IGF2BP3基因在治疗胶质瘤中的应用制造技术

本发明专利技术公开了IGF2BP3基因在治疗胶质瘤中的应用。本发明专利技术首先在各类胶质瘤细胞中过表达或敲低IGF2BP3基因，检测胶质瘤的生存情况以及在共培养系统中检测中性粒细胞对肿瘤细胞的促增殖情况，表明胶质瘤中IGF2BP3的高表达可以通过m6A途径促进肿瘤细胞分泌CSF3促进中性粒细胞炎性死亡，促进肿瘤进展，进一步地，本发明专利技术通过体内实验表明，采用小分子抑制剂靶向抑制IGF2BP3基因，可以抑制胶质瘤的生长，并提高胶质瘤小鼠生存期，靶向抑制IGF2BP3可以促进中性粒细胞抑炎作用从而抑制胶质瘤生长。本发明专利技术为治疗胶质瘤提供了一种新的分子靶标，具有较高的潜在临床价值和良好的应用前景。有较高的潜在临床价值和良好的应用前景。有较高的潜在临床价值和良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
IGF2BP3基因在治疗胶质瘤中的应用


[0001]本专利技术涉及IGF2BP3基因在治疗胶质瘤中的应用，属于生物医药


技术介绍

[0002]胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性恶性脑肿瘤，由胶质细胞或前体细胞突变产生。目前临床上对胶质瘤治疗采取手术切除联合放化疗辅助药物治疗方式，但是由于极易复发且预后较差，传统治疗方式的胶质瘤患者中位生存期不足15个月。究其原因是针对肿瘤细胞的治疗方法忽视了肿瘤微环境在肿瘤发生发展中的作用。
[0003]胶质瘤免疫微环境中浸润的免疫细胞主要是髓系细胞，其中中性粒细胞是重要组成部分，但中性粒细胞在胶质瘤发生发展中的作用仍有待探讨。Netosis是中性粒细胞的炎症性细胞死亡方式。在细菌感染模型中首次发现中性粒细胞的炎症性死亡可以促进肿瘤的增殖和侵袭，但中性粒细胞炎性死亡遗传学调控尚不明确。
[0004]M6a是RNA中腺苷(A)第6N位的甲基化，是真核生物mRNA中最丰富的表观转录组修饰。IGF2BP3是胰岛素样生长因子结合蛋白(IGF2BPs，包括IGF2BP1/2/3)家族的重要成员。我们通过临床芯片分析发现，IGF2BP3的高水平与胶质母细胞瘤患者生存期负相关。同时，体外研究也表明，IGF2BP3是一个通过转录后调控刺激肿瘤生长、耐药和转移的强大因子。然而，截至目前，IGF2BP3在胶质瘤免疫微环境中的作用和机制尚不清楚。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是：为了解决现有的治疗胶质瘤的药物存在疗效及预后较差的技术问题，本专利技术提供了通过靶向中性粒细胞来改善胶质瘤免疫微环境的分子靶标IGF2BP3基因，胶质瘤中IGF2BP3的高表达可以通过m6A途径促进肿瘤细胞分泌CSF3促进中性粒细胞炎性死亡，促进肿瘤进展，而敲低IGF2BP3或通过小分子抑制剂抑制IGF2BP3的表达可以抑制胶质瘤的发生发展，并具有良好的预后。
[0006]为达到解决上述问题的目的，本专利技术所采取的技术方案是提供抑制IGF2BP3表达或活性的试剂在制备治疗胶质瘤的药物中的应用。
[0007]优选地，所述抑制IGF2BP3表达或活性的试剂表达特异性靶向抑制IGF2BP3表达的shRNA、siRNA或IGF2BP3小分子抑制剂。
[0008]优选地，所述shRNA的序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。
[0009]优选地，所述IGF2BP3小分子抑制剂包括JQ1和/或1
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BET151。
[0010]优选地，所述药物的剂型包括注射剂、片剂、粉剂、混悬剂、胶囊剂、丸剂或糖浆。
[0011]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0012]本专利技术提供了一种新的胶质瘤免疫治疗靶标IGF2BP3基因，胶质瘤中IGF2BP3的高表达可以通过m6A途径促进肿瘤细胞分泌CSF3促进中性粒细胞炎性死亡，促进肿瘤进展，对于临床上通过靶向中性粒细胞治疗胶质瘤提供了很好的理论基础和科学依据，同时，本专利技术通过体内实验表明，采用小分子抑制剂靶向抑制IGF2BP3基因，可以抑制胶质瘤的生长，
并提高胶质瘤小鼠生存期，靶向抑制IGF2BP3可以促进中性粒细胞抑炎作用从而抑制胶质瘤生长；本专利技术也为今后开发出具有更好治疗效果的药物奠定了理论基础和提供了科学依据，例如通过研发靶向IGF2BP3基因的拮抗剂联合抗CSF3的药物联合，有望取得更好的治疗效果。
附图说明
[0013]图1展示了IGF2BP3在胶质瘤细胞中高表达，具有促癌作用；其中，a为通过TCGA数据库分析胶质瘤患者IGF2BP3表达情况，胶质瘤分期和患者生存期与IGF2BP3表达的相关性；b为通过western blot检测在各个胶质瘤细胞系中IGF2BP3的表达情况；c为在各个细胞系中过表达或敲低IGF2BP3后IGF2BP3的表达情况通过western blot进行检测；d为平板克隆实验检测U87MG敲低IGF2BP3和对照组细胞的增殖情况；e为U87MG敲低IGF2BP3和对照组细胞在特定时间点的划痕修复情况；f为CCK8实验检测细胞的增殖情况；g为C57BL/6小鼠颅内注射相应的GL261肿瘤细胞后的荧光信号典型图；h为各组小鼠的荧光值定量；i为通过Kaplan
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Meier分析颅内种瘤小鼠的生存情况；ns：not significant，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；
[0014]图2展示了IGF2BP3可以通过m6A途径促进肿瘤细胞释放中性粒细胞集落刺激因子CSF3；其中，a～b为RNA
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seq富集到的基因进行GO分析，列出其中差异显著的前20位的信号通路及其中基因的差异表达情况；c～d为qPCR检测各个细胞系敲低和过表达IGF2BP3与对照组细胞中CSF3的mRNA表达情况；e为Elisa检测各个细胞系过表达IGF2BP3与对照组细胞中CSF3分泌情况；f为qPCR检测各个细胞系过表达IGF2BP3与对照组细胞中CSF3 mRNA稳定性；g为网站预测CSF3可能存在m6A位点构建相应的WT，MUT
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3'
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UTR质粒；h为双荧光素酶报告基因检测CSF3与IGF2BP3结合位点；i为Rip qpcr检测IGF2BP3与CSF3结合；ns：not significant，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001；
[0015]图3展示了IGF2BP3可以促进中性粒细胞炎性死亡促进胶质瘤生长；其中，a为胶质瘤中IGF2BP3表达水平与免疫细胞浸润相关性的分析；b为体外共培养系统的流程图；c为通过免疫荧光检测中性粒细胞炎性死亡标志物表达情况；d为各个组荧光值定量；e为通过共培养系统检测各组肿瘤细胞增殖情况；f为C57BL/6小鼠分为六组，分别注射对照组GL261细胞+PBS、对照组GL261细胞+JQ1、对照组GL261细胞+1
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BET151、IGF2BP3过表达GL261细胞+PBS、IGF2BP3过表达GL261细胞+JQ1以及IGF2BP3过表达GL261细胞+1
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BET151；其中，JQ1和1
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BET151是IGF2BP3小分子抑制剂；在第21天对小鼠进行荧光活体成像检测肿瘤大小；g为各组小鼠的荧光值定量；h为通过Kaplan
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Meier分析颅内种瘤小鼠的生存情况；i为通过免疫荧光检测各组小鼠中性粒细胞炎性死亡情况；ns：not significant，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
具体实施方式
[0016]为使本专利技术更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下。
[0017]下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抑制IGF2BP3表达或活性的试剂在制备治疗胶质瘤的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑制IGF2BP3表达或活性的试剂表达特异性靶向抑制IGF2BP3表达的shRNA、siRNA或IGF2BP3小分子抑制剂。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述shRNA的序列如SEQ ...

【专利技术属性】
技术研发人员：束敏峰，代玮玮，范卓阳，田若彤，余柳冰，高洋，张巍，杨国威，刘嵘，瞿旭东，颜志平，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：