检测样本中生物标志物的试剂在制备鼻咽癌诊断产品中的应用以及试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测样本中生物标志物的试剂在制备鼻咽癌诊断产品中的应用，所述生物标志物包括D

【技术实现步骤摘要】
检测样本中生物标志物的试剂在制备鼻咽癌诊断产品中的应用以及试剂盒


[0001]本专利技术属于生物技术与医学领域，尤其涉及一种鼻咽癌诊断标志物以及试剂盒。

技术介绍

[0002]鼻咽癌发病部位隐匿，发病症状通常难以与其他良性疾病区分，误诊率高。高侵袭性与早期局部转移是鼻咽癌重要的临床病理特征，大部分鼻咽癌患者确诊时已处于中晚期，常伴随颈部淋巴结转移，治疗效果较差，治疗后复发与死亡率高，因此提高诊断水平是提高鼻咽癌患者生存率的有效途径。
[0003]内镜下鼻咽部病变组织活检为目前诊断鼻咽癌的金标准，但常因病灶较小或活检位置不准确而误诊，并且内镜下活检属于侵入性检查，风险性较大，患者接受程度低，因此亟需发展创伤小、便捷、有效的辅助诊断标志物。血清学分子标志物是重要的鼻咽癌辅助诊断指标。EBV(EB病毒，Epstein
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Barr Virus)感染是鼻咽癌的关键致癌因素，95％以上的患者均存在EBV感染。基于实时荧光定量PCR技术的血清EBV DNA拷贝数检测是目前临床应用成熟的鼻咽癌血清标志物。统计显示，血清EBV DNA拷贝数高(EBV
‑
DNA≥500copies/mL)对鼻咽癌的诊断的敏感性和特异性分别为89.1％和85.0％，但依然存在较高比例假阳性，敏感度欠缺、特异度不理想，存在漏检的可能。因此，获得新的高效能诊断标志物或标志物组合是急需解决的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是克服以上
技术介绍
中提到的不足和缺陷，提供一种检测样本中生物标志物的试剂在制备鼻咽癌诊断产品中的应用以及用于鼻咽癌诊断的试剂盒。为解决上述技术问题，本专利技术提出的技术方案为：
[0005]检测样本中生物标志物的试剂在制备鼻咽癌诊断产品中的应用，所述生物标志物包括D
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2HG(D
‑2‑
hydroxyglutarate，D
‑2‑
羟基戊二酸)。
[0006]上述应用中，优选的，所述生物标志物还包括EBV DNA拷贝数。
[0007]上述应用中，优选的，所述样本包括血清。
[0008]作为一个总的技术构思，本专利技术还提供一种用于鼻咽癌诊断的试剂盒，包括用于测量血清中D
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2HG含量的第一试剂盒和用于测量血清EBV DNA拷贝数的第二试剂盒。
[0009]异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase 1/2，IDH1/2)是细胞重要代谢酶，正常生理情况下，其催化异柠檬酸氧化脱羧生成α
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KG(α
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ketoglutaric acid，α
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酮戊二酸)。IDH1/2突变或过表达可催化α
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KG生成一种新的小分子代谢产物D
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2HG(D
‑2‑
hydroxyglutarate，D
‑2‑
羟基戊二酸)。D
‑
2HG是一种致癌代谢物，其通过竞争性抑制α
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KG依赖的双加氧酶活性，多方面影响肿瘤发生、发展及侵袭过程。正常人体内不生成D
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2HG，部分突变型肿瘤患者血清内D
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2HG显著升高，因此血清D
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2HG用于突变型肿瘤诊断具有极高的特异性。
[0010]D
‑
2HG通常认为是IDH1/2突变后生成的新产物，一般认为正常人体及非突变型肿瘤中D
‑
2HG含量应当很低。
[0011]但我们最新研究发现：(1)血清EBV DNA拷贝数较高的野生型肿瘤鼻咽癌患者血清样本中D
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2HG含量显著高于EBV DNA低拷贝组；(2)EBV通过上调IDH2表达，促进细胞内D
‑
2HG的生成及胞外释放。由此推测，EBV感染导致的IDH2高表达是鼻咽癌患者血清D
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2HG升高的驱动因素。血清D
‑
2HG含量可能作为高特异性的EBV阳性鼻咽癌诊断标志物，且结合临床成熟应用的EBV DNA拷贝数检测将有助于提高EBV阳性鼻咽癌诊断的敏感性与特异性。
[0012]专利技术人利用细胞模型证明EBV阳性鼻咽癌细胞的培养上清中D
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2HG含量显著升高，提示EBV感染促进D
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2HG的胞外释放。进一步利用血清样本证实，血清EBV DNA拷贝数高(EBV
‑
DNA≥500copies/mL)的患者血清中D
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2HG含量也显著较高。ROC曲线分析显示，血清D
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2HG含量诊断鼻咽癌的特异性明显高于临床使用的血清EBV DNA拷贝数指标；联合血清D
‑
2HG含量和EBV DNA拷贝数两个参数计算获得的联合指数可显著提高鼻咽癌诊断的敏感性与特异性。因此，本专利技术提供一种鼻咽癌血清标志物组合，该组合为血清D
‑
2HG含量和EBV DNA拷贝数的联合指数。该标志物组合特别适用于EBV阳性鼻咽癌的辅助诊断。
[0013]与现有技术相比，本专利技术的优点在于：
[0014]以临床使用的血清EBV DNA拷贝数为参照，本专利技术采用血清中D
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2HG含量用于鼻咽癌的诊断，其诊断特异性较高(D
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2HG：95.8％
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99.1％；EBV DNA：91.7％
‑
96.9％)，敏感性与现有指标类似(D
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2HG：70.1％
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86.0％；EBV DNA：70.0％
‑
80.6％)。结合血清D
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2HG含量和EBV DNA拷贝数两个参数计算获得的联合指数，显著提高鼻咽癌诊断的敏感性(联合指数：83.6％
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93.0％；EBV DNA：70.0％
‑
80.6％)与特异性(联合指数：93.7％
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100％；EBV DNA：91.7％
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96.9％)。血清D
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2HG含量和EBV DNA拷贝数的血清标志物组合用于诊断鼻咽癌的敏感性与特异性均显著优于目前临床单独应用的血清EBV DNA拷贝数指标，有利于进一步提高鼻咽癌诊断的准确率，降低漏诊率。
附图说明
[0015]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0016]图1为实施例中EBV阳性鼻咽癌细胞培养上清中，D
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2HG含量显著升高。***，P<0.001。
[0017]图2为实施例中鼻咽癌患者血清中D
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测样本中生物标志物的试剂在制备鼻咽癌诊断产品中的应用，其特征在于，所述生物标志物包括D
‑
2HG。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述生物标志物还包括EBV DNA拷贝数。3.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：石峰，曹亚，商利，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：