一种广叶绣球菌蛋白的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种广叶绣球菌蛋白在制备抗癌药物中的应用，该广叶绣球菌蛋白是采用提取液进行浸提后，通过调节硫酸铵的饱和度进行分级沉淀而获得的，其主要含有酪氨酸脱羧酶和丝氨酸羧基肽酶这2种蛋白。本发明专利技术广叶绣球菌蛋白SLSP

【技术实现步骤摘要】
一种广叶绣球菌蛋白的应用


[0001]本专利技术属于医药领域，具体涉及一种广叶绣球菌蛋白的应用。

技术介绍

[0002]近年来，随着人们饮食或生活习惯以及周围生存环境的改变，癌症的发病率和致死率不断提升，已成为一个严重威胁人民身体健康的公共卫生问题，其中，结直肠癌（CRC，colorectal cancer）是人类第三大常见的恶性肿瘤。蛋白质是食药用菌的主要活性组成成分之一，研究发现多种食药用菌均表现出良好的抗肿瘤的活性。广叶绣球菌（SparassislatifoliaY.C. Dai&Zheng Wang）又名绣球菇、花椰菜菌、何仙姑、绣球蕈，隶属于担子菌门Basidiomycota，伞菌纲Agaricomycetes，多孔菌目Polyporales，绣球菌科Sparassidaceae，绣球菌属Sparassis，是一种珍稀的食药两用大型真菌。广叶绣球菌不仅肉质鲜嫩、营养丰富，还含有多糖、蛋白质、碳水化合物以及多种维生素等成分，具有抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤、抗炎、抗艾滋病、提高人体免疫力和造血能力、改善糖尿病创面损伤愈合等多种功效，在日本更有“梦幻神奇菇”之称。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种广叶绣球菌蛋白的应用。
[0004]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的目的之一是保护一种广叶绣球菌蛋白在制备抗癌药品或保健品中的应用。
[0005]本专利技术的另一目的是保护一种广叶绣球菌蛋白在制备抗结直肠癌药品或保健品中的应用。r/>[0006]进一步地，所述广叶绣球菌蛋白是在广叶绣球菌冻干粉末中加入提取液进行浸提，然后过滤，在所得上清液中加入硫酸铵使饱和度为30%，经4℃静置过夜后离心，在所得上清液中再加入硫酸铵使饱和度提高至50%，再经4℃静置过夜后离心，收集沉淀，将沉淀用超纯水溶解后，经透析、冷冻干燥，制得。
[0007]更进一步地，所用广叶绣球菌冻干粉末与提取液的用量比例为20g:600mL；所述提取液为水、NaCl溶液（浓度0.15 mol/L）或磷酸盐缓冲液（浓度0.02~0.05 mol/L）。
[0008]更进一步地，所述浸提的温度为4℃，时间为24 h。
[0009]更进一步地，透析所用透析膜的截留分子量为10000Da以上。
[0010]更进一步地，所述广叶绣球菌蛋白主要含有酪氨酸脱羧酶和丝氨酸羧基肽酶这2种蛋白。
[0011]本专利技术的显著优势在于：（1）本专利技术通过NaCl浸提，不同饱和度硫酸铵分级沉淀，得到不同蛋白部位SLSP
‑
30（0
‑
30%）、SLSP
‑
50（30
‑
50%）、SLSP
‑
70（50
‑
70%）、SLSP
‑
90（70
‑
90%）以及SLP（0
‑
90%）。经体外细胞活性实验表明，与其他部位相比，SLSP
‑
50具有明显的体外人结肠癌HT
‑
29细胞生长
抑制活性，并能通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。采用液质联用并比对绣球菌蛋白数据库，鉴定发现该蛋白部位主要含有酪氨酸脱羧酶和丝氨酸羧基肽酶这2种蛋白。
[0012]（2）本专利技术以NaCl浸提结合硫酸铵沉淀简易的二步法，可有效获取广叶绣球菌抗结肠癌的活性蛋白组分，其制备过程未用到任何有毒试剂，不存在任何有机试剂污染，对今后广叶绣球菌相关的食品、保健品或药品的开发应用具有积极的意义。
[0013]（3）食用菌子实体的菇脚部分一般舍弃，造成了资源浪费。本专利技术也可应用于绣球菌菇脚中抗肿瘤活性蛋白的提取，以促进绣球菌子实体的充分利用及副产品的开发，有效提高绣球菌产品的附加值。
附图说明
[0014]图1为不同饱和度硫酸铵沉淀获得的广叶绣球菌蛋白对HT
‑
29细胞的影响情况对比图；图2为不同浓度SLSP
‑
50作用不同时间对HT
‑
29细胞抑制率的影响情况对比图；图3为不同浓度SLSP
‑
50对HT
‑
29细胞形态的影响情况对比图，其中，A：空白组，B：20 μg/mL给药组，C：40 μg/mL给药组，D：80 μg/mL给药组；图4为DAPI染色检测不同浓度SLSP
‑
50对HT
‑
29细胞凋亡的影响情况对比图，其中，A：空白组，B：20 μg/mL给药组，C：40 μg/mL给药组，D：80 μg/mL给药组；图5为流式细胞仪检测不同浓度SLSP
‑
50对HT
‑
29细胞凋亡的影响情况对比图，其中，A：空白组，B：20 μg/mL给药组，C：40 μg/mL给药组，D：80 μg/mL给药组；图6为不同浓度SLSP
‑
50对HT
‑
29细胞凋亡相关蛋白表达量的影响情况对比图；注：图中与空白组比较：*P<0.05，**P<0.01。
具体实施方式
[0015]为了使本专利技术所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本专利技术所述的技术方案做进一步的说明，但是本专利技术不仅限于此。
[0016]1材料与方法1.1广叶绣球菌不同蛋白部位的制备取广叶绣球菌冻干粉末20 g，加入600 mL预冷的0.15 mol/L NaCl溶液，4℃浸提24 h后，过滤得上清液，即为蛋白质粗提液。往粗提液中加入硫酸铵至90%饱和度，4℃静置过夜，4℃下12000 rpm离心30 min，收集沉淀。将蛋白沉淀以超纯水溶解，4℃超纯水透析（10,000 Da）除盐，冷冻干燥后即得广叶绣球菌总蛋白（totalprotien，SLP）。
[0017]按照上述方法制备蛋白质粗提液，然后加入硫酸铵，使饱和度逐步提高至30%、50%、70%、90%，并分别经离心，收集沉淀，透析，冷冻干燥，即得不同饱和度硫酸铵逐级沉淀的广叶绣球菌蛋白部位SLSP
‑
30（0
‑
30%）、SLSP
‑
50（30%
‑
50%）、SLSP
‑
70（50%
‑
70%）和SLSP
‑
90（70%
‑
90%）。
[0018]以BSA（牛血清白蛋白）为标准品，紫外
‑
可见光分光光度法分别测定SLSP
‑
30、SLSP
‑
50、SLSP
‑
70、SLSP
‑
90以及SLP的总蛋白含量。
[0019]1.2 MTT法检测细胞相对活力分别以含10%FBS的MEM、McCoy's 5a和RMPI 1640培养基培养HepG2、HT
‑
29和MGC
‑
803细胞。取对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种广叶绣球菌蛋白在制备抗癌药品或保健品中的应用。2.一种广叶绣球菌蛋白在制备抗结直肠癌药品或保健品中的应用。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述广叶绣球菌蛋白是在广叶绣球菌冻干粉末中加入提取液进行浸提，然后过滤，在所得上清液中加入硫酸铵使饱和度由30%提高至50%，再经4℃静置过夜后，离心，收集沉淀，将沉淀用超纯水溶解后，经透析、冷冻干燥，制得。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所用广叶绣球菌冻...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴建国，吴岩斌，程明翠，李秀杰，冯彩玲，吴锦忠，
申请(专利权)人：福建中医药大学，
类型：发明
国别省市：