施氏假单胞菌XN05-1、其应用及所得植物抗盐菌剂制造技术

本发明专利技术提供了一种施氏假单胞菌XN05

【技术实现步骤摘要】
施氏假单胞菌XN05
‑
1、其应用及所得植物抗盐菌剂


[0001]本专利技术属于微生物
，尤其涉及到一种施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri XN05
‑
1、其应用及所得植物抗盐菌剂。

技术介绍

[0002][0003]高盐环境会对植物造成渗透胁迫、离子胁迫以及氧化胁迫，从而抑制植物的生长发育。土壤盐渍化严重危害作物生长，现有微生物菌剂虽在一定程度上提高植物耐盐性，但这些菌剂的环境适应性不强、耐盐度不高。越来越多的研究表明，根际微生物能够增加植物的抗盐能力，并且会与其宿主共同进化以抵抗外界胁迫，而耐盐植物之所以能够耐受较高的盐胁迫，除了自身的生理机制之外，根际微生物也发挥着重要的作用。因此，相比于普通土壤微生物，野生耐盐植物的根际微生物能够耐受更高的盐度，环境适应性更强，亟待开发利用。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri XN05
‑
1、其应用及所得植物抗盐菌剂，通过对获得的施氏假单胞菌进行耐盐和促生能力测定，发现其具有溶解有机磷的活性、具有较强的产生长素能力、能够产生胞外多糖(0.26mg/L)，同时具有良好的耐盐能力，可有效解决现有菌剂环境适应性不强、耐盐度不高的问题。
[0005]为了达到上述目的，本专利技术提供了一种施氏假单胞菌Pseudomonasstutzeri XN05
‑
1，其特征在于，保藏编号为CGMCC No.26683，于2023年02月27日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址中国北京。
[0006]作为优选，所述施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri XN05
‑
1具有如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列。
[0007]本专利技术还提供了一种根据上述技术方案所述的施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri XN05
‑
1的PCR扩增方法，包括以下步骤：
[0008]1)提取分离自土壤悬浊液中细菌菌株的基因组DNA；
[0009]2)以细菌菌株的基因组DNA为模板，使用上游引物和下游引物，采用rTaq酶进行PCR扩增；
[0010]其中：PCR反应体系为：2
×
Taq Master Mix 12.5μL、正反向引物(10μM)各1μL、DNA模板1μL、ddH2O 9.5μL，总体系25μL。
[0011]作为优选，扩增条件为：95℃预变性5min；95℃变性1min、55℃退火1min、72℃延伸1.5min，循环30次；最后72℃延伸10min。
[0012]作为优选，所述引物对为：
[0013]正向引物：5
’‑
AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
‑3’
；
[0014]反向引物：5
’‑
GGTTACCTTGTTACGACTT
‑3’
。
[0015]本专利技术还提供了一种根据上述技术方案所述的施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri XN05
‑
1在提高野大豆耐盐能力中的应用。
[0016]作为优选，所述施氏假单胞菌XN05
‑
1在每盆接种浓度为107CFU/g时，相比未接种的野大豆，根长提高114.01％，根重提高24.38％。
[0017]本专利技术还提供了一种植物抗盐菌剂，以上述技术方案所述的施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri XN05
‑
1为主要有效成分。
[0018]作为优选，所述植物为野大豆。
[0019]与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果在于：
[0020]本专利技术提供了一种施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri XN05
‑
1，通过对获得的施氏假单胞菌进行耐盐和促生能力测定，发现其具有溶解有机磷的活性、具有较强的产生长素能力(170.31μg/mL)、能够产生胞外多糖(0.26mg/L)，并且首次提出了可将该施氏假单胞菌用于提高野大豆耐盐能力中，具有良好的耐盐能力，在6％的NaCl浓度下仍然生长，其中最适NaCl浓度为3.0％，并且在每盆接种浓度为107CFU/g时，相比未接种的野大豆根长可提高114.01％，根重可提高24.38％。该施氏假单胞菌的获得能够丰富现有微生物制剂的种类，有效解决了现有菌剂环境适应性不强、耐盐度不高的问题。
附图说明
[0021]图1为本专利技术实施例提供的菌株XN05
‑
1在NA培养基上的菌落形态；
[0022]图2为本专利技术实施例提供的菌株XN05
‑
1的盐度耐受范围；
[0023]图3为本专利技术实施例提供的盐胁迫环境下菌株XN05
‑
1在野大豆根系的定殖情况；左边为对照，右边为接种菌株XN05
‑
1；
[0024]图4为本专利技术实施例提供的接种菌株XN05
‑
1后野大豆在盐胁迫下的生长情况；***表示P<0.001；**表示P<0.01。
具体实施方式
[0025]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0026]实施例1土壤样品采集
[0027]将盐胁迫后的野大豆植株连根拔起，抖落根部松散附着的土壤，将紧密附着的根际土样品放入无菌自封袋，低温运回实验室进行菌株分离培养。
[0028]实施例2施氏假单胞菌的筛选
[0029]2.1试剂：
[0030]NA培养基(g/L)：蛋白胨10.0，牛肉膏3.0，氯化钠5.0，琼脂粉20.0。
[0031]NB培养基(g/L)：蛋白胨10.0，牛肉膏3.0，氯化钠5.0。
[0032]盐度测试培养基(g/L)：蛋白胨10.0，牛肉膏3.0，不同浓度氯化钠0
‑
60g。
[0033]PKO无机磷培养基(g/L)：葡萄糖10.0，(NH4)2SO
4 0.5，MgSO4·
7H2O0.1，NaCl 0.2，KCl 0.2，FeSO4·
7H2O 0.003，MnSO4·
4H2O 0.03，Ca3(PO4)25.0，酵母粉0.5，琼脂20.0。
[0034]有机磷细菌培养基：购买自青岛海博生物技术有限公司。
[0035]改良CAS琼脂培养基：购自北京酷来搏科技有限公司。
[0036]其它生化试剂及普通化学试剂均为进口或国产分析纯。
[0037]2.2细菌的分离培养：
[0038]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri XN05
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1，其特征在于，保藏编号为CGMCC No.26683，于2023年02月27日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心。2.根据权利要求1所述的施氏假单胞菌XN05
‑
1，其特征在于，所述施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri XN05
‑
1具有SEQ ID NO.1所示核苷酸序列。3.根据权利要求1或2所述的施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri XN05
‑
1的PCR扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提取分离自土壤悬浊液中细菌菌株的基因组DNA；2)以细菌菌株的基因组DNA为模板，使用上游引物和下游引物，采用rTaq酶进行PCR扩增；其中：PCR反应体系为：2
×
Taq Master Mix 12.5μL、正反向引物(10μM)各1μL、DNA模板1μL、ddH2O 9.5μL，总体系25μL。4.根据权利要求3所述的PCR扩增方法，其特征在于，扩增条件为：95℃预...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑艳芬，张成省，李义强，李喆，王友强，周亚男，隋晓娜，赵栋霖，杨晏哲，
申请(专利权)人：中国农业科学院烟草研究所中国烟草总公司青州烟草研究所，
类型：发明
国别省市：