一种分泌抗猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体的单克隆杂交瘤细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种分泌抗猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体的单克隆杂交瘤细胞株及其应用，属于生物医药领域。单克隆杂交瘤细胞株命名为312H

【技术实现步骤摘要】
一种分泌抗猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体的单克隆杂交瘤细胞株及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，特别是涉及一种分泌抗猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体的单克隆杂交瘤细胞株及其应用。

技术介绍

[0002]猪伪狂犬病(Porcine Pseudorabies，PR)是由猪伪狂犬病病毒(Porcine Pseudorabies Virus，PRV)引起的一种急性传染病。哺乳仔猪感染PRV均出现发热及神经症状，死亡率几乎高达100％；妊娠母猪感染PRV可导致出现流产、死胎、产弱仔和木乃伊胎。该病具有高度的传染性，极易通过空气、接触经呼吸道传播，给我国乃至全球养猪业造成了巨大的经济损失。尤其是2011年下半年以来，我国多个免疫Bartha K61株疫苗的猪场频繁暴发猪伪狂犬病，研究表明该疫情是由变异的PRV引起，现有疫苗不能对免疫猪只提供完全的保护。通过对PRV流行株进行全基因组遗传演化分析发现，我国当前的PRV流行株与国外流行株之间存在比较大的差异，国外流行株属于基因Ⅰ型，而国内流行株属于基因Ⅱ型，与国内以往毒株相比在分子水平和抗原性上也存在差异。PRV变异株的出现和流行，给我国预防和控制该病提出了新的任务和挑战。我们不仅要研制针对流行毒株的疫苗，同时也要研制针对新流行毒株的特异性和敏感性更好的诊断试剂。
[0003]对猪血清中的PRV抗体进行检测，一方面可以了解猪只免疫状况、合理安排疫苗接种时间，另一方面可以监测野毒感染状况，对该病的防控具有重要意义。糖蛋白gB是PRV的主要免疫原性蛋白之一，无论是弱毒活疫苗或灭活疫苗免疫还是野毒感染，都可以产生针对该蛋白的抗体，因此gB抗体也是伪狂犬病的主要检测抗体之一。
[0004]目前市场上检测gB抗体的商品化试剂盒主要是间接或阻断ELISA方法。所使用的包被抗原多为经典毒株(因为猪伪狂犬病病毒变异株2011年下半年才出现)或国外毒株，对现在流行的变异株抗体检测的敏感性欠佳。因此，对猪伪狂犬病病毒变异株进行深入研究，并应用其开发一种对现地流行的变异株抗体检测更为准确敏感的产品是目前亟待解决的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种分泌抗猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体的单克隆杂交瘤细胞株及其应用，以解决上述现有技术存在的问题。本专利技术的312H
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C3杂交瘤细胞株能够稳定分泌特异性识别PRV gB蛋白的单克隆抗体，可用于特异性检测PRV gB蛋白抗体的阻断ELISA方法的建立。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0007]本专利技术提供一种分泌抗猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体的单克隆杂交瘤细胞株312H
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C3，其已保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.23018，保藏日期为2021年8月4日。
[0008]本专利技术还提供一种所述的单克隆杂交瘤细胞株312H
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C3的构建方法，包括以完整的病毒粒子为免疫原获得免疫小鼠，取所述免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，对融合细胞进行筛选、纯化与鉴定的步骤；
[0009]所述病毒粒子为猪伪狂犬病病毒变异株HeN1，所述猪伪狂犬病病毒变异株HeN1的保藏编号为CGMCC No.6656。
[0010]本专利技术还提供一种由所述的单克隆杂交瘤细胞株312H
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C3制备的抗猪伪狂犬病病毒gB蛋白的抗体。
[0011]本专利技术还提供一种所述的杂交瘤细胞株312H
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C3或所述的抗体在制备检测猪伪狂犬病病毒的产品中的应用。
[0012]本专利技术还提供一种所述的杂交瘤细胞株312H
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C3或所述的抗体在制备检测猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体的产品中的应用。
[0013]本专利技术还提供一种所述的杂交瘤细胞株312H
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C3或所述的抗体在制备检测猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体的阻断ELISA试剂盒中的应用。
[0014]本专利技术还提供一种检测猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体的阻断ELISA试剂盒，包括所述的抗体和由猪伪狂犬病病毒包被的ELISA板；
[0015]在ELISA板中，所述猪伪狂犬病病毒为猪伪狂犬病病毒PRVTP株，保藏编号为CGMCCNo.12300。
[0016]进一步地，所述抗体由辣根过氧化物酶标记，所述猪伪狂犬病病毒为灭活病毒。
[0017]进一步地，还包括封闭液、洗涤液、稀释液、显色液和终止液。
[0018]本专利技术公开了以下技术效果：
[0019]本专利技术公开了分泌抗猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)gB蛋白的特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株312H
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C3、gB抗体阻断ELISA方法的建立与优化、及gB抗体阻断ELISA试剂盒的组装与应用。本专利技术的312H
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C3杂交瘤细胞株能够稳定分泌特异性识别PRV gB蛋白的单克隆抗体，可用于特异性检测PRV gB蛋白抗体的阻断ELISA方法的建立。
[0020]本专利技术的312H
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C3杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体可以用于制备阻断法抗体检测试剂盒，且酶标单抗最佳使用浓度可达1:4000，极大地节省了原材料。
[0021]本专利技术的312H
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C3杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体所识别抗原表位为构象表位，与线性表位相比，构象抗原表位更加稳定，特异性更高。本专利技术的包被抗原PRVTP株极易大量制备，抗原包被用量少，而且灭活的全病毒蛋白极大的维持了蛋白的天然结构，相比于原核表达蛋白具有更强的抗原性，因此，其对中国流行的猪伪狂犬病病毒变异株感染后的现地血清具有更高的特异性，敏感性。
[0022]基于312H
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C3建立的抗体检测试剂盒操作简易、特异性好、对猪伪狂犬病病毒变异株gB抗体的检测敏感性优于进口试剂盒和国内其他试剂盒，可以更好地评价猪群免疫状况。
附图说明
[0023]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获
得其他的附图。
[0024]图1为11株单抗与病毒抗原的反应原性分析，其中1
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11为11株单抗，对应编号同表1；12为阴性对照；
[0025]图2为PRV阳性血清对11株单抗与病毒抗原结合的阻断效应分析，其中1
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11为11株单抗，对应编号同表1；
[0026]图3为不同稀释度阳性血清对312H
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C3和1E7单抗与病毒结合的阻断效果比较；
[0027]图4为312H
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C3和1E7两株单抗识别抗原表位是否为线性表位的Western Blot鉴定，其中1代表蛋白Marker，2代表1E7本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分泌抗猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体的单克隆杂交瘤细胞株312H
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C3，其特征在于，其已保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.23018，保藏日期为2021年8月4日。2.一种如权利要求1所述的单克隆杂交瘤细胞株312H
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C3的构建方法，其特征在于，包括以完整的病毒粒子为免疫原获得免疫小鼠，取所述免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，对融合细胞进行筛选、纯化与鉴定的步骤；所述病毒粒子为猪伪狂犬病病毒变异株HeN1，所述猪伪狂犬病病毒变异株HeN1的保藏编号为CGMCCNo.6656。3.一种由权利要求1所述的单克隆杂交瘤细胞株312H
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C3制备的抗猪伪狂犬病病毒gB蛋白的抗体。4.一种如权利要求1所述的杂交瘤细胞株312H
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C3或如权利要求3所述的抗体在制备检测猪伪狂...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭金美，田志军，张洪亮，王倩，周国辉，
申请(专利权)人：哈尔滨国生生物科技股份有限公司哈尔滨维科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：