新颖的能够抑制TGF-β家族多于一种配体的双功能多特异性拮抗剂及其用途制造技术

本发明专利技术公开内容描述了新颖的能够以选择性方式中和TGF

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新颖的能够抑制TGF
‑
β
家族多于一种配体的双功能多特异性拮抗剂及其用途
[0001]相关专利申请
[0002]本申请要求于2020年11月15日提交的美国临时申请第63/113,920号和于2020年11月4日提交的美国临时申请第63/109,814号的权益，所述临时申请的每一项通过引用以其整体并入本文。

技术介绍

[0003]转化生长因子β(TGF
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β)超家族由TGF
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β蛋白、激活蛋白、生长分化因子(GDF)、骨形态发生蛋白(BMP)、胶质源性神经营养因子(GDNF)、抑制素、Nodal、Lefty和M
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lllerian抑制物质(MIS)组成。TGF
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β超家族的配体形成与异源二聚体受体复合物结合的二聚体，所述异源二聚体受体复合物由具有丝氨酸/苏氨酸激酶结构域的I型和II型受体亚单位组成。配体结合后，II型受体发生磷酸化并激活I型受体，启动诱导或阻遏转录活性的Smad依赖性信号传导级联。
[0004]TGF
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β(TGF
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β1、TGF
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β2和TGF
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β3)通过结合和激活细胞表面上的高亲和力受体TGFβRII和TGFβRIIB来介导Smad2/3信号传导。TGF
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β在宽范围的生物学活性，包括免疫功能、细胞增殖和分化、纤维生成、上皮
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间充质转化、造血、肌生成和骨重塑的调节中起着关键作用。TGF/>‑
β水平升高和因此增加的Smad2/3信号传导与许多疾病状况，包括癌症、纤维化、贫血、骨转移、骨损失、疼痛、肌肉损失、胰岛素抗性、慢性肾病、肝病和心血管疾病的发病机制和进展有关。
[0005]此外，作为TGF
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β超家族的亚组，激活蛋白和相关蛋白(包括激活蛋白A、激活蛋白B、激活蛋白AB、GDF
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8和GDF
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11)也通过结合和激活细胞表面上的其高亲和力受体ActRIIA和ActRIIB来介导Smad2/3信号传导。激活蛋白和相关蛋白调节宽范围的生物学活性，包括免疫功能、细胞分化、肌生成、纤维生成、骨重塑、造血和生殖生理学。卵泡抑素(FST)是一种分泌型糖蛋白，与激活蛋白和激活蛋白相关配体结合，负向控制其信号传导活性。激活蛋白和相关配体的过表达以及增加的Smad2/3信号传导与许多严重状况，诸如癌症、纤维化、贫血、骨转移、骨脆性、骨折、肌肉萎缩性紊乱(muscle wasting disorders)、恶病质、肺高压、疼痛、胰岛素抗性、慢性肾病、肝病、心肌梗死和心力衰竭的发病机制和进展有关。
[0006]TGF
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β/激活蛋白
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Smad2/3信号传导途径在纤维化的发病机制和进展中起中心作用。纤维化发病机制和进展潜在的一个关键机制是TGF
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β/激活蛋白
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Smad2/3信号传导的增加，这导致成纤维细胞的增殖和激活，并因此导致疾病组织中细胞外基质组分诸如COL1A1、COL1A2、COL3A1、COL5A2、COL6A1和COL6A3的过表达。证据指示，TGF
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β和激活蛋白两者在纤维化过程中均上调。当TGF
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β或激活蛋白升高时，可以引起成纤维细胞活化，导致纤维化。由于TGF
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β和激活蛋白两者均升高，因此重要的是不仅要抑制TGF
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β，还要抑制激活蛋白，以更有效地减弱纤维化。
[0007]TGF
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β/激活蛋白
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Smad2/3信号通路也在癌症的发病机制和进展中起重要作用，部分原因是其对肿瘤免疫监视的重要影响。TGF
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β和激活蛋白在各种癌症中高度过表达。癌症
微环境中TGF
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β和激活蛋白的过量产生导致调节性T细胞(Treg)中Smad2/3信号传导的激活，并引起它们的增殖和激活。Treg活性的增加继而引起CD8+细胞毒性T细胞的抑制，从而降低CD8+细胞毒性T细胞检测和消除癌细胞的能力。目前，许多免疫肿瘤学的临床试验正集中于TGF
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β抑制剂和T细胞检查点抑制剂(诸如抗PD1抗体和抗CTLA4抗体)。然而，值得注意的是，TGF
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β和激活蛋白两者在各种癌症中均高度过表达，并且像升高的TGF
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β一样，升高的激活蛋白或激活蛋白相关配体也可以通过激活Treg来抑制癌症免疫监视。因此，并行抑制升高的TGF
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β和升高的激活蛋白可以更有效地减弱Treg，并从而更有效地恢复癌症的免疫监视。因此，能够中和癌症中升高的TGF
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β(即，TGF
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β1、TGF
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β2和TGF
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β3)以及升高的激活蛋白(即，激活蛋白A、激活蛋白B和激活蛋白AB)的多特异性多肽拮抗剂可以为癌症治疗(包括与免疫检查点抑制剂组合的共治疗)带来更优的疗效和更好的响应率。
[0008]专利技术的公开内容
[0009]在一方面，本专利技术提供了新颖的基于多肽的多特异性拮抗剂分子，其被特别设计为以有效方式同时中和激活蛋白信号传导和TGF
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β信号传导。在各种实施方案中，多特异性拮抗剂分子被设计为如图1
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图4中描绘的。
[0010]在各种实施方案中，多特异性拮抗剂是包含特异性结合激活蛋白配体或激活蛋白相关配体的第一抗原结合分子(“激活蛋白结合多肽”)和特异性结合TGF
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β配体的第二抗原结合分子(“TGF
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β结合多肽”)的多特异性多肽分子。在各种实施方案中，“激活蛋白结合多肽”选自能够结合激活蛋白(即，激活蛋白A、激活蛋白B或激活蛋白AB)和/或激活蛋白相关配体(即，GDF8或GDF11)的任何多肽，其包括但不限于抗激活蛋白抗体(包括抗激活蛋白A抗体和抗激活蛋白B抗体)、抗激活蛋白抗体的片段、野生型激活蛋白2A型受体(ActRIIA)或激活蛋白2B型受体(ActRIIB)细胞外结构域(ECD)、修饰的ActRIIA和ActRIIB细胞外结构域、野生型和修饰的天然激活蛋白结合蛋白，诸如卵泡抑素、卵泡抑素样蛋白和前肽和噬菌体展示衍生的靶向激活蛋白或激活蛋白相关配体，并且“TGF
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β结合多肽”选自由以下组成的组：抗TGF
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β抗体、抗TGF
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β抗体的片段、野生型TGF
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β2型受体(包括TGFβRIIA和TGFβRIIB)细胞外结构域(ECD)、修饰的TGFβRIIA和TGFβRIIB细胞外结构域和噬菌体展示衍生的靶向TGF
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β配体的拮抗多肽。
[0011]在各种实施方案中，多特异性拮抗剂分子包含特异性结合激活蛋白或激活蛋白相关配体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】ID NO:15中列出的轻链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:14中列出的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:15中列出的轻链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:16中列出的重链可变区氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:17中列出的轻链可变区氨基酸序列的抗体；以及包含SEQ ID NO:16中列出的重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:17中列出的轻链可变区氨基酸序列的抗体。9.根据权利要求5
‑
8中任一项所述的分离的多特异性拮抗剂分子，其中所述TGF结合多肽是选自由以下组成的组的分离的抗体：包含SEQ ID NO:22中列出的重链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:23中列出的轻链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:22中列出的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:23中列出的轻链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:24中列出的重链可变区氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:25中列出的轻链可变区氨基酸序列的抗体；以及包含SEQ ID NO:24中列出的重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:25中列出的轻链可变区氨基酸序列的抗体。10.根据权利要求1
‑
2中任一项所述的分离的多特异性拮抗剂分子，其中所述多特异性拮抗剂分子包含选自由SEQ ID NO:54
‑
71中列出的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列。11.根据权利要求1
‑
2中任一项所述的分离的多特异性拮抗剂分子，其中所述多特异性拮抗剂多肽是包含选自由包含SEQ ID NO:72
‑
84中列出的氨基酸序列的重链组成的组的重链和选自由包含SEQ ID NO:11、13、15、17、19、21、23和25中列出的氨基酸序列的轻链组成的组的轻链的多肽分子。12.一种分离的双功能多特异性拮抗剂多肽，所述分离的双功能多特异性拮抗剂多肽包含特异性结合激活蛋白配体或激活蛋白相关配体的第一抗原结合多肽(“激活蛋白结合多肽”)和特异性结合TGF
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β配体的第二抗原结合多肽(“TGF
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β结合多肽”)和特异性结合T细胞免疫检查点PD
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1配体、PD
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L1配体或CTLA
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4配体的第三抗原结合多肽(“PD
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1/PD
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L1/CTLA
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4结合多肽”)，其中所述双功能多特异性拮抗剂分子同时抑制TGF
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β、激活蛋白与所述T细胞免疫检查点。13.根据权利要求12所述的分离的双功能多特异性拮抗剂分子，其中所述双功能多特异性拮抗剂分子包含特异性结合PD
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1配体的第三抗原结合多肽(“PD
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1结合多肽”)；其中所述PD
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1结合多肽是选自由以下组成的组的分离的多肽：包含SEQ ID NO:26中列出的重链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:27中列出的轻链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:26中列出的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:27中列出的轻链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:28中列出的重链可变区氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:29中列出的轻链可变区氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:28中列出的重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:29中列出的轻链可变区氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:30中列出的重链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:31中列出的轻链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:30中列出的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:31中列出的轻链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:32中列出的重链可变区氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:33中列出的轻链可变区氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:32中列出的轻链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:33中列出的轻链可变区氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:38中列出的重链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:39中列出的轻链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:38中列出的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:39中列出的轻链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:40中列出的重链可变区氨基酸序
列的抗体；包含SEQ ID NO:41中列出的轻链可变区氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:40中列出的重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:41中列出的轻链可变区氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:42中列出的重链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:43中列出的轻链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:42中列出的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:43中列出的轻链氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:44中列出的重链可变区氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO:45中列出的轻链可变区氨基酸序列的抗体；以及包含SEQ ID NO:44中列出的重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:45中列出的轻链可变区氨基酸序列的抗体。14.根据权利要求12所述的分离的双功能多特异性拮抗剂分子，其中所述双功能多特异性拮抗剂分子包含特异性结合CTLA
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4配体的第三抗原结合多肽(“CTLA
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4结合多肽”)；其中所述CTLA
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4结合多肽是选自由以下组成的组的分离的多肽：包含SEQ ID NO:34中列出的重链氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩汇泉，周小岚，
申请(专利权)人：周小岚，
类型：发明
国别省市：