本发明专利技术公开了一种定量测定心肌肌钙蛋白T浓度的试剂盒，包括试剂1，所述试剂1包括保存液和分散在所述保存液中的第一复合物微球和第二复合物微球；所述第一复合物微球由第一粒径胶乳微球、链霉亲和素、生物素和第一心肌肌钙蛋白T单克隆抗体复合形成；所述第二复合物微球由第二粒径胶乳微球、链霉亲和素、生物素和第二心肌肌钙蛋白T单克隆抗体复合形成。本发明专利技术能显著提高现有胶乳增强免疫比浊法的灵敏度。敏度。敏度。
【技术实现步骤摘要】
定量测定心肌肌钙蛋白T浓度的试剂盒
[0001]本专利技术涉及生化检测
，更具体地，涉及一种定量测定心肌肌钙蛋白T浓度的试剂盒。
技术介绍
[0002]心肌肌钙蛋白T(TnT)是一种用于早期诊断心肌损伤的确定性标志物。
[0003]检测心肌肌钙蛋白T的方法包括化学发光免疫法、胶乳增强免疫比浊法、酶联免疫法等等，其中，化学发光免疫法的检测灵敏度最高，并且检测准确、可靠，而胶乳增强免疫比浊法可以在全自动生化分析仪上测定，更方便、快速，且成本低，适用于急诊快速检测以及大规模样本批量检测，但是，目前胶乳增强免疫比浊法的灵敏度没有化学发光免疫法高，达不到超敏的要求。
[0004]现有胶乳增强免疫比浊法中，胶乳微球通常直接偶联心肌肌钙蛋白T的抗体，导致胶乳试剂测试的灵敏度较低，达不到超敏的要求。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种基于胶乳增强免疫比浊法的定量测定心肌肌钙蛋白T浓度的试剂盒，提高现有胶乳增强免疫比浊法的灵敏度。
[0006]为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：
[0007]一种定量测定心肌肌钙蛋白T浓度的试剂盒，包括试剂1，所述试剂1包括保存液和分散在所述保存液中的第一复合物微球和第二复合物微球；
[0008]所述第一复合物微球由第一粒径胶乳微球、链霉亲和素、生物素和第一心肌肌钙蛋白T单克隆抗体复合形成；
[0009]所述第二复合物微球由第二粒径胶乳微球、链霉亲和素、生物素和第二心肌肌钙蛋白T单克隆抗体复合形成；
[0010]所述第一心肌肌钙蛋白T单克隆抗体和所述第二心肌肌钙蛋白T单克隆抗体与心肌肌钙蛋白T结合的位点不相同；
[0011]所述第一粒径胶乳微球的平均粒径为60nm～100nm；
[0012]所述第二粒径胶乳微球的平均粒径为200nm～300nm；
[0013]所述第一复合物微球中，所述第一心肌肌钙蛋白T单克隆抗体与所述生物素的质量比为2:1～1:3；所述第一粒径胶乳微球和所述链霉亲和素的质量比为0.5:1～2:1，所述链霉亲和素结合所述第一粒径胶乳微球的质量与所述第一心肌肌钙蛋白T单克隆抗体结合所述生物素的质量比为0.5:1～5:1；
[0014]所述第二复合物微球中，所述第二心肌肌钙蛋白T单克隆抗体与所述生物素的摩尔比为2:1～1:3；所述链霉亲和素和所述第二粒径胶乳微球的质量比为0.5:1～2:1，所述链霉亲和素结合所述第二粒径胶乳微球的质量与所述第二心肌肌钙蛋白T单克隆抗体结合所述生物素的质量比为0.5:1～5:1；
[0015]所述第一粒径胶乳微球的质量占所述试剂1的质量百分比为0.02％～0.2％；
[0016]所述第二粒径胶乳微球的质量占所述试剂1的质量百分比为0.02％～0.2％。
[0017]实施本专利技术实施例，将具有如下有益效果：
[0018]本专利技术实施例通过在胶乳微球与抗体之间增加链霉亲和素和生物素，相当于增加了信号放大系统，每个链霉亲和素能结合4个分子的生物素，不仅提高了复合物的整体粒径，而且复合物中结合的抗体的数量明显增加，可以显著提高检测灵敏度。经实验验证，本专利技术试剂盒的检测灵敏度为0.04ng/mL，较现有胶乳增强免疫比浊法的试剂盒，具有显著增强的检测灵敏度，且可以达到与化学发光法相当的检测灵敏度。
[0019]本专利技术中，链霉亲和素和生物素的结合稳定性更好，使复合物微球能耐溶血剂，因此，本专利技术的试剂盒中可以加入溶血剂，能对全血样本进行检测，使检测更方便。现有定量测定心肌肌钙蛋白T浓度的方法均不能适用全血样本。
[0020]本专利技术通过连接单克隆抗体，减少非特异性结合，提高特异性，以及通过连接两种单克隆抗体，增加与抗原结合的位点，进一步提高检测灵敏度。
[0021]本专利技术通过采用两种粒径的胶乳微球形成两种大小的复合物微球，可以同时增加检测的线性响应宽度和检测灵敏度。
[0022]综上，本专利技术采用两种粒径的胶乳微球通过链霉亲和素和生物素分别结合不同单克隆抗体的复合物与抗原进行特异性反应，不仅能够显著改善检测灵敏度，而且能加入溶血剂检测全血样本。
附图说明
[0023]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0024]其中：
[0025]图1是本专利技术实施例1和对比例1的相关性曲线。
[0026]图2是本专利技术实施例2和对比例1的相关性曲线。
[0027]图3是本专利技术实施例3和对比例1的相关性曲线。
具体实施方式
[0028]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0029]本专利技术公开了一种定量测定心肌肌钙蛋白T浓度的试剂盒，包括试剂1，试剂1包括保存液和分散在保存液中的第一复合物微球和第二复合物微球；第一复合物微球由第一粒径胶乳微球、链霉亲和素、生物素和第一心肌肌钙蛋白T单克隆抗体复合形成；第二复合物微球由第二粒径胶乳微球、链霉亲和素、生物素和第二心肌肌钙蛋白T单克隆抗体复合形成；第一心肌肌钙蛋白T单克隆抗体和第二心肌肌钙蛋白T单克隆抗体与心肌肌钙蛋白T结
合的位点不相同。
[0030]第一粒径胶乳微球的平均粒径为60nm～100nm，优选为60nm
‑
80nm；第二粒径胶乳微球的平均粒径为200nm～300nm，优选为200nm～250nm。
[0031]第一复合物微球中，第一心肌肌钙蛋白T单克隆抗体与生物素的质量比为2:1～1:3，优选为1:2～1:3；第一粒径胶乳微球和链霉亲和素的质量比为0.5:1～2:1，优选为0.5:1～1:1；链霉亲和素结合第一粒径胶乳微球的质量与第一心肌肌钙蛋白T单克隆抗体结合生物素的质量比为0.5:1～5:1，优选为1:1～2:1；。
[0032]第二复合物微球中，第二心肌肌钙蛋白T单克隆抗体与生物素的摩尔比为2:1～1:3，优选为1:2～1:3；链霉亲和素和第二粒径胶乳微球的质量比为0.5:1～2:1，优选为0.5:1～1:1；链霉亲和素结合第二粒径胶乳微球的质量与第二心肌肌钙蛋白T单克隆抗体结合生物素的质量比为0.5:1～5:1，优选为1:1～2:1；。
[0033]第一粒径胶乳微球的质量占试剂1的质量百分比为0.02％～0.2％，优选为0.05％
‑
0.1％；第二粒径胶乳微球的质量占试剂1的质量百分比为0.02％～0.2％，优选为0.05％
‑
0.1％；。
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种定量测定心肌肌钙蛋白T浓度的试剂盒，其特征在于，包括试剂1，所述试剂1包括保存液和分散在所述保存液中的第一复合物微球和第二复合物微球；所述第一复合物微球由第一粒径胶乳微球、链霉亲和素、生物素和第一心肌肌钙蛋白T单克隆抗体复合形成；所述第二复合物微球由第二粒径胶乳微球、链霉亲和素、生物素和第二心肌肌钙蛋白T单克隆抗体复合形成；所述第一心肌肌钙蛋白T单克隆抗体和所述第二心肌肌钙蛋白T单克隆抗体与心肌肌钙蛋白T结合的位点不相同；所述第一粒径胶乳微球的平均粒径为60nm～100nm；所述第二粒径胶乳微球的平均粒径为200nm～300nm；所述第一复合物微球中，所述第一心肌肌钙蛋白T单克隆抗体与所述生物素的质量比为2:1～1:3；所述第一粒径胶乳微球和所述链霉亲和素的质量比为0.5:1～2:1，所述链霉亲和素结合所述第一粒径胶乳微球的质量与所述第一心肌肌钙蛋白T单克隆抗体结合所述生物素的质量比为0.5:1～5:1；所述第二复合物微球中，所述第二心肌肌钙蛋白T单克隆抗体与所述生物素的摩尔比为2:1～1:3；所述链霉亲和素和所述第二粒径胶乳微球的质量比为0.5:1～2:1，所述链霉亲和素结合所述第二粒径胶乳微球的质量与所述第二心肌肌钙蛋白T单克隆抗体结合所述生物素的质量比为0.5:1～5:1；所述第一粒径胶乳微球的质量占所述试剂1的质量百分比为0.02％～0.2％；所述第二粒径胶乳微球的质量占所述试剂1的质量百分比为0.02％～0.2％。2.根据权利要求1所述的定量测定心肌肌钙蛋白T浓度的试剂盒，其特征在于，还包括试剂2，所述试剂2包括溶血剂，所述溶血剂在所述试剂2中的浓度为0.5g/L～10g/L。3.根据权利要求2所述的定量测定心肌肌钙蛋白T浓度的试剂盒，其特征在于，所述溶血剂包括皂素、Tritonx
‑
100、Tritonx
‑
405、十二烷基苯磺酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸酯盐和十八烷基二甲基苄基氯化铵中的一种或两种以上。4.根据权利要求3所述的定量测定心肌肌钙蛋白T浓度的试剂盒，其特征在于，所述试剂2还包括以下浓度的组分：25mmol/L～50mmol/L的缓冲液2、0.5g/L～10g/L的表面活性剂和0.5g/L～5g/L的防腐剂2。5.根据权利要求4所述的定量测定心肌肌钙蛋白T浓度的试剂盒，其特征在于，所述试剂2的pH值为6.0～9.0；所述缓冲液2包括PBS缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、BS缓冲液、HEPES缓冲液、MOPSO缓冲液和MES缓冲液中的一种或两种以上；所述表面活性剂包括聚乙烯吡络烷酮、丙三醇、PEG6000、PEG8000、PEG10000、PEG20000、Tween
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20、Tween
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40和...
【专利技术属性】
技术研发人员：张文琪，王兴红，颜栋，
申请(专利权)人：深圳市科曼医疗设备有限公司，
类型：发明
国别省市：
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