不同修饰的核苷酸。26.根据权利要求25所述的核酸，其中N
D
包含至少两个不同修饰的核苷酸，或各自具有相同修饰，优选2'
‑
Me连续修饰的多个核苷酸。27.根据权利要求26所述的核酸，其中所述第二链包括以下修饰模式：5'A
‑
A
‑
Me
‑
Me
‑
Me
‑
Me
‑
Me
‑
Me
‑
F
‑
Me
‑
F
‑
F
‑
F
‑
Me
‑
Me
‑
Me
‑
Me
‑
Me
‑
Me
‑
Me
‑
Me
‑
Me
‑
Me 3'其中A表示无碱基修饰。28.根据权利要求26所述的核酸，其中所述第二链包括以下修饰模式：5'A
‑
A
‑
Me
‑
Me
‑
F
‑
Me
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：e生物有限公司，
类型：发明
国别省市：