苯并二氮制造技术

本申请涉及苯并二氮

【技术实现步骤摘要】
苯并二氮
䓬
衍生物的选择性磺化
[0001]本申请是申请日为2017年11月22日、申请号为201780084278.3、名称为“苯并二氮衍生物的选择性磺化”的专利申请的分案申请。
[0002]相关申请
[0003]本申请根据美国法典第35篇第119条(e)款要求2016年11月23日提交的美国临时申请号62/425,761的提交日的权益，所述案的全部内容，包括所有附图、式、说明书、权利要求和序列表，均以引用方式并入本文。

技术介绍

[0004]抗体
‑
细胞毒性剂缀合物(或“抗体
‑
药物缀合物(ADC)”)和细胞结合剂
‑
药物缀合物是新兴的跨一定范围的癌症具有功效的一类强大的抗肿瘤剂。细胞结合剂
‑
药物缀合物(诸如ADC)通常由三种不同要素构成：细胞结合剂(例如，抗体)；接头；和细胞毒性部分。细胞毒性药物部分可共价连接至抗体上的赖氨酸，得到缀合物，所述缀合物为带有不同数目的在抗体分子的不同位置处连接的药物的ADC的异质混合物。替代地，细胞毒性药物部分可通过硫醇反应性基团诸如马来酰亚胺基团共价连接至抗体上的半胱氨酸硫醇基团以形成位点特异性ADC。抗体与细胞毒性剂之间的缀合反应时常在水或水溶液中进行，其中使细胞毒性剂增溶需要少量有机溶剂。
[0005]苯并二氮化合物，包括三环苯并二氮(诸如吡咯并苯并二氮(PBD))和四环苯并二氮(诸如吲哚啉并苯并二氮)，已用作与抗体键联以生成ADC的细胞毒性剂，其已示出有前景的抗肿瘤活性。此等苯并二氮化合物含有亚胺键，其可结合至DNA的小沟并干扰DNA功能，导致细胞死亡。苯并二氮化合物通常在水中具有非常低的溶解度。为了在与抗体的缀合反应中使苯并二氮化合物增溶，需要相对大量的有机溶剂，其可使抗体不稳定。
[0006]因此，需要开发用于制备细胞结合剂和含亚胺苯并二氮药物的缀合物的新方法。

技术实现思路

[0007]为了改良水溶性，可将含亚胺苯并二氮化合物在与抗体进行缀合反应以形成抗体
‑
苯并二氮缀合物之前用亚胺反应性试剂(诸如亚硫酸氢盐或偏亚硫酸氢盐)处理。亚氨基团的磺化可增加苯并二氮化合物的水溶性，导致与CBA(诸如抗体)的缀合反应的条件改良。然而，亲核试剂与α,β
‑
不饱和羰基之间的亲核加成为合成有机化学中熟知的。亚硫酸氢盐向马来酰亚胺的活化烯烃的亲核加成为此反应的一个此类实例。因此，当含亚胺苯并二氮化合物带有马来酰亚胺时，与抗体共价键联的反应性基团马来酰亚胺部分和亚胺部分均与亚硫酸氢盐或偏亚硫酸氢盐反应以形成磺化马来酰亚胺和/或磺化亚胺。意外地发现，使带有马来酰亚胺基团的含亚胺吲哚啉并苯并二氮化合物在低pH下与亚硫酸氢盐
或偏亚硫酸氢盐反应可选择性地且有效地影响亚氨基团的磺化而无马来酰亚胺基团的显著磺化，从而增加吲哚啉并苯并二氮化合物与抗体之间的缀合反应的反应产率。此外，磺化吲哚啉并苯并二氮化合物具有增加的在水中的溶解度，并且因此，与抗体的缀合反应中需要显著较少量的有机溶剂(例如，DMA)。缀合反应中大量有机溶剂的存在可使抗体不稳定。
[0008]本专利技术提供一种用于制备细胞结合剂
‑
细胞毒性剂缀合物的新颖方法，所述细胞结合剂
‑
细胞毒性剂缀合物包含带有马来酰亚胺基团的含亚胺细胞毒性剂，所述马来酰亚胺基团共价连接至细胞结合剂(CBA)。在一些实施方案中，本专利技术提供一种制备细胞结合剂
‑
细胞毒性剂缀合物的方法，其包含以下步骤：
[0009](a)使由下式表示的含亚胺细胞毒性剂或其药学上可接受的盐中的亚胺部分：
[0010][0011]与二氧化硫、亚硫酸氢盐或偏亚硫酸氢盐在pH 1.9至5.0的水溶液中反应以形成包含由下式表示的修饰的亚胺部分的修饰的细胞毒性剂：
[0012][0013]或其药学上可接受的盐；以及
[0014](b)使所述修饰的细胞毒性剂与细胞结合剂反应以形成所述细胞结合剂
‑
细胞毒性剂缀合物，
[0015]其中D为含亚胺细胞毒性化合物；并且L为接头。
[0016]在一些实施方案中，D为含亚胺三环或四环苯并二氮化合物。
[0017]在一些实施方案中，D为含亚胺三环苯并二氮化合物。
[0018]在一些实施方案中，D为含亚胺四环苯并二氮化合物。
[0019]如本文所用，含亚胺三环苯并二氮化合物是指具有稠合至苯并二氮核心的二氮部分的单环的化合物。单环可含有一个或多个额外杂原子诸如氧、硫或氮以及取代基诸如单环或多环。示例性三环苯并二氮化合物包括但不限于吡咯并苯并二氮(PBD)，诸如WO2010/043880、WO2011/130616、WO2009/016516、WO 2013/177481和WO 2012/112708中所述的那些。
[0020]如本文所用，含亚胺四环苯并二氮化合物是指具有稠合至苯并二氮核心的二氮部分的双环的化合物。所述双环为任选地含有一个或多个额外杂原子诸如氧、硫或氮的稠合双环。示例性四环苯并二氮化合物包括但不限于吲哚啉并苯并二氮(IGN)，诸如WO/2010/091150和WO 2012/128868中所述的那些。
[0021]在一些实施方案中，D为吲哚啉并苯并二氮。
[0022]在一些实施方案中，D为吡咯并苯并二氮(PBD)。
[0023]本专利技术还提供通过本文所述的方法制备的细胞结合剂
‑
细胞毒性剂缀合物和修饰的细胞毒性剂。
[0024]应理解，除非明确否决或不适当，否则本文所述的任何实施方案，包括仅在本专利技术的一个方面下但不是其他方面所述的实施方案，并且包括仅出现于实施例中的实施方案，可与任何一个或多个其他实施方案组合。
附图说明
[0025]图1示出含亚胺细胞毒性剂D1与亚硫酸氢钠的反应混合物在pH3.3下的UPLC色谱图。
[0026]图2示出含亚胺细胞毒性剂D1与亚硫酸氢钠的反应混合物在pH4.75下的UPLC色谱图。
[0027]图3示出含PBD亚胺细胞毒性剂塔立林(talirine)与亚硫酸氢钠的反应混合物的UPLC色谱图。
[0028]图4A和图4B示出含亚胺细胞毒性剂D5与2.0(图4A)或2.5(图4B)当量亚硫酸氢钠的反应混合物的UPLC色谱图。
具体实施方式
[0029]现将详细参照本专利技术某些实施方案，所述实施方案的实例以所附结构和式予以说明。尽管本专利技术将结合列举的实施方案进行描述，但应理解，其不意图将本专利技术局限于那些实施方案。相反，本专利技术意图旨在涵盖可包括在由权利要求所界定的本专利技术范畴内的所有替代物、修改和等同物。本领域的技术人员将认识到与本文所述的那些类似或等同的许多方法和材料，其可用于实践本专利技术。
[0030]应理解，除非明确否决或不适当，否则本文所述的任一实施方案，包括在本专利技术不同方面和说明书不同部分(包括仅在实施例中所述的实施方案)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备细胞结合剂
‑
细胞毒性剂缀合物的方法，其包括以下步骤：(a)使由下式表示的含亚胺细胞毒性剂或其药学上可接受的盐中的亚胺部分：与二氧化硫、亚硫酸氢盐或偏亚硫酸氢盐在pH 1.9至5.0的水溶液中反应以形成包含由下式表示的修饰的亚胺部分的修饰的细胞毒性剂：或其药学上可接受的盐；以及(b)使所述修饰的细胞毒性剂与细胞结合剂反应以形成所述细胞结合剂
‑
细胞毒性剂缀合物，其中D为含亚胺苯并二氮化合物；并且L为接头。2.如权利要求1所述的方法，其中D为含亚胺吲哚啉并苯并二氮3.如权利要求1或2所述的方法，其中步骤(a)的所述反应在pH2.9至4.0下进行。4.如权利要求1或2所述的方法，其中步骤(a)的所述反应在pH2.9至3.7下进行。5.如权利要求1或2所述的方法，其中步骤(a)的所述反应在pH3.1至3.5下进行。6.如权利要求1或2所述的方法，其中步骤(a)的所述反应在pH3.2至3.4下进行。7.如权利要求1或2所述的方法，其中步骤(a)的所述反应在pH3.3下进行。8.如权利要求1
‑
7中任一项所述的方法，其中步骤(a)的所述反应在缓冲溶液的存在下进行。9.如权利要求8所述的方法，其中所述缓冲溶液为柠檬酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液和磷酸盐缓冲液。10.如权利要求8所述的方法，其中所述缓冲溶液为琥珀酸盐缓冲液。11.如权利要求1
‑
7中任一项所述的方法，其中步骤(a)的所述反应在不存在缓冲溶液的情况下进行。12.一种制备细胞结合剂
‑
细胞毒性剂缀合物的方法，其包括以下步骤：(a)使由下式表示的含亚胺细胞毒性剂或其药学上可接受的盐中的亚胺部分：与二氧化硫、亚硫酸氢盐或偏亚硫酸氢盐在不存在缓冲液的情况下在水溶液中反应以形成包含由下式表示的修饰的亚胺部分的修饰的细胞毒性剂：
或其药学上可接受的盐；以及(b)使所述修饰的细胞毒性剂与细胞结合剂反应以形成所述细胞结合剂
‑
细胞毒性剂缀合物，其中D为含亚胺苯并二氮化合物；并且L为接头。13.如权利要求1
‑
12中任一项所述的方法，其中使0.5至5当量所述亚硫酸氢盐或0.25至2.5当量所述偏亚硫酸氢盐与1当量所述含亚胺细胞毒性剂反应。14.如权利要求13所述的方法，其中使0.8至2.0当量所述亚硫酸氢盐或0.4至1.0当量所述偏亚硫酸氢盐与1当量所述含亚胺细胞毒性剂反应。15.如权利要求13所述的方法，其中使1.1至1.6当量所述亚硫酸氢盐或0.55至0.8当量所述偏亚硫酸氢盐与1当量所述含亚胺细胞毒性剂反应。16.如权利要求13所述的方法，其中使1.4当量所述亚硫酸氢盐或0.7当量所述偏亚硫酸氢盐与1当量所述含亚胺细胞毒性剂反应。17.如权利要求1或2所述的方法，其中步骤(a)的所述反应在pH2.9至3.7下进行，并且使1.0至1.8当量所述亚硫酸氢盐或0.5至0.9当量所述偏亚硫酸氢盐与1当量所述含亚胺细胞毒性剂反应。18.如权利要求1或2所述的方法，其中步骤(a)的所述反应在pH3.1至3.5下进行，并且使1.1至1.6当量所述亚硫酸氢盐或0.55至0.8当量所述偏亚硫酸氢盐与1当量所述含亚胺细胞毒性剂反应。19.如权利要求1或2所述的方法，其中步骤(a)的所述反应在pH3.3下进行，并且使1.4当量所述亚硫酸氢盐或0.7当量所述偏亚硫酸氢盐与1当量所述含亚胺细胞毒性剂反应。20.如权利要求1
‑
19中任一项所述的方法，其中步骤(a)的所述反应在有机溶剂和水的混合物中进行。21.如权利要求20所述的方法，其中步骤(a)的所述反应在二甲基乙酰胺(DMA)和水的混合物中进行。22.如权利要求20所述的方法，其中步骤(a)的所述反应在DMA和水的混合物中进行，其中DMA与水的体积比为1:1。23.如权利要求1
‑
22中任一项所述的方法，其中步骤(a)的所述反应进行1分钟至48小时。24.如权利要求23所述的方法，其中步骤(a)的所述反应进行1小时至10小时。25.如权利要求24所述的方法，其中步骤(a)的所述反应进行1小时至4小时。26.如权利要求1
‑
25中任一项所述的方法，其中在步骤(a)中，使所述含亚胺细胞毒性剂与亚硫酸氢钠反应。27.如权利要求1
‑
25中任一项所述的方法，其中在步骤(a)中，使所述含亚胺细胞毒性剂与偏亚硫酸氢钠反应。28.如权利要求1
‑
27中任一项所述的方法，其中所述修饰的细胞毒性剂在步骤(b)中与所述细胞结合剂反应之前为未纯化的。29.如权利要求1
‑
27中任一项所述的方法，其中所述修饰的细胞毒性剂在步骤(b)中与所述细胞结合剂反应之前为纯化的。30.如权利要求1
‑
29中任一项所述的方法，其中步骤(b)的所述反应在pH 4至9下进行。
31.如权利要求30所述的方法，其中步骤(b)的所述反应在pH 5至8.5下进行。32.如权利要求30所述的方法，其中步骤(b)的所述反应在pH 5.5至6.5下进行。33.如权利要求1
‑
32中任一项所述的方法，其中所述缀合物通过切向流过滤来纯化以产生纯化的缀合物。34.如权利要求33所述的方法，其中所述纯化的缀合物在包含亚硫酸氢盐的配制缓冲液中配制。35.如权利要求34所述的方法，其中所述配制缓冲液包含10至200μM的亚硫酸氢钠。36.如权利要求33所述的方法，其中所述配制缓冲液包含40至80μM的亚硫酸氢钠。37.如权利要求33所述的方法，其中所述配制缓冲液包含50μM的亚硫酸氢钠。38.如权利要求34
‑
37中任一项所述的方法，其中所述配制缓冲液为pH 4至5。39.如权利要求38所述的方法，其中所述配制缓冲液为pH 4.2。40.如权利要求1
‑
39中任一项所述的方法，其中D为含亚胺吲哚啉并苯并二氮化合物。41.如权利要求1
‑
40中任一项所述的方法，其中D由下式表示：或为其药学上可接受的盐，其中：
L'、L”和L”'中的一者由下式表示：
‑
Z1‑
P1‑
Z2‑
R
x1
‑
C(＝O)
‑
(A')或
‑
N(R
e
)
‑
R
x1
‑
C(＝O)
‑
(D')，并且另两者各自独立地选自
‑
H，具有1至10个碳原子的任选取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基，聚乙二醇单元
‑
(CH2CH2O)
n
‑
R
c
，卤素，胍[
‑
NH(C＝NH)NH2]，
‑
OR，
‑
NR'R”，
‑
NO2，
‑
NR'COR”，
‑
SR，
‑
SOR'，
‑
SO2R'，
‑
SO3H，
‑
OSO3H，
‑
SO2NR'R”，氰基，叠氮基，
‑
COR'，
‑
OCOR'，和
‑
OCONR'R”；Z1和Z2中的一者为
‑
C(＝O)
‑
，并且另一者为
‑
NR5‑
；P1为氨基酸残基或含有2至20之间个氨基酸残基的肽；R
x1
为具有1至10个碳原子的任选取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基；R
e
为
‑
H，具有1至10个碳原子的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基，或
‑
(CH2‑
CH2‑
O)
n
‑
R
k
，其中R
k
为
‑
H，具有1至6个碳原子的直链、支链、环状烷基，其任选地带有仲氨基(例如，
‑
NHR
101
)或叔氨基(
‑
NR
101
R
102
)基团，或5或6元含氮杂环，其中R
101
和R
102
各自独立地为具有1至10个碳原子的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基；R在每次出现时独立地选自由以下组成的群组：
‑
H，具有1至10个碳原子的任选取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基，聚乙二醇单元
‑
(CH2CH2O)
n
‑
R
c
，具有6至18个碳原子的任选取代的芳基，含有一个或多个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5至18元杂芳环，或含有1至6个独立地选自O、S、N和P的杂原子的任选取代的3至18元杂环；R'和R”各自独立地选自
‑
H，
‑
OH，
‑
OR，
‑
NHR，
‑
NR2，
‑
COR，具有1至10个碳原子的任选取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基，聚乙二醇单元
‑
(CH2CH2O)
n
‑
R
c
，和具有1至6个独立地选自O、S、N和P的杂原子的任选取代的3至18元杂环；R
c
为
‑
H或具有1至4个碳原子的任选取代的直链或支链烷基；n为整数1至24；X1'选自
‑
H，胺保护基，具有1至10个碳原子的任选取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基，聚乙二醇单元
‑
(CH2CH2O)
n
‑
R
c
，具有6至18个碳原子的任选取代的芳基，含有一个或多个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5至18元杂芳环，和含有1至6个独立地选自O、S、N和P的杂原子的任选取代的3至18元杂环；Y1'选自
‑
H，氧代基，具有1至10个碳原子的任选取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基，任选取代的6至18元芳基，含有一个或多个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5至18元杂芳环，具有1至6个杂原子的任选取代的3至18元杂环；R1、R2、R3、R4、R1'、R2'、R3'和R4'各自独立地选自由以下组成的群组：
‑
H，具有1至10个碳原子的任选取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基，聚乙二醇单元
‑
(CH2CH2O)
n
‑
R
c
，卤素，胍[
‑
NH(C＝NH)NH2]，
‑
OR，
‑
NR'R”，
‑
NO2，
‑
NCO，
‑
NR'COR”，
‑
SR，
‑
SOR'，
‑
SO2R'，
‑
SO3‑
H，
‑
OSO3H，
‑
SO2NR'R”，氰基，叠氮基，
‑
COR'，
‑
OCOR'，和
‑
OCONR'R”；R6为
‑
H、
‑
R、
‑
OR、
‑
SR、
‑
NR'R”、
‑
NO2或卤素；G为
‑
CH
‑
或
‑
N
‑
；A和A'相同或不同，并且独立地选自
‑
O
‑
、氧代(
‑
C(＝O)
‑
)、
‑
CRR'O
‑
、
‑
CRR'
‑
、
‑
S
‑
、
‑
CRR'S
‑
、
‑
NR5和
‑
CRR'N(R5)
‑
；并且R5在每次出现时独立地为
‑
H或具有1至10个碳原子的任选取代的直链或支链烷基。
42.如权利要求41所述的方法，其中D由下式表示：或为其药学上可接受的盐。43.如权利要求41或42所述的方法，其中L'、L”和L”'中的一者由式(A')或(D')表示，并且另外两者为：
‑
H，具有1至6个碳原子的直链或支链烷基，卤素，
‑
OH，(C1‑
C6)烷氧基，或
‑
NO2。44.如权利要求43所述的方法，其中L'由式(A')表示；并且L”和L”'均为
‑
H。45.如权利要求43所述的方法，L'由式(D')表示；并且L”和L”'均为
‑
H。46.如权利要求41
‑
45中任一项所述的方法，其中R
x1
为具有1至6个碳原子的直链、支链或环状烷基，其任选地被卤素、
‑
OH、
‑
SO3H、(C1‑
C3)烷基、(C1‑
C3)烷氧基、卤代(C1‑
C3)烷基或带电取代基或可离子化基团Q取代。47.如权利要求43
‑
46中任一项所述的方法，其中L'由下式表示：
‑
NR5‑
P1‑
C(＝O)
‑
(CR
a
R
b
)
s
‑
C(＝O)
‑
(B1')；
‑
NR5‑
P1‑
C(＝O)
‑
Cy
‑
(CR
a
R
b
)
s1'
‑
C(＝O)
‑
(B2')；
‑
C(＝O)
‑
P1‑
NR5‑
(CR
a
R
b
)
s
‑
C(＝O)
‑
(C1')或
‑
C(＝O)
‑
P1‑
NR5‑
Cy
‑
(CR
a
R
b
)
s1'
‑
C(＝O)
‑
(C2')，其中：R
a
和R
b
在每次出现时各自独立地为
‑
H、(C1‑
C3)烷基或带电取代基或可离子化基团Q；s为整数1至6；s1'为0或整数1至6；并且Cy为具有5或6个环碳原子的环状烷基，其任选地被卤素、
‑
OH、(C1‑
C3)烷基、(C1‑
C3)烷氧基或卤代(C1‑
C3)烷基取代。48.如权利要求47所述的方法，其中R
a
和R
b
均为H；式(B2')和(C2')中的Cy为环己烷；并且R5为H或Me。49.如权利要求47或48所述的方法，其中s1'为0或1。50.如权利要求41
‑
49中任一项所述申的方法，其中所述带电取代基或可离子化基团Q为i)
‑
SO3H、
‑
Z'
‑
SO3H、
‑
OPO3H2、
‑
Z'
‑
OPO3H2、
‑
PO3H2、
‑
Z'
‑
PO3H2、
‑
CO2H、
‑
Z'
‑
CO2H、
‑
NR
11
R
12
或
‑
Z'
‑
NR
11
R
12
或其药学上可接受的盐；或ii)
‑
N
+
R
14
R
15
R
16
X
‑
或
‑
Z'
‑
N
+
R
14
R
15
R
16
X
‑
；Z'为任选取代的亚烷基、任选取代的亚环烷基或任选取代的亚苯基；R
14
至R
16
各自独立地为任选取代的烷基；并且X
‑
为药学上可接受的阴离子。51.如权利要求50所述的方法，其中Q为
‑
SO3H或其药学上可接受的盐。52.如权利要求41
‑
51中任一项所述的方法，其中P1为含有2至10个氨基酸残基的肽。53.如权利要求52所述的方法，其中P1为含有2至5个氨基酸残基的肽。54.如权利要求53所述的方法，其中P1为Gly
‑
Gly
‑
Gly、Ala
‑
Val、Val
‑
Cit、Val
‑
Lys、Phe
‑
Lys、Lys
‑
Lys、Ala
‑
Lys、Phe
‑
Cit、Leu
‑
Cit、Ile
‑
Cit、Trp、Cit、Phe
‑
Ala、Phe
‑
N9‑
甲苯磺酰基
‑
Arg、Phe
‑
N9‑
硝基
‑
Arg、Phe
‑
Phe
‑
Lys、D
‑
Phe
‑
Phe
‑
Lys、Gly
‑
Phe
‑
Lys、Leu
‑
Ala
‑
Leu、Ile
‑
Ala
‑
Leu、Val
‑
Ala
‑
Val、Ala
‑
Leu
‑
Ala
‑
Leu(SEQ ID NO:1)、β
‑
Ala
‑
Leu
‑
Ala
‑
Leu(SEQ ID NO:2)、Gly
‑
Phe
‑
Leu
‑
Gly(SEQ ID NO:3)、Val
‑
Arg、Arg
‑
Arg、Val
‑
D
‑
Cit、Val
‑
D
‑
Lys、Val
‑
D
‑
Arg、D
‑
Val
‑
Cit、D
‑
Val
‑
Lys、D
‑
Val
‑
Arg、D
‑
Val
‑
D
‑
Cit、D
‑
Val
‑
D
‑
Lys、D
‑
Val
‑
D
‑
Arg、D
‑
Arg
‑
D
‑
Arg、Ala
‑
Ala、Ala
‑
D
‑
Ala、D
‑
Ala
‑
Ala、D
‑
Ala
‑
D
‑
Ala、Ala
‑
Met、Gln
‑
Val、Asn
‑
Ala、Gln
‑
Phe和Gln
‑
Ala。55.如权利要求5所述的方法，其中P1为Gly
‑
Gly
‑
Gly、Ala
‑
Val、Ala
‑
Ala、Ala
‑
D
‑
Ala、D
‑
Ala
‑
Ala或D
‑
Ala
‑
D
‑
Ala。56.如权利要求41
‑
55中任一项所述的方法，其中X1'选自由以下组成的群组：
‑
H，
‑
OH，具有1至10个碳原子的任选取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基，和苯基；并且Y1'选自由以下组成的群组：
‑
H，氧代基，具有1至10个碳原子的任选取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基。57.如权利要求56所述的方法，其中X1'为
‑
H、
‑
OH、(C1‑
C3)烷基、卤代(C1‑
C3)烷基或苯基；并且Y1'为
‑
H、氧代基、(C1‑
C3)烷基或卤代(C1‑
C3)烷基。58.如权利要求56所述的方法，其中X1'为
‑
H、
‑
OH或
‑
Me；并且Y1'为
‑
H或氧代。59.如权利要求56所述的方法，其中X1'为
‑
H；并且Y1'为
‑
H。60.如权利要求41
‑
59中任一项所述的方法，其中A和A'相同或不同，并且选自
‑
O
‑
和
‑
S
‑
。61.如权利要求60所述的方法，其中A和A'为
‑
O
‑
。62.如权利要求41
‑
61中任一项所述的方法，其中R6为
‑
OMe。63.如权利要求41
‑
62中任一项所述的方法，其中R1、R2、R3、R4、R1'、R2'、R3'和R4'独立地为
‑
H、卤素、
‑
NO2、
‑
OH、(C1‑
C3)烷基、卤代(C1‑
C3)烷基或(C1‑
C3)烷氧基。64.如权利要求63所述的方法，其中R1、R2、R3、R4、R1'、R2'、R3'和R4'全部为
‑
H。65.如权利要求41
‑
64中任一项所述的方法，其中R、R'、R”和R5各自独立地为
‑
H或(C1‑
C3)烷基。66.如权利要求41
‑
55中任一项所述的方法，其中：R1、R2、R3、R4、R1'、R2'、R3'和R4'全部为
‑
H；R6为
‑
OMe；X1'和Y1'均为
‑
H；并且A和A'为
‑
O
‑
。67.如权利要求41所述的方法，其中D由以下结构式表示：
或为其药学上可接受的盐。68.如权利要求1
‑
67中任一项所述的方法，其中
‑
L
‑
由以下结构式表示：或为其药学上可接受的盐，其中：s1为共价连接至D的位点；s2为共价连接至马来酰亚胺基团的位点；R
23
和R
24
在每次出现时独立地为H或任选取代的烷基；m'为0与10之间的整数；并且R
h
'为H或任选取代的烷基。69.如权利要求68所述的方法，其中R
23
和R
24
均为H；并且m'为1与6之间的整数。70.如权利要求68或69所述的方法，其中R
h
'为H。71.如权利要求68所述的方法，其中L由以下结构式表示：或为其药学上可接受的盐。
72.如权利要求1
‑
40中任一项所述的方法，其中所述含亚胺细胞毒性剂由下式表示：或为其药学上可接受的盐，并且所述修饰的细胞毒性剂由下式表示：或为其药学上可接受的盐。73.如权利要求72所述的方法，其中所述修饰的细胞毒性剂由下式表示：或为其钠盐或钾盐。74.如权利要求73所述的方法，其中所述修饰的细胞毒性剂由下式表示：75.如权利要求1
‑
40中任一项所述的方法，其中D由下式表示：
或为其药学上可接受的盐，其中：X'选自由以下组成的群组：
‑
H，
‑
OH，具有1至10个碳原子的取代或未取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基，苯基和胺保护基；Y'选自由以下组成的群组：
‑
H、氧代基、具有1至10个碳原子的取代或未取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基；A和A'选自
‑
O
‑
和
‑
S
‑
；W'不存在，或选自
‑
O
‑
、
‑
N(R
e
)
‑
、
‑
N(R
e
)
‑
C(＝O)
‑
、
‑
N(C(＝O)R
e
)
‑
、
‑
S
‑
或
‑
CH2‑
S
‑
、
‑
CH2NR
e
‑
；R
x
不存在，或选自具有1至10个碳原子的直链、支链或环状烷基；R
e
为
‑
H，具有1至10个碳原子的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基，或
‑
(CH2‑
CH2‑
O)
n
‑
R
k
，其中R
k
为
‑
H，具有1至6个碳原子的直链、支链、环状烷基，其任选地带有仲氨基(例如，
‑
NHR
101
)或叔氨基(
‑
NR
101
R
102
)基团，或5或6元含氮杂环，其中R
101
和R
102
各自独立地为具有1至10个碳原子的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基；n为整数1至24；
G选自
‑
CH
‑
或
‑
N
‑
；R6为
‑
H、
‑
R、
‑
OR、
‑
SR、
‑
NR'R”、
‑
NO2或卤素；并且R为
‑
H，具有1至10个碳原子的任选取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基，或PEG基团
‑
(CH2CH2O)
n
‑
R
c
，其中n为整数1至24，并且R
c
为具有1至4个碳原子的直链或支链烷基；R'和R”各自独立地选自
‑
H，
‑
OH，
‑
OR，
‑
NRR
g
'，
‑
COR，具有1至10个碳原子的任选取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基，具有6至18个碳原子的任选取代的芳基，具有1至6个选自O、S、N和P的杂原子的任选取代的3至18元杂环，PEG基团
‑
(CH2CH2O)
n
‑
R
c
，并且R
g
'为
‑
H，具有1至10个碳原子的任选取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基，或PEG基团
‑
(CH2CH2O)
n
‑
R
c
。76.如权利要求75所述的方法，其中D由以下结构式表示：或为其药学上可接受的盐。77.如权利要求75或76所述的方法，其中：X'和Y'均为
‑
H；A和A'均为
‑
O
‑
；R6为
‑
OMe；W'为
‑
N(R
e
)
‑
或
‑
N(R
e
)
‑
C(＝O)
‑
；R
e
为
‑
H，具有1至4个碳原子的直链或支链烷基，或
‑
(CH2‑
CH2‑
O)
n
‑
R
k
，其中R
k
为
‑
H，具有1至4个碳原子的直链或支链烷基；n为整数2至6；并且R
x
为具有1至6个碳原子的直链或支链烷基。78.如权利要求75所述的方法，其中D由以下结构式表示：
或为其药学上可接受的盐。79.如权利要求75
‑
78中任一项所述的方法，其中L由以下结构式表示：或为其药学上可接受的盐，其中：s1为共价连接至D的位点，并且s2为共价连接至马来酰亚胺基团的位点；E为
‑
(CR
10
R
11
)
q
‑
、环烷基或环烷基烷基；Z为不存在、
‑
SO2NR9‑
、
‑
NR9SO2‑
、
‑
C(＝O)
‑
NR9‑
、
‑
NR9‑
C(＝O)
‑
、
‑
C(＝O)
‑
O
‑
、
‑
O
‑
C(＝O)
‑
、
‑
C(＝O)
‑
NR9‑
(CH2CH2O)
p
‑
、
‑
NR9‑
C(＝O)
‑
(CH2CH2O)
p
‑
、
‑
(OCH2CH2)
p
‑
C(＝O)NR9‑
或
‑
(OCH2CH2)
p
‑
NR9‑
C(＝O)
‑
；p为整数1至24；Q为H、带电取代基或可离子化基团；R9、R
10
、R
11
、R
12
和R
13
在每次出现时独立地为H或任选取代的烷基；并且，
q和r在每次出现时独立地为0与10之间的整数。80.如权利要求79所述的方法，其中E为
‑
(CR
10
R
11
)
q
‑
。81.如权利要求79所述的方法，其中E为82.如权利要求79
‑
81中任一项所述的方法，其中Z为
‑
C(＝O)
‑
NR9‑
或
‑
NR9‑
C(＝O)
‑
。83.如权利要求82所述的方法，其中R9为
‑
H。84.如权利要求79
‑
83中任一项所述的方法，其中Q为：i)H；ii)
‑
SO3H、
‑
Z'
‑
SO3H、
‑
OPO3H2、
‑
Z'
‑
OPO3H2、
‑
PO3H2、
‑
Z'
‑
PO3H2、
‑
CO2H、
‑
Z'
‑
CO2H、
‑
NR
11
R
12
或
‑
Z'
‑
NR
14
R
15
或其药学上可接受的盐；或，iii)
‑
N
+
R
14
R
15
R
16
X
‑
或
‑
Z'
‑
N
+
R
14
R
15
R
16
X
‑
；Z'为任选取代的亚烷基、任选取代的亚环烷基或任选取代的亚苯基；R
14
、R
15
和R
16
各自独立地为任选取代的烷基；并且，X
‑
为药学上可接受的阴离子。85.如权利要求84所述的方法，其中Q为H或
‑
SO3H或其药学上可接受的盐。86.如权利要求78
‑
85中任一项所述的方法，其中R9、R
10
、R
11
、R
12
和R
13
全部为H；并且q和r各自独立地为1与6之间的整数。87.如权利要求79所述的方法，其中：R
12
和R
13
在每次出现时各自独立地为H或(C1‑
C3)烷基；Q为H或
‑
SO3H或其药学上可接受的盐；Z为
‑
C(＝O)
‑
NR9‑
或
‑
NR9‑
C(＝O)
‑
；R9为H或(C1‑
C3)烷基；E为
‑
(CR
10
R
11
)
q
‑
；R
10
和R
11
在每次出现时独立为H或(C1‑
C3)烷基；且q和r各为整数1至5。88.如权利要求79所述的方法，其中L由以下结构式中的任一者表示：或为其药学上可接受的盐。89.如权利要求75
‑
79中任一项所述的方法，其中L由以下结构式表示：
或为其药学上可接受的盐，其中：s1为共价连接至D的位点；s2为共价连接至马来酰亚胺基团的位点；R
19
、R
20
、R
21
和R
22
在每次出现时独立为H或任选取代的烷基；m和n各自独立地为0与10之间的整数；R
h
为H或任选取代的烷基；P
L
为任选取代的亚烷基、
‑
(CH2‑
CH2‑
O)
j
‑
(其中氧原子连接至与P连接的
‑
(C＝O)
‑
基团)、氨基酸残基或含有2至20个氨基酸残基的肽；并且j为整数1至24。90.如权利要求89所述的方法，其中R
19
、R
20
、R
21
和R
22
各自为H；并且m和n各自独立地为1与6之间的整数。91.如权利要求89或90所述的方法，其中P
L
为氨基酸残基或含有2至10个氨基酸残基的肽。92.如权利要求91所述的方法，其中P
L
为含有2至5个氨基酸残基的肽。93.如权利要求92所述的方法，其中P
L
选自由以下组成的群组：Ala
‑
Val、Val
‑
Ala、Val
‑
Cit、Cit
‑
Val、Val
‑
Lys、Phe
‑
Lys、Lys
‑
Lys、Ala
‑
Lys、Phe
‑
Cit、Leu
‑
Cit、Ile
‑
Cit、Trp
‑
Cit、Phe
‑
Ala、Phe
‑
N9‑
甲苯磺酰基
‑
Arg、Phe
‑
N9‑
硝基
‑
Arg、Phe
‑
Phe
‑
Lys、D
‑
Phe
‑
Phe
‑
Lys、Gly
‑
Phe
‑
Lys、Leu
‑
Ala
‑
Leu、Ile
‑
Ala
‑
Leu、Val
‑
Ala
‑
Val、Ala
‑
Leu
‑
Ala
‑
Leu(SEQ ID NO:1)、β
‑
Ala
‑
Leu
‑
Ala
‑
Leu(SEQ ID NO:2)、Gly
‑
Phe
‑
Leu
‑
Gly(SEQ ID NO:3)、Val
‑
Arg、Arg
‑
Arg、Val
‑
D
‑
Cit、Val
‑
D
‑
Lys、Val
‑
D
‑
Arg、D
‑
Val
‑
Cit、D
‑
Val
‑
Lys、D
‑
Val
‑
Arg、D
‑
Val
‑
D
‑
Cit、D
‑
Val
‑
D
‑
Lys、D
‑
Val
‑
D
‑
Arg、D
‑
Arg
‑
D
‑
Arg、Ala
‑
Ala、Ala
‑
D
‑
Ala、D
‑
Ala
‑
Ala、D
‑
Ala
‑
D
‑
Ala.、Ala
‑
Met、Met
‑
Ala、Gln
‑
Val、Asn
‑
Ala、Gln
‑
Phe、Gln
‑
Ala、Gly
‑
Gly
‑
Gly、Ala
‑
Ala
‑
Ala、D
‑
Ala
‑
Ala
‑
Ala、Ala
‑
D
‑
Ala
‑
Ala、Ala
‑
Ala
‑
D
‑
Ala、Ala
‑
Val
‑
Cit、Ala
‑
Val
‑
Ala和β
‑
Ala
‑
Gly
‑
Gly
‑
Gly。94.如权利要求93所述的方法，其中P
L
为Gly
‑
Gly
‑
Gly、Ala
‑
Ala
‑
Ala、D
‑
Ala
‑
Ala
‑
Ala、Ala
‑
D
‑
Ala
‑
Ala、Ala
‑
Val
‑
Ala或β
‑
Ala
‑
Gly
‑
Gly
‑
Gly。95.如权利要求89所述的方法，其中L由以下结构式表示：或为其药学上可接受的盐。96.如权利要求1
‑
40中任一项所述的方法，其中所述含亚胺细胞毒性剂由下式表示：
或为其药学上可接受的盐，并且所述修饰的细胞毒性剂由下式表示：或为其药学上可接受的盐。97.如权利要求96所述的方法，其中所述修饰的细胞毒性剂由下式表示：
或为其钠盐或钾盐。98.如权利要求97所述的方法，其中所述修饰的细胞毒性剂由下式表示：99.如权利要求1
‑
39中任一项所述的方法，其中D为含亚胺吲哚啉并苯并二氮(PBD)化合物。100.如权利要求99所述的方法，其中D由下式表示：
或为其药学上可接受的盐，其中：W选自C＝O、C＝S、CH2、BH、SO和SO2；X1'选自
‑
H，胺保护基，具有1至10个碳原子的任选取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基，聚乙二醇单元
‑
(CH2CH2O)
n
‑
R
c
，具有6至18个碳原子的任选取代的芳基，含有一个或多个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5至18元杂芳环，和含有1至6个独立地选自O、S、N和P的杂原子的任选取代的3至18元杂环；Y1'选自
‑
H，氧代基，具有1至10个碳原子的任选取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基，任选取代的6至18元芳基，含有一个或多个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5至18元杂芳环，具有1至6个杂原子的任选取代的3至18元杂环；R6为
‑
H、
‑
R、
‑
OR、
‑
SR、
‑
NR'R”、
‑
NO2或卤素；A和A'相同或不同，并且独立地选自
‑
O
‑
、氧代(
‑
C(＝O)
‑
)、
‑
CRR'O
‑
、
‑
CRR'
‑
、
‑
S
‑
、
‑
CRR'S
‑
、
‑
NR5和
‑
CRR'N(R5)
‑
，R在每次出现时独立地选自由以下组成的群组：
‑
H，具有1至10个碳原子的任选取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基，聚乙二醇单元
‑
(CH2CH2O)
n
‑
R
c
，具有6至18个碳原子的任选取代的芳基，含有一个或多个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5至18元杂芳环，或含有1至6个独立地选自O、S、N和P的杂原子的任选取代的3至18元杂环；R'和R”各自独立地选自
‑
H，
‑
OH，
‑
OR，
‑
NHR，
‑
NR2，
‑
COR，具有1至10个碳原子的任选取代的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基，聚乙二醇单元
‑
(CH2CH2O)
n
‑
R
c
，和具有1至6个独立地选自O、S、N和P的杂原子的任选取代的3至18元杂环；R
c
为
‑
H，或取代或未取代的具有1至4个碳原子的直链或支链烷基，或键合至反应性基团的连接基团；n为整数1至24；R5在每次出现时独立地为
‑
H或具有1至10个碳原子的任选取代的直链或支链烷基；D0...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：伊缪诺金公司，
类型：发明
国别省市：