抗PD-L1抗体及其融合蛋白制造技术

本发明专利技术总体上涉及抗PD

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗PD
‑
L1抗体及其融合蛋白
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2021年1月6日提交的美国临时专利申请号63/134,412的权益和优先权，所述临时申请的公开内容出于所有目的通过引用以其全文并入本文。
专利

[0003]本专利技术总体上涉及抗体、重组唾液酸酶融合蛋白和抗体缀合物，以及它们在癌症治疗中的用途。

技术介绍

[0004]程序性死亡配体1(PD
‑
L1)也称为分化簇274(CD274)或B7同源物1(B7
‑
H1)，是人类中由CD274基因编码的蛋白质。PD
‑
L1的上调可能会使某些癌症逃避宿主免疫系统。对196份来自患有肾细胞癌的患者的肿瘤样本的分析发现，PD
‑
L1的高肿瘤表达与肿瘤侵袭性增加以及死亡风险增加4.5倍相关联(Thompson等人(2004)P
ROC
.N
ATL
.A
CAD
.S
CI
.USA 101(49)17174
‑
17179)。PD
‑
L1表达在许多人类癌症中检测到，这些癌症包括膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、食道癌、胃癌、肾癌、肺癌、卵巢癌和胰腺癌(Wang等，(2016)O
NCO
.T
ARGETS T
HER
.9:5023
–
5039)。对于某些癌症，PD
‑
L1的表达与肿瘤浸润淋巴细胞数目减少和预后不良相关联(Ohaegbulam等人(2015)T
RENDS M
OL
.M
ED
.21(1):24
–
33)。美国已批准许多抗PD
‑
L1抗体用于治疗多种癌症。例如，阿特珠单抗(atezolizumab)已被批准用于例如尿路上皮癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、三阴性乳腺癌和小细胞肺癌，德瓦鲁单抗(durvalumab)已被批准用于例如尿路上皮癌和NSCLC，并且阿维单抗(avelumab)已被批准用于默克尔细胞癌、尿路上皮癌和肾细胞癌。其他PD
‑
L1抗体作为免疫肿瘤疗法仍在开发中，并且在临床试验中显示出良好的结果(包括用于治疗NSCLC和黑色素瘤)(Akinleye等(2019)J.HEMATOL.ONCOL.12(1):92)。
[0005]越来越多的证据支持聚糖以及唾液酸聚糖特别是在肿瘤进展的各个病理生理步骤中的作用。聚糖调控肿瘤增殖、侵袭、血源性转移和血管生成(Fuster等人，(2005)NAT.REV.CANCER 5(7):526
‑
42)。在癌症中细胞表面糖缀合物的唾液酸化经常被改变，导致唾液酸化肿瘤相关糖类抗原的表达。肿瘤细胞对唾液酸化聚糖的表达通常与肿瘤的侵袭性和转移潜力增加相关(Julien S.,Delannoy P.(2015)“Sialic Acid and Cancer”,In:Taniguchi N.,Endo T.,Hart G.,Seeberger P.,WongCH.(编)Glycoscience:Biology and Medicine.Springer,Tokyo.https://doi.org/10.1007/978
‑4‑
431
‑
54841
‑
6_193)。
[0006]最近变得越来越明显的是，Siglecs(结合唾液酸的免疫球蛋白样凝集素)，一个结合唾液酸的凝集素家族，通过与超唾液酸化的癌细胞结合并介导来自于活化的NK细胞受体的信号的压制，从而抑制NK细胞介导的肿瘤细胞灭杀，而在癌症免疫压制中发挥作用(Jandus等，(2014)J.CLIN.INVEST.124:1810
‑
1820；等，(2014)PROC.NATL.ACAD.SCI.USA 111:14211
‑
14216；Hudak等，(2014)NAT.CHEM.BIOL.10:69
‑
75)。同样地，通过用唾液酸酶处理来酶促去除唾液酸可以增强NK细胞介导的肿瘤细胞灭杀(Jandus，同上；Hudak，同上；Xiao等，(2016)PROC.NATL.ACAD.SCI.USA 113(37):10304
‑
9)。
[0007]使用包括阻断PD
‑
1/PD
‑
L1途径的抗体在内的免疫检查点抑制剂的癌症免疫疗法改善了许多癌症患者的结果。然而，尽管到目前为止已取得进展，但许多患者对目前可用的免疫检查点抑制剂没有响应。因此，对克服免疫压制性肿瘤微环境并用于治疗与超唾液酸化的癌细胞相关的癌症的有效干预手段，仍存在着需求。

技术实现思路

[0008]本专利技术部分基于影响或以其他方式下调由PD
‑
1或PD
‑
L1介导的信号传导的抗PD
‑
L1抗体的发现。在适当的环境下，所述抗体可以消除PD
‑
1或PD
‑
L1介导的对受试者免疫系统的阻遏，从而介导非天然细胞，例如癌细胞的去除。
[0009]本专利技术还部分地基于以下发现：有可能产生含有唾液酸酶和抗PD
‑
L1免疫球蛋白或其部分(例如抗原结合结构域和/或免疫球蛋白Fc结构域)的融合蛋白，和/或包含唾液酸酶和抗PD
‑
L1抗体或其部分(例如抗原结合结构域和/或免疫球蛋白Fc结构域)的抗体缀合物。所述融合蛋白和/或抗体缀合物的唾液酸酶部分相对于野生型唾液酸酶可包含至少一个突变。所述突变或突变的组合可以改善唾液酸酶的表达、活性或表达和活性两者，以改善它在癌症诊断和/或治疗中的用途。
[0010]所述融合蛋白和/或抗体缀合物具有合适的底物特异性和活性从而可用于从癌细胞(例如，表达PD
‑
L1的癌细胞)表面除去唾液酸和/或含唾液酸分子)以及/或者从肿瘤微环境中除去唾液酸和/或含唾液酸分子，以及/或者降低肿瘤微环境中唾液酸和/或含唾液酸分子的浓度。
[0011]因此，在一方面，本专利技术提供了结合人类PD
‑
L1的经分离的抗体。
[0012]在某些实施方案中，所述抗体包含免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含：包含SEQ ID NO:161的氨基酸序列的CDRH1、包含SEQ ID NO:162的氨基酸序列的CDRH2和包含SEQ ID NO:163的氨基酸序列的CDRH3(PAL769
‑
VH、h769
‑
VH)；和/或免疫球蛋白轻链可变区，所述免疫球蛋白轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:165的氨基酸序列的CDRL1、包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列的CDRL2和包含SEQ ID NO:166的氨基酸序列的CDRL3(PAL7本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种结合人类PD
‑
L1的经分离的抗体，其包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含：包含SEQ ID NO:161的氨基酸序列的CDR
H1
、包含SEQ ID NO:162的氨基酸序列的CDR
H2
和包含SEQ ID NO:163的氨基酸序列的CDR
H3
(PAL769
‑
VH、h769
‑
VH)；和/或免疫球蛋白轻链可变区，所述免疫球蛋白轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:165的氨基酸序列的CDR
L1
、包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列的CDR
L2
和包含SEQ ID NO:166的氨基酸序列的CDR
L3
(PAL769
‑
VL、h769
‑
IF3
‑
VL、h769
‑
tm2
‑
VL、h769
‑
tm3
‑
VL)；(ii)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含：包含SEQ ID NO:161的氨基酸序列的CDR
H1
、包含SEQ ID NO:162的氨基酸序列的CDR
H2
和包含SEQ ID NO:163的氨基酸序列的CDR
H3
(PAL769
‑
VH、h769
‑
VH)；和/或免疫球蛋白轻链可变区，所述免疫球蛋白轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:165的氨基酸序列的CDR
L1
、包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列的CDR
L2
和包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的CDR
L3
(h769.T
‑
VL)；(iii)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含：包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的CDR
H1
、包含SEQ ID NO:130的氨基酸序列的CDR
H2
和包含SEQ ID NO:131的氨基酸序列的CDR
H3
(PAL752
‑
VH)；和/或免疫球蛋白轻链可变区，所述免疫球蛋白轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:133的氨基酸序列的CDR
L1
、包含SEQ ID NO:134的氨基酸序列的CDR
L2
和包含SEQ ID NO:135的氨基酸序列的CDR
L3
(PAL752
‑
VL)；(iv)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含：包含SEQ ID NO:137的氨基酸序列的CDR
H1
、包含SEQ ID NO:138的氨基酸序列的CDR
H2
和/或包含SEQ ID NO:139的氨基酸序列的CDR
H3
(PAL759
‑
VH)；和免疫球蛋白轻链可变区，所述免疫球蛋白轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:141的氨基酸序列的CDR
L1
、包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列的CDR
L2
和包含SEQ ID NO:143的氨基酸序列的CDR
L3
(PAL759
‑
VL)；(v)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含：包含SEQ ID NO:145的氨基酸序列的CDR
H1
、包含SEQ ID NO:146的氨基酸序列的CDR
H2
和包含SEQ ID NO:147的氨基酸序列的CDR
H3
(PAL760
‑
VH)；和/或免疫球蛋白轻链可变区，所述免疫球蛋白轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:149的氨基酸序列的CDR
L1
、包含SEQ ID NO:150的氨基酸序列的CDR
L2
和包含SEQ ID NO:151的氨基酸序列的CDR
L3
(PAL760
‑
VL)；(vi)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含：包含SEQ ID NO:153的氨基酸序列的CDR
H1
、包含SEQ ID NO:154的氨基酸序列的CDR
H2
和包含SEQ ID NO:155的氨基酸序列的CDR
H3
(PAL767
‑
VH)；和/或免疫球蛋白轻链可变区，所述免疫球蛋白轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:157的氨基酸序列的CDR
L1
、包含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的CDR
L2
和包含SEQ ID NO:159的氨基酸序列的CDR
L3
(PAL767
‑
VL)；(vii)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含：包含SEQ ID NO:161的氨基酸序列的CDR
H1
、包含SEQ ID NO:168的氨基酸序列的CDR
H2
和包含SEQ ID NO:169的氨基酸序列的CDR
H3
(PAL771
‑
VH)；和/或免疫球蛋白轻链可变区，所述免疫球蛋白轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:171的氨基酸序列的CDR
L1
、包含SEQ ID NO:172的氨基酸序列的CDR
L2
和包含SEQ ID NO:173的氨基酸序列的CDR
L3
(PAL771
‑
VL)；(viii)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含：包含SEQ ID NO:175的氨基酸序列的CDR
H1
、包含SEQ ID NO:176的氨基酸序列的CDR
H2
和包含SEQ ID NO:177的
氨基酸序列的CDR
H3
(PAL785
‑
VH)；和/或免疫球蛋白轻链可变区，所述免疫球蛋白轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:179的氨基酸序列的CDR
L1
、包含SEQ ID NO:180的氨基酸序列的CDR
L2
和包含SEQ ID NO:181的氨基酸序列的CDR
L3
(PAL785
‑
VL)；(ix)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含：包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列的CDR
H1
、包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列的CDR
H2
和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的CDR
H3
(PAL787
‑
VH)；和/或免疫球蛋白轻链可变区，所述免疫球蛋白轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:187的氨基酸序列的CDR
L1
、包含SEQ ID NO:188的氨基酸序列的CDR
L2
和包含SEQ ID NO:189的氨基酸序列的CDR
L3
(PAL787
‑
VL)；或者(x)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含：包含SEQ ID NO:191的氨基酸序列的CDR
H1
、包含SEQ ID NO:192的氨基酸序列的CDR
H2
和包含SEQ ID NO:193的氨基酸序列的CDR
H3
(PAL788
‑
VH)；和/或免疫球蛋白轻链可变区，所述免疫球蛋白轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:195的氨基酸序列的CDR
L1
、包含SEQ ID NO:196的氨基酸序列的CDR
L2
和包含SEQ ID NO:197的氨基酸序列的CDR
L3
(PAL788
‑
VL)。2.如权利要求1所述的经分离的抗体，其中所述CDR嵌插在人类或人源化免疫球蛋白框架区之间。3.一种结合人类PD
‑
L1的经分离的抗体，其包含：(i)包含SEQ ID NO:164的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(PAL769
‑
VH)，和包含SEQ ID NO:167的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(PAL769
‑
VL)；(ii)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(h769 VH)，和包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(h769
‑
IF3
‑
VL)；(iii)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(h769
‑
VH)，和包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(h769
‑
tm2
‑
VL)；(iv)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(h769 VH)，和包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(h769
‑
tm3
‑
VL)；(v)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(h769 VH)，和包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(h769.T
‑
VL)；(vi)包含SEQ ID NO:132的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(PAL752
‑
VH)，和包含SEQ ID NO:136的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(PAL752
‑
VL)；(vii)包含SEQ ID NO:140的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(PAL759
‑
VH)，和包含SEQ ID NO:144的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(PAL759
‑
VL)；(viii)包含SEQ ID NO:148的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(PAL760
‑
VH)，和包含SEQ ID NO:152的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(PAL760
‑
VL)；(ix)包含SEQ ID NO:156的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(PAL767
‑
VH)，和包含SEQ ID NO:160的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(PAL767
‑
VL)；(x)包含SEQ ID NO:170的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(PAL771
‑
VH)，和包含SEQ ID NO:174的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(PAL771
‑
VL)；(xi)包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(PAL785
‑
VH)，和包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(PAL785
‑
VL)；(xii)包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(PAL787
‑
VH)，和包
含SEQ ID NO:190的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(PAL787
‑
VL)；或者(xiii)包含SEQ ID NO:194的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(PAL788
‑
VH)，和包含SEQ ID NO:198的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(PAL788
‑
VL)。4.如权利要求1
‑
3中任一项所述的经分离的抗体，其进一步包含重链和/或轻链恒定区。5.如权利要求4所述的经分离的抗体，其中所述重链恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4重链恒定区。6.如权利要求1
‑
5中任一项所述的经分离的抗体，其中所述抗体以5nM或更低、1nM或更低、0.75nM或更低、0.5nM或更低、0.1nM、0.075nM或0.05nM或更低的K
D
与人类PD
‑
L1结合，如通过表面等离子体共振或生物层干涉测量法测量的。7.如权利要求1
‑
6中任一项所述的经分离的抗体，其中所述抗体还与食蟹猕猴(猕猴)PD
‑
L1结合。8.一种经分离的抗体，其与如权利要求1
‑
7中任一项所述的抗体竞争与人类PD
‑
L1的结合。9.一种经分离的抗体，其与如权利要求1
‑
8中任一项所述的抗体结合人类PD
‑
L1上相同的表位。10.一种经分离的核酸，其包含编码如权利要求1
‑
7中任一项所述的免疫球蛋白重链可变区的核苷酸序列和/或编码如权利要求1
‑
7中任一项所述的免疫球蛋白轻链可变区的核苷酸序列。11.一种表达载体，其包含：(i)包含编码如权利要求1
‑
7中任一项所述的免疫球蛋白重链可变区的核苷酸序列的核酸；和/或(ii)包含编码如权利要求1
‑
7中任一项所述的免疫球蛋白轻链可变区的核苷酸序列的核酸。12.一种宿主细胞，其包含如权利要求11所述的表达载体。13.一种融合蛋白，其包含：(a)唾液酸酶酶；和(b)源自于如权利要求1
‑
9中任一项所述的抗PD
‑
L1抗体的抗PD
‑
L1免疫球蛋白抗原结合结构域。14.如权利要求13所述的融合蛋白，其中所述唾液酸酶是人类唾液酸酶。15.如权利要求13或14所述的融合蛋白，其中所述唾液酸酶是重组突变人类唾液酸酶。16.如权利要求15所述的融合蛋白，其中所述唾液酸酶包含：(a)对应于野生型人类Neu2的第1位的位置处的甲硫氨酸残基(M1)的取代或缺失；(b)对应于野生型人类Neu2的第6位的位置处的缬氨酸残基(V6)的取代；(c)对应于野生型人类Neu2的第9位的位置处的赖氨酸残基(K9)的取代；(d)对应于野生型人类Neu2的第42位的位置处的丙氨酸残基(A...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭力，车韵瑜，徐丽慧，
申请(专利权)人：帕利昂制药有限公司，
类型：发明
国别省市：